Tách chiết và tinh sạch DNA các mẫu bạch đàn theo phương pháp của Grattapaglia và Sederoff (1994).
Quy trình tách chiết
+ Nghiền nhanh 0.2g lá bằng cối chầy sứ trong nitơ lỏng cho đến khi tạo thành bột thật mịn, sau đó chuyển ngay vào ống eppendorf 2ml, giữ trong đá;
+ Bổ sung 1ml đệm rửa, lắc mạnh trong 40 giây ly tâm (14000 vòng/phút, 40C, 7 phút);
+ Loại dịch nổi và lặp lại bước 2-3 từ 1 đến 2 lần;
+ Bổ sung 800 µl chloroform/isoamyl alcohol (24:1) vào mẫu, lắc đều trong thời gian 10 phút;
+ Ly tâm với tốc độ 14000 vòng/phút trong thời gian 10-15 phút ở 40C (tùy từng loại mẫu, làm sao cho phần lặng cắn xuống);
+ Dùng pipet chuyển dịch nổi sang ống eppendorf 2ml;
+ Bổ sung 1 thể tích tương đương Isopropanol (lạnh) và đảo nhẹ, giữ mẫu trong đá 10 phút;
+ Ly tâm 14000 vòng/phút trong thời gian 10-15 phút ở 40C;
+ Loại dịch nổi, rửa DNA bằng cách thêm 500 µl cồn 80%, ly tâm 14000 vòng/phút trong thời gian 4 phút ở 40C (bước này thực hiện 2 lần), sau đó nhẹ nhàng loại bỏ ethanol (tránh để các cuộn DNA rơi ra ngoài);
+ Làm khô DNA bằng quạt gió, máy hút chân không; + Hòa tan trong 200 µl TE;
+ Sau khi DNA được hòa tan thì bổ sung 3 µl RNase (10mg/ml). Giữ sản phẩm ở 370C trong thời gian 2 giờ;
+ Cho vào 200 µl chloroform/isoamyl alcohol (24:1), đảo nhẹ (hỗn hợp được phân thành 2 lớp, lớp trên có chứa DNA), ly tâm 14000 vòng/phút trong thời gian 5 phút ở 40C;
+ Chuyển pha trên sang ống eppendorf mới và bổ sung 200 µl CH3COONa 3M, cho tiếp 450 µl ethanol lạnh 100% vào, lắc nhẹ và giữ sản phẩm trong đá 30 phút;
+ Ly tâm 14000 vòng/phút trong thời gian 10-15 phút ở 40C;
+ Đổ phần dịch nổi, rửa DNA bằng 400 µl ethanol 80% hai lần. Sau mỗi lần rửa, ly tâm với tốc độ 14000 vòng/phút trong thời gian 6 phút, sau đó loại bỏ ethanol nhẹ nhàng (tránh để các cuộn DNA rơi ra ngoài);
+ Làm khô DNA bằng quạt gió hoặc hút chân không;
+ Bổ sung 100 µl TE vào sản phẩm để hòa tan DNA và giữ ở 40C; + Điện di kiểm tra DNA tổng số trên gel agarose 1% và đo OD.