2. Cách tiến hành
2.3. Làm môi trường
- Bước 1:Ngâm thóc
+ Cân khối lượng thóc cần xử lý cho vào thau nhựa (hình 3.5).
+ Ngâm thóc trong nước sạch (hình 3.6), thời gian ngâm từ 12 đến 16 giờ để thóc ngấm đủ nước.
Hình 3.5.Cân thóc Hình 3.6. Ngâm thóc + Rửa thóc bằng nước sạch sau
khi ngâm đủ thời gian nhằm loại bỏ hạt lép lửng và khử mùi chua.
- Bước 2: Luộc thóc
+ Cho thóc vào nồi luộc và thêm nước sạch cho đến khi ngập thóc (hình 3.8);
+ Tiến hành luộc thóc cho đến kho vỏ trấu mở khoảng 1/3, kiểm tra không còn lõi trắng ở giữa là đạt yêu cầu.
* Chú ý: Thường xuyên khuấy đảo trong quá trình luộc để độ nở hạt thóc đều nhau (hình 3.9).
Hình 3.8. Cho thóc và nước vào nồi luộc
Hình 3.9. Khuấy đảo thóc trong khi luộc
+ Vớt thóc luộc ra các rổ rá để nguội đến nhiệt độ 45 – 500
C.
Hình 3.10. Làm nguội thóc sau luộc - Bước 3: Phối trộn thóc và bột nhẹ
+ Cân khối lượng thóc sau khi luộc cho vào thau nhựa;
Hình 3.11. Cân thóc sau khi nguội + Cân bột nhẹ: tỉ lệ tương ứng
với lượng thóc đã luộc theo công thức môi trường.
+ Cho bột nhẹ vào thóc đã luộc và trộn đều bằng tay.
* Chú ý: Kiểm tra độ ẩm thóc từ 65 - 70% là đạt yêu cầu.
Hình 3.13. Phối trộn bột nhẹ vào thóc luộc - Bước 4: Phân phối hỗn hợp thóc và
bột nhẹ vào chai.
+ Cho hỗn hợp đã phối trộn vào các chai thủy tinh hoặc chai nhựa, lượng thóc mỗi chai khoảng 300 – 350gam.
Hình 3.14.Cho hỗn hợp vào chai + Đậy miệng chai bằng nút
bông. Nút bông được làm từ bông không thấm nước, cuộn lại, không quá chặt hay quá lỏng, phần đầu tròn đặt vào phía trong.
Hình 3.15. Làm nút bông chai môi trường + Đậy nút bông chai môi
trường bằng giấy bọc hoặc nắp nhựa.
Hình 3.16. Đậy nắp chai môi trường
2.4. Tiệt trùng môi trường nhân giống nấm cấp II
Thiết bị tiệt trùng: nồi áp suất hoặc nồi autoclave
Chế độ tiệt trùng: nhiệt độ 1210C trong thời gian 90 phút.
* Phương pháp tiệt trùng môi trường bằng nồi áp suất: tương tự như tiệt trùng môi trường nhân giống nấm cấp I.
* Phương pháp tiệt trùng môi trường bằng nồi autoclave, cách tiến hành theo trình tự như sau:
- Bước 1: Chuyển các chai môi trường vào giỏ hấp.
Hình 3.17. Chai môi trường trong giỏ hấp - Bước 2: Kiểm tra nước trong nồi hấp và
chuyển giỏ môi trường vào nồi hấp.
Hình 3.18.Chuyển môi trường vào nồi - Bước 3: Đậy nắp nồi và tiến hành hấp thanh
trùng ở nhiệt độ 1210C trong thời gian 90 phút.
Hình 3.19. Đậy nắp nồi hấp - Bước 4: Lấy chai môi trường ra khỏi
nồi khi nhiệt độ trong nồi còn 50 - 600
C, tháo bỏ giấy bọc hoặc nắp nhựa đậy nút bông và chuyển các chai môi trường vào phòng cấy giống.
Hình 3.20. Chai môi trường sau khi hấp - Bước 5: Kiểm tra độ vô trùng của các chai môi trường sau khi hấp
+ Để 2 – 3 chai ở điều kiện nhiệt độ bình thường;
+ Sau 7 ngày không thấy có xuất hiện các màu sắc lạ như: đốm đen, xanh hoặc chuyển màu khối môi trường thì môi trường hấp đã đạt yêu cầu;
+ Nếu ngược lại là môi trường chưa đạt yêu cầu.