CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Hoạt hóa, cấy chuyền, nhân giống chủng vi khuẩn Bacillus thuringensis
var. israelensis
Chủng vi khuẩn Bacillus thuringensis var. israelensis hoạt hóa trên môi trường (Glucose – Men – Muối) tăng sinh nhanh chỉ sau 24 giờ nuôi với điều kiện: Nhiệt độ 300C, pH = 7, tốc độ lắc 150 vòng/phút.
Hình 3.1: Vi khuẩn hoạt hóa trên môi trường lỏng sau 24 giờ
Vi khuẩn mọc thành váng màu trắng đục đồng đều nổi trên bề mặt môi trường. Môi trường không bị biến đổi về màu sắc khi vi khuẩn tăng sinh.
Chủng vi khuẩn sau khi được hoạt hóa trong môi trường GYS lỏng tiến hành cấy trải đĩa với nhiều nồng độ pha loãng để thu được khuẩn lạc đơn nhằm phục vụ cho các mục đích nghiên cứu khác.
Hình 3.2: Khuẩn lạc của vi khuẩn nuôi trên môi trường GYS
Vi khuẩn Bacillus thuringiensis var. israelensis khi được cấy chuyền sang môi trường thạch GYS khuẩn lạc xuất hiện sớm nhất sau 18 giờ nuôi cấy, khuẩn lạc màu trằng đục, xù xì, khô, bề mặt khuẩn lạc hơi nhăn.
Khuẩn lạc trên ống thạch nghiêng cũng có màu trắng đục, đồng đều theo đường cấy. Sau 24 giờ có thể đem vào bảo quản và giữ giống.
Hình 3.3: Ống giống thạch nghiêng
Làm tiêu bản giọt ép dịch vi khuẩn có sử dụng thuốc nhuộm xanh methylen vì bào tử vi khuẩn Bacillus thuringensis. israelensis bình thường không thể quan sát trên kính hiển vi quang học nên cần sử dụng thuốc nhuộm xanh methylen.
Hình 3.4: Bào tử vi khuẩn nuôi trên môi trường GYS dưới kính hiển vi (×100
Bào tử vi khuẩn Bacillus thuringiensis var. israelensis sau khi bắt màu thuốc nhuộm cho hình ảnh có viền màu xanh sáng. Bào tử xếp thành từng đôi hay từng chuỗi ngắn hoặc chuỗi dài, một số phân tán riêng lẻ hoặc tập trung thành đám. Ở kính hiển vi điện tử có thể thấy được hình thái bào tử là các hình thoi xếp khít nhau.