01: Rừng ngập mặn 02: đền bà đế
3.3.2. Môi trường phân lập và làm giàu.
Vi khuẩn ôxy hoá sulfur sau khi được làm giàu bằng môi trường Thiosulfate dịch sẽ được phân lập trên thạch đĩa bằng phương pháp cấy trải và ria cấy 3 pha. Chọn khuẩn lạc đặc trưng dựa trên đặc điểm hình thái, kích thước, màu sắc để thuần
Thử khả năng làm giảm pH của một số chủng
Chuyển vào mt dịch thể Na2S2O3
Sau 1-3 ngày ktra nồng độ SO42-
tăng lên trong mt Chọn kl có hoạt tính cao
Giữ giống Xác định hình thái, test
sinh hóa, sinh lí, phân loại Khả năng xử lý H2S trong mt bị ô
khiết và test hoạt tính để nghiên cứu khả năng xử lý H2S trong môi trường nước bị ô nhiễm.
Môi trường Thiosulfate dịch thể phân lập vi khuẩn oxy hóa sulfur
Na2S2O3.5 H20 5 g K2HP04 0.1g NaHC03 0.2g NH4Cl 0.1 g Bromophenol(chất chỉ thị màu) Nước 1 lít
Làm môi trường thạch thì thêm 2-3% khối lượng thạch theo thể tích môi trường dịch thể, chú ý chuẩn pH= 7-7,2
Môi trường dịch thể phân lập vi khuẩn oxy hóa sulfur
NH4Cl 0.4g MgCl2.6 H20 0.2g KH2P04 1.2g Na2HP04 1.2g Na2S2O3.5 H20 5g MgS04.7H20 0.01g Nước 1lit
Làm môi trường thạch thì thêm 2-3% khối lượng thạch theo thể tích môi trường dịch thể
Khi làm môi trường, chú ý điều chỉnh pH về 7 -7,2
Các loại môi trường sau khi pha cần hấp khử trùng 1210C,15 phút, dry: 15 phút
Thử khả năng làm giảm pH của một số chủng vi khuẩn
Trong các thử nghiệm phân lập được lấy từ các mẫu khác nhau của vi khuẩn oxy hóa lưu huỳnh vừa bị oxy hóa. Trong số đó, chủng phân lập được lựa chọn dựa trên khả năng giảm độ pH tốt hơn trên xanh bromophenol chứa sulfur oxy hóa tròn dịch thể bằng cách thay đổi màu sắc của các môi trường nuôi cấy từ màu xanh tím sang màu vàng nhạt dần. Những vi khuẩn này được coi là vi khuẩn lưu huỳnh nguyên tố ôxi hóa hiệu quả. Các sulfur oxy hóa của vi khuẩn phân lập được từ các
trường thiosulphate trong vòng 1 tuần. Giảm độ pH của môi trường phát triển của vi khuẩn lưu huỳnh oxy hóa cũng đã được báo cáo bởi Donati et al. [14]. Việc giảm độ pH của môi trường là do sự sản xuất axit sunfuric.
Xác định nồng độ SO4 2- theo phương pháp tạo thành theo qui định của Hiệp Hội Cộng Đồng sức khỏe Mỹ đối với nước và nước thải.
Nguyên tắc: Lượng SO42- cần xác định kết hợp với ion Ba2+ để tạo thành kết tủa BaSO4 sau đó được xác định thông qua mật độ quang ở bước sóng 420nm
Hóa chất: Thuốc thử: Hòa tan 75g NaCl với 50 ml glycerol, 30 ml axit clohydric đặc, 100 ml isopropyl và 100 ml nước cất.
Stock MgSO4 1000 ppm: Hòa tan 0,1025 MgSO4.7H2O trong 50 ml nước cất.
Xây dựng đường chuẩn sulfate
Từ dung dịch stock tạo ra 6 ống nghiệm tiêu chuẩn với nồng độ 10, 20, 40, 60, 80, 100 mg/l. Bổ sung vào mỗi ống nghiệm tiêu chuẩn 5 ml nước cất và 2,5ml thuốc thử, rồi khuấy nhẹ.
Mẫu đối chứng là nước cất và tiến hành tương tự như mẫu thí nghiệm. Bổ sung vào mỗi ống nghiệm 0,75g BaCl2 rồi khuấy nhẹ trong vòng 1 phút.
Cuối cùng, tiến hành xác định hàm lượng sulfate trên máy quang phổ tại bước sóng 420nm. Từ các kết quả đo được, ta lập được đường chuẩn sulfate như:
Cách xác định hàm lượng sulfate
Mẫu thí nghiệm: Hút 5ml dịch nuôi rồi bổ sung thêm 5 ml nước cất và 2,5ml thuốc thử, rồi khuấy nhẹ. Sau đó, bổ sung 0,75g BaCl2 vào rồi khuấy nhẹ trong vòng 1 phút. Cuối cùng, tiến hành xác định hàm lượng sulfate trên máy quang phổ tại bước sóng 420 nm.
Mẫu đối chứng: làm tương tự như vậy môi trường nuôi cấy. Lượng sulfate được tính theo đường chuẩn sulfate:
Hàm lượng sulfate (mg/l) = 524.35*x – 5.89 Trong đó, x: chỉ số OD 420
Biểu đồ 3.1: Đường chuẩn xác định nồng độ sunfat.
Kết quả sau đó được xử lý bằng phần mềm Microsoft office excel.