Auxin
1.1. Đặc điểm của chủng Pseudomonas sp
Pseudomonas là Gram âm, tế bào hình que, di động nhờ roi ở đầu và không có bào tử.Các đặc điểm sinh lí là dị dưỡng, không lên men, linh họat về dinh dưỡng, không quang hợp hoặc cố định nitrogen. Vi khuẩn này có vai trò quan trọng trong sự sinh trưởng và pháttriển thực vật: Tổng hợp chất kích thích sinh trưởng thực vật; kích thích bộ rễcủa cây chủ; gia tăng khả năng hấp thu chất dinh dưỡng trong đất
1.2. Phân lập và tuyển chọn chủng Pseudomonas từ các mẫu khác nhau.
a. Pseudomonas từ đồng bằng Sông Cửu Long. (Do viện sinh học công nghệ-Đại Học
Cần Thơ nghiên cứu)
SVTH: Nguyễn Thị Xuân Hà, Đặng Thị Thuý, Nguyễn Văn Hùng 26 Mẫu đất của các cây họ đậu ở đồng bằng sông cửu long. Đất được thu và phơi trong bong mát, đập nhỏ và rây qua rây 2mm; cân 1g đất cho vào bình tam giác chứa 99ml nước cất tiệt trùng, lắc trên máy lắc xoay vòng ở tốc độ 200 vòng/phút trong 2h. Sau đó, chuyển 1ml dung dịch đất sang bình tam giác chứ 99ml nước cất tiệt trùng trong ống nghiệm, khuấy mạnh trên máy lắc rung trong 30 giây và tiếp tục pha loãng như trên đến tần suất 10-7. Hút 0,1ml dung dịch từ ống nghiệm lên môi trường pseudomonas bị cách ly bởi thạch trắng (difco) bổ xung 10ml glyxerin và 50mg/lit cycloheximit, dung que thủy tinh trải đều và đợi khô trong buồng cấy vô trùng và đặt đĩa petri trong tủ ủ ở 30oc. sau 2 hay 3 ngày, cách khuẩn lạc xuất hiện trên bề mặt môi trường, chuyển 1 khuẩn lạc rời sang môi trường mới bằng cách ria cấy để nhận những khuẩn lạc rời ở cuối đường cấy và chuyển một khuẩn lac rời sang ống nghiệp nắp đen chứa môi trường trên để trữ và được xem là một chủng. Các chủng này được xác địh khả năng tổng hợp IAA trong môi trường king B có và không bổ xung 2,5mM tryptophan và các chủng vi khuẩn này được nuôi trong môi trường xác định ở nhiệt độ 30o trong vòng 7 ngày, sau đó đem ly tâm ở môi trường 14000 vòng/phút trong 8 phút, dịch ly tâm được trộn với thuốc thử salkowski R2(4,5 g/l FeCl3 trong 10,8 M H2SO4 trong vòng 30 phút và đo trên máy quang phổ ở bước song 530 nm, sau đó xác định lượng IAA dựa trên đường chuẩn tinh khiết IAA. Chủng nào tạo ra nhiều IAA sẽ được chọn làm chủng giống.
([1]http://publication.ctu.edu.vn/en/index.php/tapchi/doc_details/1371-phan-lp-va-tuyn-chn-
SVTH: Nguyễn Thị Xuân Hà, Đặng Thị Thuý, Nguyễn Văn Hùng 27 Thành phần môi trường king B
Thành phần 1L 500mL Nước 1L 500mL proteose peptone 20g 10g K2HPO4 1,5g 0,75g MgSO4•7H2O 1,5g 0,75g glycerol 10mL 5mL Agar 15g 7,5 mL
Trộn môi trường: đầu tiên nước và peptone được trộn với nhau sau đó đun sôi cho tới khi hòa tan, thêm các chất khác vào và đung nóng cho tới khi tất cả chúng hòa tan (http://wiki.bugwood.org/Kings_medium_B)
b. Phân lập và tuyển chọn chủng Pseudomonas (Murnberg, Đức) [2]
[2]http://www.google.com.vn/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=12&cad=rja &ved=0CCoQFjABOAo&url=http%3A%2F%2Fjournals.tubitak.gov.tr%2Fbiology%2Fissue s%2Fbiy-08-32-1%2Fbiy-32-1-2-0703-
5.pdf&ei=IHuoULHRPIijiAfdjYGoCg&usg=AFQjCNGBU8AVhSniRQ1Ei3AoehXxm6mT WA&sig2=lYxclDRKbnAJY_c_Brq8Yg
c. Phân lập và tuyển chọn chủng Pseudomonas ( Hokkaido, Nhật Bản) [3]
SVTH: Nguyễn Thị Xuân Hà, Đặng Thị Thuý, Nguyễn Văn Hùng 28 Nuôi cấy ở 30
o
c trong máy lắc đến khi xuất hiện vẩn đục
Pha loãng canh trường cấy lên môi trường thạch agar + kerosene ( nguồn C) đĩa thạch được bịt kín bằng hợp chất vinel tape
Tách khuẩn lạc đem đi nuôi cấy trên môi trường MSM Định lượng IAA bằng phương pháp salkowski
d. Phân lập và tuyển chọn chủng Pseudomonas (Aligrarh, Ấn Độ) [4]
Mẫu đất của cây súp lơ, lúa mỳ ở vùng phụ cận thành phố Aligrarh, Ấn Dộ Môi trường dinh dưỡng thạch agar hay king B để tách chủng pseudomonas Sau đó chúng được nuôi cấy trên môi trường jensen có bổ xung và không bổ xung trytophan, nuôi trong1 tuần đối với pseudomonas,
2ml dịch ly tâm+ 2 giọt orthophosphoric acid+ 4ml solawaski đo OD ở 530 nm [4]http://www.google.com.vn/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=7&c ad=rja&ved=0CFoQFjAG&url=http%3A%2F%2Fjournals.tubitak.gov.tr%2Fbiology %2Fissues%2Fbiy-05-29-1%2Fbiy-29-1-5-0410-
1.pdf&ei=xlWoUOSpAoqhiAe8_IDoCw&usg=AFQjCNGdepVDJ- zpSRulhrOxdh5AMWDGiA&sig2=q9VLw4FUjswdvndc3qjO9g
SVTH: Nguyễn Thị Xuân Hà, Đặng Thị Thuý, Nguyễn Văn Hùng 30
Mẫu đất ở đồng bằng Sông Cửu Long Mẫu đất ở Ấn Độ