Hệ 3: Cloroíor m Ethylacetat [9:1].
3.2.7.Phân lập các chất từ sản phẩm thuỷphân của cắn B bằng sắc kỷ cột
kỷ cột
* Chuẩn bị sắc ký cột như đã được trình bày ở phần [3.2.4].
* Chuẩn bị hỗn hợp chất cần tách: Hoà tan sản phẩm thuỷ phân của cắn B trong một lượng tối thiểu Cloroíorm, rồi trộn với một lượng Silicagen thành bột tơi khô (Bột B- S).
* Đưa chất lên cột: Cột sau khi đã được ổn định, đưa phần bột (B - S) đã chuẩn bị ở trên vào cột, dàn đều thành một lớp mỏng rồi phủ nhẹ lên bề mặt một lớp Silicagen.
* Khai triển cột và rửa giải cột: dùng hệ dung môi Cloroíorm: Methanol với tỷ lệ thay đổi dần từ [100: 0]; [98:02] đến [90: 10]. Kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi: n-Hexan: Aceton [4: 1], theo dõi từ đó gộp được các ống có số vết với Rf tương tự nhau, được 5 phân đoạn. Trong đó phân đoạn 1 (từ ống 1 đến 7) có một vết, phân đoạn 2, 3, 4, 5 có nhiều vết nên ta lấy phân đoạn 1.
Phân đoạn 1 để dung môi bay hơi tự nhiên thu được một chất tinh thể hình kim không màu, đặt tên là LC2.
* Nhận dạng chất LC2:
- LC2 là chất tinh thể hình kim không màu, tan trong cloroíorm. * Kiểm tra độ tinh khiết của chất LC2 bằng SKLM
- Lấy một ít tủa LC2 hoà vào cloroíorm, chấm SKLM với bản mỏng Silicagen G tráng sẵn (đã được hoạt hoá ở 110°C/30’).
- Khai triển bằng 3 hệ dung môi:
Hệ 2: Cloroíòrm: Aceton [9: 1] Hệ 3: Cloroíòrm: Ethylacetat [9: 1] - Hiện màu bằng:
+ Thuốc thử Vanilin 5% trong cồn tuyệt đối có acid H2S 0 4 đặc. + Hơi Iod.
*Kết quả sắc ký được thể hiện ở bảng 8.
Bảng 8: Kết quả sắc kỷ lớp mỏng của chất LC2
Hệ Rf X 100 X = 366 nm T.T Vanilin 5% l cồn Hơi Iod
1 36 Xanh lơ Xanh Nâu
2 75 Xanh lơ Xanh Nâu
3 77 Xanh lơ Xanh Nâu
* Khi đo phổ tử ngoại và hồng ngoại cho các kết quả sau:
- Phổ tử ngoại của chất LC2 có các đỉnh ở bước sóng 240 nm và 273 nm. - Phổ hồng ngoại của chất LC2 có các đỉnh: 1460,03 cm '1, 2854,37 cm '1, 2926,61 cm-1.
* Nhân xét: Với quy trình chiết xuất và tách như trên, chúng tôi đã thu được chất LC2. Khi kiểm tra độ tinh khiết của chất LC2 bằng sắc ký lớp mỏng với 3 hệ dung môi khác nhau với các thuốc thử hiện màu khác nhau đều cho một vết. Do vây có thể nói chất LC2 đạt độ tinh khiết cần thiết.
t i ình 5 : Phô tứ ngoại cua chát LC2
0.0107 122 SBU 2.0 800.00
ftBS____________ ĩ Q.QQQQ -> 1.QQQ0__________ NML : 190.00 “> 800.00
B a s e l i n e E r a s e Ụ i e u R e - s c a ĩ ẽ Zoom C u r s o r ilEVBir M ore
U r i t e l a b e l s ,on t h e g r a p h ___________________________________________________________________ Hình 6 : Phổ hồng ngoại của chất LC2 LC2- HANG FiND PEAKS: Spectrum: LC2 - HANG Region: 4000.00 400.00 Absolute threshold: 87 469 Sensitivity: 50 Peak list: Position: 2926.61 Intensity: Position: 2854 37 Intensitv:
Number of sample scans: 32 Number of background scans: 32 Resolution: 4.000 Samplegain: 2.0 Mirror velocity: 0.6329 Aperture: 95.00 55.835 72*915 Detector: DTGS TEC