II. Phân lập và tuyển chọn chủng Azospirillum tổng hợp Auxin và Giberelin
2.3. Phân lập và tuyển chọn Azospirillum từ mẫu đất rừng của quận Thanjavur, Tamil Nadu,
Tamil Nadu, Ấn Độ[6]
Phân lập từ mẫu đất rừng của quận Thanjavur, , Tamil Nadu, Ấn Độ. 1 g mẫu đất hòa tàn vào nước vô trùng và pha loãng đến 10
8
0,1 ml dịch pha loãng cho vào ống nghiệp chứa môi trường NfB (nitrogen free bromothymol) bán rắn, nuôi cấy ở 32
o
C trong vòng 48 h và hình thành một lớp màng mỏng, lớp màng mỏng này được cấy lên môi trường Nfb rắn bằng đường ziczac ở 32o C trong 24h
Hình thành những khuẩn lạc riêng rẽ có màu trắng, vàng và hồng được cấy lên môi trường thạch muối nhỏ cơ bản nuôi ở 32o C trong vòng 24h.
SVTH: Nguyễn Thị Xuân Hà, Đặng Thị Thuý, Nguyễn Văn Hùng 33 [6]http://www.google.com.vn/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&ca d=rja&sqi=2&ved=0CCMQFjAA&url=http%3A%2F%2Fwww.pelagiaresearchlibrary.c om%2Fder-chemica-sinica%2Fvol1-iss3%2FDCS-2010-1-3-138-145.pdf&ei=kd-oUP- BJYyjigf1pYHQDg&usg=AFQjCNG_LO9nIBar_G3_dc_7GFd- 6VnEDw&sig2=jrMZ0GUl35lqs0GLlqQuMg
SVTH: Nguyễn Thị Xuân Hà, Đặng Thị Thuý, Nguyễn Văn Hùng 34
BẢNG THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG ĐÃ SỬ DỤNG ĐỂ PHÂN LẬP CHỦNG
1.Thành phần môi trường king B
Thành phần 1L 500mL Nước 1L 500mL proteose peptone 20g 10g K2HPO4 1,5g 0,75g MgSO4•7H2O 1,5g 0,75g glycerol 10mL 5mL agar 15g 7,5 mL
2. Môi trường NFb: axit malic- 0,5g; MgSO4.7H2O- 0,2g; NaCl-0,1g; CaCl2-0,02; Na2MoO4-0,002g; MnSO4.H2O-0,01g; EDTA 1,64%-4 mL; Bromothymol xanh 0,5% (W/W trong cồn) -2mL; KOH-4,5g; Biotin-0,1g; nước cất 1L, pH-6,8.
3. Môi trường MSM: 0.4% NH4NO3,0.47% KH2PO4, 0.0119% Na2HPO4, 0.001%
CaCl2. 2H2O, 0.1%MgSO4 .7H2O, 0.001% MnSO4 . 4H2O, and 0.0015% FeSO4 . 4H2O,pH 7.0.
4. Môi trường Jensen: sucrose 20g, dipotassium hydrogen phosphate 1g, magnesium sulfate 0,5g, sodium chloride0,5g ferrous sulfate 0,1g, sodium molybdate 0,005g, agar 20g, trong 1 lít nước ph=6,9
5. Môi trường dinh dưỡng thạch agar: 0.5 % peptone , 0.3 % beef extract/yeast extract, 1.5 % agar, 0.5% NaCl, distilled water, pH adjusted to neutral (6.8) at 25 °C.
SVTH: Nguyễn Thị Xuân Hà, Đặng Thị Thuý, Nguyễn Văn Hùng 35
PHẦN III. GIỚI THIỆU VỀ AZOTOBACTER
Azotobacter thường được tìm thấy trong đất và rất hiệu quả cho việc cải thiện độ phì nhiêu của đất và tăng năng suất cây trồng. Nó có thể chuyển hóa nitơ trực tiếp từ không khí giúp cho việc sản xuất ngũ cốc tốt hơn.
Azotobacter có xu hướng nhạy cảm với môi trường axit, nồng độ phosphate cao và nhiệt độ trên 35 º C. Azotobacter được tìm thấy trong các rhiosphares của một số nhà máy và có thể sản xuất hormone như chất kích thích tăng trưởng.
Azotobacter tự nhiên cố định nitơ trong rhizosphare. Có nhiều chủng khác nhau của Azotobacter, mỗi chủng có tính chất hóa học, sinh học khác nhau đối chút Tuy nhiên, một số chủng có khả năng cố định nitơ cao hơn hơn những chủng khác
Bên cạnhviệc cố định nitơ, Azotobacter cũng sản xuất Thiamine, Riboflavin, Indole, Nicotine axit acetic và gibberellins. Khi Azotobacter được áp dụng cho hạt giống, hạt giống nảy mầm được cải thiện đến một mức độ đáng kể