Sắc ký lớp mỏng đƣợc thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DC - Alufolien 60 F254 (Merck 1,05715), RP18 F254s (Merck). Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại ở hai bƣớc sóng 254 nm và 368 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4
10% đƣợc phun đều lên bản mỏng, sấy khô rồi hơ nóng trên bếp điện từ từ đến khi hiện màu.
Sinh viên: Nguyễn Thị Tấn 27 Lớp: K37A - Hóa học 2.2.2. Sắc ký lớp mỏng điều chế
Sắc ký lớp mỏng điều chế thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn Silica gel 60G F254 (Merck, ký hiệu 105875), phát hiện vệt chất bằng đèn tử ngoại hai bƣớc sóng 254 nm và 368 nm, hoặc cắt rìa bản mỏng để phun thuốc thử là dung dịch H2SO4 10%, hơ nóng để phát hiện vệt chất, ghép lại bản mỏng nhƣ cũ để xác định vùng chất, sau đó cạo lớp Silica gel có chất, giải hấp phụ bằng dung môi thích hợp.
2.2.3. Sắc ký cột (CC)
Sắc ký cột đƣợc tiến hành với chất hấp phụ là Silica gel pha thƣờng và pha đảo. Silica gel pha thƣờng có cỡ hạt là 0,040 - 0,063 mm (240 - 430 mesh). Silica gel pha đảo ODS hoặc YMC (30 - 50 m, FuJisilisa Chemical Ltd.). 2.3. Phƣơng pháp xác định cấu trúc hoá học của hợp chất
2.3.1. Điểm nóng chảy (Mp)
Điểm nóng chảy đƣợc đo trên máy Kofler micro - hotstage của Viện Hóa sinh biển.
2.3.2. Phổ khối lượng (ESI - MS)
Phổ khối lƣợng phun mù điện tử (Electron Spray Ionization Mass Spectra) đƣợc đo trên máy AGILENT 1200 LC - MS của Viện Hoá sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
2.3.3. Phổ cộng hưởng từ nhân (NMR)
Phổ cộng hƣởng từ nhân (NMR): 1
H - NMR (500 MHZ) và 13C - NMR (125 MHZ) đƣợc đo trên máy Bruker AM500 FT - NMR Spectrometer, Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
2.4. Dụng cụ và thiết bị
2.4.1. Dụng cụ và thiết bị tách chiết
Các dụng cụ và thiết bị dùng cho tách chiết và tinh chế chất sạch đƣợc sử dụng bao gồm:
Sinh viên: Nguyễn Thị Tấn 28 Lớp: K37A - Hóa học
+ Bình chiết 30 lít
+ Máy cô quay chân không
+ Đèn tử ngoại hai bƣớc sóng 254 và 368 nm + Tủ sấy chân không
+ Máy sấy + Micropipet
+ Bình sắc ký loại phân tích và điều chế
+ Cột sắc ký pha thƣờng và pha ngƣợc các loại đƣờng kính + Dung dịch thuốc thử
+ Bếp điện
2.4.2. Dụng cụ và thiết bị xác định cấu trúc
+ Máy phổ cộng hƣởng từ hạt nhân NMR AM500 FT - NMR spectrometer.
+ Máy sắc ký lỏng cao áp ghép nối khối phổ (ESI) AGILENT 1200 LC - MS spectrometer.
+ Thiết bị đo điểm nóng chảy Kofler micro - hotstage. + Thiết bị đo độ quay cực JASCO.
2.5. Hoá chất
+ Silica gel 60 (0,04 - 0,063 mm) Merck.
+ Silica gel pha đảo ODS hoặc YMC (30 - 50 m, FuJisilisa Chemical Ltd). + Bản mỏng tráng sẵn pha thƣờng DC - Alufolien 60 F254 (Merck 1,05715).
+ Bản mỏng tráng sẵn pha ngƣợc RP18 F254s (Merck).
+ Bản mỏng điều chế pha thƣờng DC - Alufolien 60 F254 (Merck). + Các loại dung môi hữu cơ nhƣ metanol, etanol, etyl axetate, clorofoc, hexan, axetone, v.v...
Sinh viên: Nguyễn Thị Tấn 29 Lớp: K37A - Hóa học
CHƢƠNG 3. THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ