4. Ý nghĩa lý luận và thực tiễn của đề tài
3.2.2. Xử lý màng sau lên men
Màng BC sau khi lên men được xử lý theo các phương pháp xử lý như đã nói ở phần trên. Qua nghiên cứu, màng BC sau khi được xử lý bước đầu đã đáp ứng được đủ các chỉ tiêu của vật liệu sử dụng trong trị bỏng.
Như vậy, quá trình thu nhận màng BC từ chủng A.xylinum BHN2 cần trải qua 2 quá trình là lên men tạo màng và xử lý màng sau lên men.
Hình 3.5. Màng BC sau khi xử lý
3.3. Lựa chọn phƣơng pháp xử lý bảo quản màng BC
3.3.1. Lựa chọn phương pháp xử lý màng BC
Do màng BC khi được tạo thành có khá nhiều thành phần dư của môi trường bám vào nên mục đích của quá trình xử lý màng là loại bớt các sản phẩm dư, giảm độ pH, làm sạch khuẩn đồng thời phần nào giúp màng đạt được hiệu quả về mặt cảm quan: màng trắng trong, dai và bền hơn. Song màng BC nghiên cứu ứng dụng chủ yếu trong trị bỏng vì vậy các bước xử lý màng phải đơn giản, hiệu quả và ít tốn kém.
3.3.1.1. Mô hình 1
a. Khả năng ngăn cản vi khuẩn
Khi bị bỏng nếu bị nhiễm khuẩn thì vết bỏng sẽ bị loét rộng, không có khả năng tái sinh mô, khả năng lành vết thương kém hơn,…Vì vậy, một trong các đặc tính của màng BC dùng cho việc trị bỏng là phải có khả năng ngăn cản vi khuẩn, tạo điều kiện trong trị bỏng.
Phương pháp tiến hành: Phủ màng đã xử lý theo mô hình 1 lên hộp petri có chứa môi trường dinh dưỡng, đối chiếu với hộp petri có phủ gạc vô trùng và hộp để ngoài không khí trong thời gian 6 ngày.
Hình 3.6a. Độ pH của màng sau xử lý MH1
Hình 3.6b. Bản thạch đƣợc che phủ bởi màng BC qua xử lý MH1
Qua hình 3.6b nhận thấy trên hộp petri phủ màng BC đã xử lý qua mô hình 1 không có nấm mốc xuất hiện và số khuẩn lạc vi khuẩn mọc ít và ít hơn 2 mẫu còn lại.
Như vậy, màng BC sau xử lý theo mô hình 1 có khả năng ngăn cản vi khuẩn song trong quá trình xử lý vẫn chưa loại bỏ hết vi khuẩn trên màng.
b. Khả năng thấm hút nước của màng BC
Khả năng thấm hút nước là một trong những tiêu chuẩn quan trọng của màng trị bỏng vì khi đắp màng lên vết bỏng màng sẽ thấm hút dịch rỉ của vết thương nhưng vẫn làm vết thương có đủ độ ẩm để tạo điều kiện tái sinh mô.
Phương pháp tiến hành: màng sau xử lý đem sấy khô ở 40o
C trong 24h theo mô hình 1 cân khối lượng (m1) sau đó ngâm màng trong nước trong thời gian 2h, 4h, 6h, 8h, 12h và cân khối lượng màng trong các khoảng thời gian trên.
Bảng 3.2. Khả năng thấm hút nước của màng sau xử lý MH1 (g/100cm2)
Mẫu Thời gian (giờ)
0h 2h 4h 6h 8h 10h 12h Mẫu 1 0,08 1,48 1,83 2,69 3,14 3,35 3,78
Mẫu 2 0,08 2,05 2,95 3,47 3,87 4,27 5,06
M 0 1,68 2,31 3,00 3,43 3,73 4,34
Qua bảng 3.2 ta thấy màng BC sau xử lý mô hình 1 có khả năng thấm hút nước rất tốt, sau 6h khối lượng nước hút vào là 3,00 g/ cm2
đến 12h đã là 4,34 g/cm2.
c. Đặc điểm của màng sau xử lý
Một số tiêu chí để đánh giá màng sau sau xử lý:
Màu sắc: màng BC khi mới tổng hợp từ môi trường lên men có màu hơi đục sau khi được xử lý có màu trắng, việc này hết sức cần thiết đối với vật liệu trị bỏng vì trong quá trình điều trị bỏng cần quan sát và theo dõi tiến trình lành vết thương của vết bỏng.
Mùi vị: màng BC trước khi xử lý có mùi hơi chua của giấm, sau xử lý màng không có mùi.
Độ pH: màng mới tổng hợp từ quá trình nuôi cấy có pH thấp do ở chứa
dịch nuôi cấy có chứa acid acetic. Màng sau xử lý có độ pH trung tính, không gây kích ứng cho da.
Dựa vào những tiêu chí trên tôi tiến hành kiểm tra màng sau xử lý theo mô hình 1. Kết quả được thể hiện trong bảng sau:
Bảng 3.3. Đặc điểm của màng sau xử lý MH1
STT Đặc điểm của màng Kết quả
1 Màu sắc Trắng đục
2 Mùi vị Mùi dễ chịu
3 Độ dai Màng dễ rách
Xử lý màng theo mô hình 1 có những ưu, nhược điểm sau:
Ƣu điểm:
Đơn giản, các thao tác dễ thực hiện. Xử lý màng nhanh.
Màng có khả năng chống nấm mốc.
Màng đạt được một số tiêu chí về độ dai, mùi vị.
Nhƣợc điểm:
Chưa loại hết được vi khuẩn bám trên màng. Màng sau xử lý mủn, dễ rách.
3.3.1.2.Mô hình 2
a. Khả năng ngăn cản vi khuẩn
Phương pháp tiến hành tương tự như mô hình 1. Kết quả được thể hiện ở hình 3.7a như sau:
Hình 3.7a. Bản thạch che phủ màng BC qua xử lý MH2
Hình 3.7b. Độ pH của màng sau xử lý MH2
Sau 6 ngày không thấy xuất hiện vi khuẩn, nấm mốc trên hộp phủ màng BC trong khi đó 2 hộp còn lại đều xuất hiện vi khuẩn, nấm mốc.
b. Khả năng thấm hút nước của màng
Phương pháp tiến hành tương tự như mô hình 1
Bảng 3.4. Khả năng thấm hút nước của màng sau xử lý MH2 (g/100cm2)
Mẫu Thời gian (giờ)
0h 2h 4h 6h 8h 10h 12h Mẫu 1 0,08 0,72 0,88 1,35 1,67 2,23 2,55
Mẫu 2 0,08 0,64 0,72 0,78 1,11 1,35 1,83
M 0 0,60 0,72 0,98 1,31 1,71 2,11
Qua bảng 3.4 ta thấy màng sau xử lý theo mô hình 2 có khả năng thấm hút nước khá tốt. Sau 2h khối lượng hút vào là 0,60 g/cm2 sau 6h là 0,985 g/cm2 và đến 12h là 2,11 g/cm2.
c. Đặc tính của màng sau xử lý
Phương pháp tiến hành tương tự như mô hình 1. Kết quả được thể hiện ở bảng sau:
Bảng 3.5. Đặc điểm của màng sau xử lý theo MH2 (g/100cm2)
STT Đặc điểm của màng Kết quả
1 Màu sắc màng Trắng đục
2 Mùi vị Không mùi
3 Độ dai Dai
4 Độ pH màng 3 - 4
Xử lý màng theo mô hình 2 có ưu, nhược điểm sau:
Ƣu điểm:
Quy trình xử lý đơn giản.
Màng có khả năng ngăn cản vi khuẩn, nấm mốc. Màng có khả năng thấm hút khá tốt.
Nhƣợc điểm:
3.3.1.3.Mô hình 3
a. Khả năng ngăn cản vi khuẩn
Tôi tiến hành thí nghiệm tương tự như mô hình 1 sau 6 ngày không thấy xuất hiện vi khuẩn, nấm mốc trong khi 2 hộp được che phủ gạc vô trùng và không che phủ đều nhiễm vi khuẩn và nấm mốc.
Hình 3.8a. Bản thạch không đƣợc che phủ
Hình 3.8b. Bản thạch đƣợc che đƣợc che phủ bởi gạc vô trùng
Hình 3.8c. Bản thạch che phủ Hình 3.8d. Độ pH của màng sau màng BC qua xử lý MH3 xử lý MH3
b.Khả năng thấm hút nước
Phương pháp tiến hành tương tự như mô hình 1. Kết quả được thể hiện trong bảng sau:
Bảng 3.6. Khả năng thấm hút nước của màng sau xử lý MH3 (g/100cm2)
Mẫu Thời gian (giờ)
0h 2h 4h 6h 8h 10h 12h Mẫu 1 0,46 2,51 2,98 3,25 4,24 5,05 6,98
Mẫu 2 0,36 2,44 2,90 3,22 4,10 4,85 5,37
M 0 2,06 2,53 2,82 3,78 4,54 5,76
Màng BC sau khi xử lý qua MH3 có khả năng thấm hút nước rất tốt, sau 8h khối lượng nước hút vào là 3,78 g/cm2, đến 12h đã là 5,76 g/cm2
.
c. Đặc tính của màng sau xử lý
Màng thu được sẽ màng xử lý theo mô hình 3, theo các bước sau:
STT Cách xử lý Kết quả
1 Rửa sạch bằng nước máy nhiều lần.
Loại bỏ bớt acid acetic và các thành phần dư từ môi trường.
2 Đun với nước 100o
C trong 5- 7 phút.
Tẩy trắng màng, giảm vi khuẩn trên màng.
3
Đun với NaOH 0,5N ở 1000C trong thời gian 5-10 phút.
Loại bỏ chất dư thừa và tẩy trắng màng đồng thời làm chết tế bào vi khuẩn trên màng. Màng có màu vàng, mùi khét, dai.
4 Rửa sạch bằng nước máy nhiều lần.
Màng có màu trắng, dai, pH kiềm
5
Trung hoà bằng acid citric loãng và thử lại bằng giấy quỳ.
Bảng 3.7. Đặc tính của màng sau xử lý MH3
STT Đặc điểm của màng Kết quả
1 Màu sắc màng Trắng trong
2 Mùi vị Không mùi
3 Độ dai Dai
4 Độ pH màng 6
Xử lý màng theo mô hình 3 có ưu điểm, nhược điểm sau:
Ƣu điểm:
Phương pháp xử lý hiệu quả.
Màng có khả năng ngăn cản vi khuẩn, nấm mốc tốt.
Màng có khả năng thấm hút nước rất tốt, độ pH trung tính. Màng có độ dai, dày thích hợp làm màng trị bỏng.
Nhƣợc điểm: Quy trình xử lý khá phức tạp.
Sau khi xử lý màng theo 3 mô hình, dựa vào các tiêu chí của màng sau xử lý như khả năng ngăn cản vi khuẩn, khả năng thấm hút nước, các đặc tính của màng,…tôi nhận thấy mô hình là mô hình xử lý màng có hiệu quả nhất vì quy trình xử lý đạt hiệu quả rất tốt màng có khả năng ngăn cản vi khuẩn và thấm hút nước rất tốt, màu trắng trong, pH trung tính,vô khuẩn,…rất thích hợp cho việc điều trị bỏng.
Vì vậy, tôi quyết định sử dụng phương pháp xử lý màng BC theo mô hình 3 cho các nghiên cứu tiếp theo. Cụ thể: đầu tiên rửa nhiều lần với nước máy, tiếp theo đun với nước 100oC trong 5 – 7 phút, sau đó đun với NaOH 0,5N ở 100oC trong 5 – 10 phút, tiếp tục rửa sạch lại với nước máy nhiều lần, cuối cùng trung hòa bằng acid citric loãng.
3.3.2. Lựa chọn phƣơng pháp bảo quản màng BC
Màng BC sau khi đã xử lý cần tiến hành bảo quản để kéo dài thời gian sử dụng và làm đa dạng hóa sản phẩm. Tôi tiến hành theo 2 hướng: sấy khô và kết hợp với ngâm, tẩm với mật ong, dịch nghệ tươi.
3.3.2.1. Phương pháp sấy khô
Hình 3.9. Màng BC đã sấy khô
Màng sau khi được tẩy rửa và khử khuẩn sẽ được sấy khô ở nhiệt độ 40oC trong 24 giờ. Lúc này: màng BC mỏng và rất dai; thời gian bảo quản dài: khoảng 6 tháng, chịu lực tốt hơn màng BC không sấy. Nhưng lưu ý khi dùng phải ngâm, tẩm với nước cất.
3.3.2.2. Bảo quản với chất phụ gia
Màng BC sau khi sấy bớt nước được đem ngâm tẩm với chất phụ gia (mật ong, dịch nghệ) trong thời gian 12 giờ ở nhiệt độ phòng. Chúng tôi tiến hành kiểm tra khả năng thấm hút của màng BC đối với các chất này. Cụ thể:
Khả năng thấm hút mật ong
Mật ong được biết đến nhiều nhất vì tính sát trùng, kháng sinh và chống nấm. Vì thế nó thường được dùng điều trị cho những vết thương hở. Nó hữu ích khi làm sạch hoặc khử trùng các vết thương và vết bỏng vì có thể hút hơi ẩm từ không khí và đẩy mạnh khả năng làm lành vết thương.
Phương pháp tiến hành tương tự như nghiên cứu khả năng thấm hút của nước. Cân khối lượng màng lần lượt trong các khoảng thời gian 2h, 4h, 6h, 8h, 10h, 12h.
Kết quả được trình bày ở bảng sau:
Bảng 3.8. Khả năng thấm hút mật ong của màng BC (g/100cm2)
Mẫu Thời gian (giờ)
0h 2h 4h 6h 8h 10h 12h
Mẫu 1 0,17 1,64 1,77 1,88 2,57 2,91 3,31
Mẫu 2 0,17 1,65 1,87 2,10 3,09 3,21 3,54
M 0 1,47 1,65 1,82 2,66 2,89 3,26
Qua bảng trên ta thấy sau khi ngâm 6 giờ màng BC thấm hút được 1,82 g/100cm2 mật ong, sau 12 giờ hút được 3,26 g/100 cm2.
Như vậy, màng BC có khả năng thấm hút mật ong khá tốt. Mặt khác, màng sau khi thấm có độ dai cao, màng trắng dễ quan sát tình trạng vết thương, đạt về mặt cảm quan. Tuy nhiên, màng sau khi tẩm mật ong có mùi thơm nên dễ thu hút kiến và côn trùng.
Khả năng thấm hút nghệ
Nghệ giàu kali và sắt, đặc biệt là thành phần chính curcumin có khả năng chống oxy hóa, kháng viêm mạnh, ức chế tế bào ung thư, liền sẹo, chống lão hóa, ngừa nếp nhăn,…
Khảo sát khả năng thấm hút nghệ tương tự như phương pháp tiến hành với mật ong.
Kết quả được trình bày ở bảng sau:
Bảng 3.9. Khả năng thấm hút nghệ của màng BC (g/100cm2)
Mẫu Thời gian (giờ)
0h 2h 4h 6h 8h 10h 12h
Mẫu 1 0,21 1,55 1,86 1,93 2,25 2,56 2,85
Mẫu 2 0,32 1,90 2,34 3,48 4,00 4,48 4,84
Qua bảng trên ta thấy khả năng thấm hút nghệ của màng BC tốt, sau 6h khối lượng nước nghệ tươi thấm hút được là 2,44 g/cm2 và đến 12h đã là 3,58 g/cm2. Màng sau khi thấm dai, tuy nhiên màng từ màu trắng trong chuyển màu của nghệ khó quan sát tình trạng vết thương.
Khả năng thấm hút dung dịch nước muối sinh lý
Dung dịch nước muối sinh lý (NaCl 0,9%) có tác dụng sát khuẩn nhẹ, là dung dịch đẳng trương có áp suất thẩm thấu xấp xỉ với dịch trong cơ thể người.
Phương pháp tiến hành tương tự 2 phương pháp trên. Kết quả được trình bày ở bảng sau:
Bảng 3.10. Khả năng thấm hút nước muối sinh lý NaCl 0,9% của màng BC (g/100cm2)
Mẫu Thời gian (giờ)
0h 2h 4h 6h 8h 10h 12h
Mẫu 1 0,16 1,18 1,49 1,56 2,06 2,10 2,36
Mẫu 2 0,16 1,19 1,67 1,71 2,13 2,25 2,77
M 0 1,02 1,42 1,47 1,93 2,02 2,41
Qua bảng trên ta thấy khả năng thấm hút dung dịch nước muối sinh lý của màng BC tương đối tốt, sau 6h màng thấm hút được 1,47 g/cm2 đến 12h là 2,41 g/cm2. Màng sau khi thấm hút có màu trắng trong tuy nhiên màng có độ dai kém.
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 0h 2h 4h 6h 8h 10h 12h Thời gian Lư ợn g c h ất h ú t v ào (g am) Mật ong Nuớc nghệ tươi Nước muối sinh lý
Hình 3.10. Đồ thị biểu diễn khả năng thấm hút chất phụ gia của màng BC
Qua hình 3.10 thông qua việc khảo sát khả năng thấm hút của màng BC với các chất phụ gia ta nhận thấy: màng BC có độ thấm hút với nước nghệ tươi và mật ong là tương đối như nhau, màng sau khi ngâm đạt về cảm quan; kém nhất đối với nước muối sinh lý NaCl 0,9%, màng có khả năng chịu lực kém hơn khi so với ngâm mật ong và nghệ.
So với màng BC sấy khô thì màng BC tẩm chất phụ gia có ưu điểm: khi dùng không cần ngâm, tẩm; đều là phương pháp dùng màng BC ướt; màng vẫn đạt được độ dai rất tốt. Tuy nhiên, thời gian bảo quản ngắn chỉ được khoảng 3 tháng.
Vì vậy, tôi lựa chọn nước nghệ tươi và mật ong làm chất phụ gia trong đóng gói, bảo quản màng BC.
Hình 3.11a. Màng thấm hút mật ong Hình 3.11b. Màng thấm hút nghệ
Hình 3.11c. Màng thấm hút NaCl 0,9% 3.4. Kết quả kiểm tra tính kích ứng của màng BC trên thỏ
Kiểm tra tính kích ứng của màng với dung môi chiết màng là dung dịch nước muối sinh lý NaCl 0,9%. Thử nghiệm được tiến hành trên thỏ, dùng đuờng tiêm trong dịch chiết từ màng BC.
Kết quả cho thấy dịch chiết màng BC khi tiêm trên da thỏ không gây các triệu chứng kích thích như phù, ban đỏ, không gây kích ứng da.
Hình 3.12. Thử tính kích ứng của màng
1. Vết tiêm dịch chiết màng BC 2. Vết tiêm dung dịch NaCl 0,9%
3.5. Kết quả thử nghiệm tác dụng của màng BC lên vết bỏng
Tiến hành thử nghiệm trên thỏ khỏe mạnh, có trọng lượng 2kg. Đầu tiên cạo sạch 1 vùng lông thỏ ở vùng lưng và đùi có kích thước 6 × 6, lau sạch bằng vải mềm. Sau đó tiến hành gây bỏng độ II cho thỏ.
Quan sát tình trạng vết bỏng
Nguyên tắc cơ bản trong điều trị vết thương bỏng là phải điều trị nhiễm khuẩn gắn liền phục hồi biểu mô ở bỏng nông, loại trừ tổ chức hoại tử và tạo điều kiện cho phát triển tổ chức hạt, biểu mô hoá phủ kín và liền sẹo tốt. Trên