Phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu phẩm chất hạt gạo

2.3.4.1 Phương pháp xác định hàm lượng Amylose

Xác định hàm lượng Amylose theo phương pháp Cagampang and Rodriguez (1980).

* Bước 1: Chuẩn bị các dung dịch - Ethanol 95%

- HCl 30% - NaOH 1N

- Dung dịch Iod (0,2% I2 và 2% KI) * Bước 2: Chuẩn bị mẫu

- Cân 50 mg bột nhũ đã nghiền mịn cho vào ống 50 ml. - Thêm 0,5 ml ethanol 95% lắc nhẹ cho tan đều.

- Thêm 9,5 ml NaOH 1N. Để qua đêm ở nhiệt độ phòng. * Bước 3: Pha loãng mẫu và đo mẫu

- Rút 100 µl dung dịch mẫu cho vào bình định mức 25 ml (đối với mẫu thử thay dung dịch mẫu bằng 100l NaOH 1N).

- Thêm nước cất khoảng 1/2 bình, lắc đều. - Thêm 250 µl HCl 30% lắc đều.

- Thêm nước cất đến vạch định mức.

- Chuyển sang ống 50 ml và lắc đều, để yên 30 phút.

- Lắc đều trước khi đưa vào cuvette. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 580 nm. * Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả

Đường chuẩn có dạng: Y = aX+b Trong đó: Y: Độ hấp thụ OD

X: Lượng amylose có trong 1 ml mẫu, đọc từ máy (%A) Tính hàm lượng amylose theo công thức: % Amylose 100

TLM X

Trong đó: TLM: Trọng lượng mẫu lúc cân quy về ẩm độ 14%

Sau đó đánh giá hàm lượng amylose theo thang đánh giá hàm lượng amylose của IRRI (1988) ở Bảng 2.2

Bảng 2.2 Thang đánh giá hàm lượng amylose (IRRI, 1988)

Phân nhóm Hàm lượng amylose (%)

Gạo nếp 0 - 2 Gạo tẻ: - Rất thấp - Thấp - Trung bình - Cao 3 - 9 10 - 19 20 - 25 >25

2.3.4.2 Phương pháp xác định hàm lượng Protein

Tiến hành theo phương pháp Lowry O.H.et al.,(1951). * Bước 1: Chuẩn bị dung dịch ly trích

- Dung dịch NaOH 0,1N.

- Dung dịch A (Na2CO3 2% + Na-K-tatrate 0,05% + NaOH 0,1N). - Dung dịch B (CuSO4 0,1%).

- Dung dịch C (A:B = 45:5). - Dung dịch Folin 1N

* Bước 2: Chuẩn bị mẫu

- Cân 10 mg bột gạo + 1 ml NaOH 0,1N. - Lắc ít nhất 2 giờ hay để qua đêm.

* Bước 3: Pha loãng mẫu và đo

- Vortex mẫu sau đó ly tâm mẫu 14.000 vòng/phút trong 3 phút.

- Rút 100 µl mẫu cho vào ống 10 ml. Đối với mẫu blank, thay dung dịch ly trích bằng 100 µl NaOH 0,1N.

- Thêm 1 ml nước cất, lắc đều. - Thêm 500 µl dung dịch C.

- Trộn đều và để yên trong 10 phút.

- Thêm 50 µl Folin 1N, trộn đều và để yên trong 30 phút.

- Lắc đều mẫu, sau đó cho vào Cuvette và đo ở bước sóng 580 nm. * Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả

- Pha dung dịch gốc Bovine serum albumin (BSA). - Đường chuẩn có dạng: Y = aX + b

Trong đó: Y là Độ hấp thụ OD.

X là Lượng protein có trong mẫu đem đo. - Hàm lượng protein được tính theo công thức:

Phần trăm Protein (%P) = 100

m x

Với: m là trọng lượng thực của mẫu m =

14 100 %) 100 ( 10    H H%: Độ ẩm của mẫu 2.3.4.3 Phương pháp xác định độ bền thể gel

Theo phương pháp của Tang et al.,(1991). * Bước 1: Chuẩn bị mẫu

- Tách vỏ trấu và đo ẩm độ hạt gạo.

- Nghiền mịn và cân mẫu (100 mg với ẩm độ 12%). * Bước 2: Hòa tan mẫu

- Thêm 0,2 ml ethanol 95% có chứa 0,025% thymol blue. - Thêm 2 ml KOH 0,2N. Sau đó khuấy đều bằng máy Vortex.

- Đậy nắp kỹ và đun trong nồi cách thủy (nhiệt độ là 1000C) khoảng 8 phút. - Lấy ra, để yên trong 5 phút và sau đó làm lạnh trong nồi nước đá 10 phút. * Bước 3: Đọc và ghi kết quả

- Để ống nghiệm nằm ngang trên bề mặt bằng phẳng, để gel chảy từ từ, sau một giờ tiến hành đo chiều dài thể gel (từ đáy đến mí trên của thể gel).

Bảng 2.3 Phân cấp độ bền thể gel (IRRI, 1996)

Cấp Chiều dài thể gel (mm) Loại độ bền thể gel

1 80 - 100 Rất mềm 3 61 - 80 Mềm 5 41 - 60 Trung bình 7 35 - 40 Cứng 9 <35 Rất cứng 2.3.4.4 Phương pháp xác định độ trở hồ

Theo phương pháp của Jennings et al.,(1979)

- Chuẩn bị hai mẫu cho mỗi giống được thử. Mỗi mẫu lấy sáu hạt gạo, cạo sạch lớp cám, chọn hạt không bị nứt, để vào đĩa petri.

- Thêm 10 ml KOH 1,7% vào mỗi đĩa.

- Sắp xếp các hạt dang đều ra để mỗi hạt có đủ chỗ nở lan ra. - Đậy đĩa petri, để yên khoảng 23 giờ ở nhiệt độ phòng.

- Đánh giá độ trở hồ của hạt gạo theo phân cấp độ độ trở hồ của Jennings et al., (1979) được trình bày ở Bảng 2.4

Bảng 2.4 Phân cấp độ độ trở hồ (Jennings et al., 1979)

Cấp Độ lan rộng Độ trở hồ

1 Hạt gạo còn nguyên Cao

2 Hạt gạo phồng lên Cao

3 Hạt gạo phồng lên, viền còn nguyên hay rõ nét Cao

4 Hạt gạo phồng lên, viền còn nguyên và nở rộng Trung bình 5 Hạt rã ra, viền hoàn toàn nở rộng Trung bình

6 Hạt tan ra hòa chung với viền Thấp

7 Hạt tan hoàn toàn và quyện vào nhau Thấp

Cấp trung bình sẽ được tính theo công thức: Cấp trở hồ =

N n xi   Trong đó: xi: cấp độ trở hồ n: số hạt có cấp độ trở hồ xi N: số hạt thử nghiệm

2.3.4.5 Phương pháp phân loại chiều dài và hình dạng hạt gạo

Đo chiều dài và chiều rộng của 10 hạt gạo của mỗi giống/dòng bằng cách xếp nối nhau trên giấy kẻ li, lấy giá trị trung bình. Đánh giá theo phân loại hạt gạo của IRRI (1988) ở Bảng 2.5.

Bảng 2.5 Phân loại hạt gạo theo chiều dài và tỉ lệ dài/rộng (IRRI, 1988)

Cấp Dài hạt Dài/rộng hạt

Dạng hạt Chiều dài hạt (mm) Dạng hạt Tỉ lệ dài/rộng hạt (mm)

1 3 5 7 Rất dài Dài Trung bình Ngắn >7,5 6,61 - 7,5 5,51 - 6,6 <5,51 Thon dài Trung bình Hơi tròn Tròn >3 2,1 - 3 1,1 - 2 <1