Phổ 1
H-NMR (500 MHz, CDCl3:MeOD)
Cho thấy 6 tín hiệu đặc trƣng liên kết với nguyên tố có độ âm điện lớn có độ dịch chuyển δ = 3,5 ppm đến δ = 4,09 ppm trong đó:
Một tín hiệu proton δ = 4,09 ppm (chẻ mũi m) có J = 3,5 Hz, là tín
hiệu của proton gắn trên carbon gắn với N ở dạng amid >CHNHCOR
Một tín hiệu proton δ = 4,04 ppm (chẻ dd) có J1= 3,5 Hz và J2= 8 Hz là tín hiệu proton gắn trên >CHOH kề với Carbon gắn với N ở dạng amid >CHNHCOR
Một tín hiệu proton δ = 3,81 ppm (chẻ dd) có J1= 3,5 Hz và J2= 11,5 Hz
Một tín hiệu proton δ = 3,72 ppm (chẻ dd) có J1= 4,5 Hz và J2= 11,5 Hz
Hai tín hiệu này là của -CH2OH, có sự ghép của 2 proton trên cùng một carbon do carbon kế bên mang tâm lập thể.
Hai tín hiệu proton δ = 3,53 ppm, chúng có độ dịch chuyển tƣơng đƣơng nên chập lại với nhau cho sự chẻ mũi không xác định đƣợc.
Rất nhiều proton nằm ở vùng trƣờng cao có δ = 0,9 ppm đến δ = 2,0 ppm (khoảng 72 tín hiệu proton đƣợc hiện trên phổ) trong đó:
Có bốn proton có độ dịch chuyển δ = 1,4 ppm đến δ = 2.0 ppm thì bốn proton là của dung môi CH3OH và bốn proton còn lại gắn với các carbon gắn với các carbon có gắn trực tiếp với nguyên tố có độ âm điện lớn.
Có sau proton có độ dịch chuyển δ = 0,8 là của sáu proton ở cuối mạch
Và tín hiệu đƣợc tính khoảng 60 proton có độ dịch chuyển δ = 1,25 ppm là của các proton ở dạng -CH2- nối tiếp nhau
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 35
Qua các tín hiệu proton cho thấy đặc trƣng cho hợp chất ceramide.
Phổ MS-positive
Hợp chất AiliM2 có tín hiệu ion phân tử giả MS-positive với m/z là 740 [M+H]+. Suy ra M = 739 (khối lƣợng lý thuyết M =739) phù hợp với công thức phân tử C46H93O5N.
Phổ MS-negative
Hợp chất AiliM2 có tín hiệu ion phân tử giả MS-negative với m/z là 720 tƣơng ứng với mảnh [M - H2O - H]-, phù hợp với công thức dự đoán ở trên
Phổ GC-MS
Cấu trúc mạch acid béo của ceramide đƣợc xác định thông qua quá trình methanol giải hợp chất AiliM2 trong môi trƣờng methanol acid (dung dịch HCl 10% trong methanol) và chiết bằng n-hexane để xác định cấu trúc hóa
học.
Kết quả ghi phổ GC-MS của phần dịch chiết n-hexane sau khi methanol giải hợp chất AiliM2 có nhiều peak nhƣng mũi chiếm ƣu tiên trong mẫu là metyl ester của acid palmitic có thời gian lƣu là 38,905 phút có m/z là 270 ứng với công C17H34O2.
Vậy hợp chất AiliM2 có công thức phân tử là C46H93O5N cấu trúc gồm hai phần: dây acid béo có công thức C16H31Ovà dây aminoalcol có công thức C30H62NO4.
Do dữ liệu phổ thu đƣợc không đủ để kết luận công thức hóa học chính xác của hợp chất AiliM2 nhƣng có thể dựa trên dữ liệu phổ và phân tích đƣợc cùng với đặc tính đặc trƣng của ceramide có thể đề nghị cấu trúc cũng nhƣ dự đoán tên hợp chất dựa trên công thức đề nghị
Hóa lập thể của các tâm bất đối trong phân tử đƣợc đề nghị dựa vào đặc điểm sinh phát nguyên của nhóm hợp chất sphingosine, do đó đề nghị cấu trúc lập thể của hợp chất AiliM2 là 2S, 3S, 4R, 5R trên mạch aminoalcol.
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 36
Chƣơng 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận
Đề tài “Phân lập chất từ cao chloroform và cao PE của cây ô rô hoa tím
Acanthus ilicifolius L, họ ô rô (Acanthaceae)” đƣợc triển khai từ tháng
12/2014 đến nay đã hoàn tất mục tiêu ban đầu với một số kết quả cụ thể nhƣ:
Điều chế đƣợc các loại cao: cao petroleum ether 454,37 g (48,16%), cao chloroform 62,13 g (6,58%), ethyl acetate 41,31 g cao (4,39%).
Khảo sát phân đoạn C-III có khối lƣợng 7,23 g và phân đoạn PE-VI có khối lƣợng 9,15 g để phân lập hợp chất tự nhiên. Sau khi tiến hành phân tách bằng SKC đã phân lập đƣợc hợp chất AiliM1 có khối lƣợng 5 mg và Aili- M2 có khố lƣợng 10 mg.
Phân tích phổ NMR, hợp chất AiliM1 đƣợc định danh là một hợp chất flavonoid, đƣợc gọi với tên thông thƣờng là Apigenin và hợp chất ceramide AiliM2.
5.2 Kiến nghị
Do thời gian và lƣợng mẫu có hạn nên hợp chất AiliM2 đã không đƣợc đo phổ đầy đủ để có thể định danh thật chính xác tên và công thúc hóa học vì vậy xin kiến nghị là khảo sát tiếp hợp chất AiliM2 đồng thời thử hoạt tính của hợp chất.
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 37
TÀI LIỆU THAM KHẢO
[1] Phạm Hoàng Hộ (1999). Cây cỏ Việt Nam, tập 3. NXB trẻ. TP. Hồ Chí Minh. Trang 57-59.
[2] Dr. Samir Malhotra (2011). Herbalism, Phytochemistry and Ethnopharmacology. Science Publishers, P.O. Box 699, Enfi eld, NH 03748, USA, trang 336.
[3] Amritpal Singh, Sanjiv Duggal, Ashish Suttee (2009). Acanthus
ilicifolius linn.-lesser known medicinal plants with significant
pharmacological activities. International Journal of Phytomedicine 1: 1-3. [4] http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=news&newsid=525
[5] Giáo sƣ, tiến sĩ, dƣợc sĩ Đỗ Tất Lợi (2004). Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. NXB Y học. Hà Nội.
[6] Muhamad Firdaus, Asep Awaludin Prihanto, Rahmi Nurdiani (2013). Antioxidant and cytotoxic activity of Acanthus ilicifolius flower. Asian Pac J
Trop Biomed. 3(1): 17-21.
[7] Gina Saptiani, Slamet Budi Prayitno và Sutrisno Anggoro (2012). The effectiveness of Acanthus ilicifolius in protecting tiger prawn (Penaeus monodon F.) from Vibrio Harveyi infection. Journal of Coastal Develpopment,
Vol 15, 217 - 224.
[8] K. T. Mani Senthil Kumar, Zothan Puia, Samir K. Samata, Rajiv Baik, Arnab Dutta,, Bapi Gorain, Dilip K. Roy, Dipan Adhikari, Sanmoy Kamaka, Tuhinadri Sen (2012). The Gastroprotective Role of Acanthus ilicifolius – A Study to Unravel the Underlying Mechanism of Anti-ulcer
activity. Scientia Pharmaceutica, 80:701-717.
[9] Babu BH, Hylesh BS, Padikkala J. (2002). Tumour reduding andanticarcinogenic activity of Acanthus ilicifolius. J. Ethnopharmacol, 79:
27-33.
[10] Van Kiem P, Quang TH, Huong TT, Nhung le TH, Cuong NX, Van Minh C, Choi EM, Kim YH (2008). Chemical constituents of Acanthus
ilicifolius L. and effect on osteoblastic MC3T3E1 cells. Arch Pharm Res,
31:823-9.
[11] P. S. Kalaskar, V. V. Karande, A. S. Bannalikar and M. M. Gatne (2012). Antifungal Activity of Leaves of Mangroves Plant Acanthus
licifolius Against Aspergillus fumigatus. India J Pharm Sci., 74(6): 575-579.
[12] Kapil, A. and Sharma, S. (1994). Leishmanicidal activity of 2- benzoxazolione from Acanthus ilicifolius in vitro. Planta Med, 60: 187-188.
[13] http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs375/en/
[14] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007). Phƣơng pháp cô lập hợp chất hữu cơ. NXB ĐHQG TP. Hồ Chí Minh. TP. Hồ Chí Minh.
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 38
[15] Tôn Nữ Liên Hƣơng (2013).Khảo sát thành phần hóa học và một số hoạt tính sinh học trong hai cây rau má lá sen Hydrocotyle bonariensis Comm. ex Lam.và Hydrocotyle vugaris L. (Apiaceae). Tóm tắt luận án tiến sĩ, Đại học Khoa học Tự nhiên TP. Hồ Chí Minh
[16] Kazuyuki Kitatani, Jolanta Idkowiak-Baldys, and Yusuf A. Hannun, (2008). The sphingolipid salvage pathway in ceramide metabolism and Signaling. National Institutes of Health (NIH), 20(6): 1010-1018.
[17] Roger S. Persaud, Maureen McLoughlin, Zvi Fuks and Richard N. Kolesnick (1994). Ionizing radiation acts on cellular membranes to generate ceramide and initiate apoptosis. The Journal of Experimental Medicine, Vol.180 (2): 525-535.
[18] C.Patrick Reynolds, Barry J.Maurer, Richard N.Kolesnick (2004). Ceramide synthesis and metabolism as a target for cancer therapy. Cancer Letters, 206: 169-180.
[19] F. Larit, S. benyahia, S. Benayache, F. Benayache, F. Leon, I. Brouard, J. BerMijo (2012), Flavonoids from Calycotome spinosa (L.).Lamk,
Int. J. Med. Arom. Plans, Vol 2, No.1, Pp. 34-37.
[20] Rui Liu , Hongchi Zhang , Maosen Yuan , Jiao Zhou , Qin Tu , Jian- Jun Liu và Jinyi Wang, Synthesis and Biological Evaluation of Apigenin Derivatives as Antibacterial and Antiproliferative Agents, Molecules 2013, 18,
11496-11511; doi:10.3390/molecules180911496
[21] Rale Wostmann & Gerd Liebezeit, Chemical composition of the mangrove holly Acanthus ilicifolius (Acanthaceae) - review and additional data, Frankfurt am Main 09.05.2008
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 39 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phổ 1H–NMR của AiliM1 H3 H5 H3 ’, H 5’ H7 H2 ’, H6 ’ OH g ắn C 5
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 41 Phụ lục 2: Phổ 13C–NMR của AiliM1 C2 C 3 C 4 C 5 C 6 C 7 C 8 C 9 C 10 C 1’ C 2’ , c6 ’ C 3’ , c 5’ C 4’
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 43
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 45 Phụ lục 4: Phổ 1H-NMR của AiliM2 H6 H2 H3 H4 , H5 H1 . 2 H H1 6’ , H3 0 H2 ’ CH 3 OH -CH 2 -
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 48
Phụ lục 5: Phổ MS-Negative của AiliM2
[M -H 2 O -H] + = 720
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 49
Phụ lục 6: phổ MS-Positive của AiliM2
[M+H]
SVTH:Nguyễn Thị Kim Mơ 50
Phụ lục 7: Phổ GC-MS của mạch acid béo của AiliM2
Palmitic acid, methyl ester (38.905 phút)
M+ CH3COOCH2+