+Kháng thể đặc hiệu
+Kháng kháng thể đó gắn chất phát huỳnh quang. Trong đó kháng thể đặc hiệu có 2 chức năng:
•Là kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên cần chẩn đoán
•Là kháng nguyên của kháng kháng thể đã đánh dấu (kháng kháng thể là kháng thể kháng globulin cùng loài).
-Cách làm:
+Lấy bệnh phẩm cần chuẩn đoán làm tiêu bản để kháng nguyên gắn chặt lên phiến kình. +Nhỏ một giọt kháng thể đặc hiệu lên phiến kình. Để tác động 15', rồi rửa nước.
+Nhỏ tiếp 1 - 2 giọt kháng kháng thể đó gắn chất phát huỳnh quang.
+Để tác động một thời gian, rửa nước, để khô, quan sát dưới kình hiển vi huỳnh quang. Đọc kết quả. -Phản ứng dương tình: Có hiện tượng phát sáng, tức là có hiện tượng kết hợp kháng nguyên + kháng thể + kháng kháng thể gia súc mắc bệnh.
-Phản ứng âm tình: Không có hiện tượng phát sáng, tức là không có hiện tượng kết hợp kháng nguyên + kháng thể + kháng kháng thể. Bởi ví kháng nguyên và kháng thể không tương ứng, không có sự kết hợp kháng nguyên - kháng thể, kháng thể bị rửa trôi.
-Phương pháp gián tiếp hay đc sử dụng ví:
+Chỉ cần một lần gắn kháng kháng thể với chất huỳnh quang ta có thể sử dụng để chẩn đoán nhiều kháng nguyên khác nhau, với điều kiện kháng thể đặc hiệu của chúng phải đc chế trên cùng một loài vật.
+Độ nhạy của phản ứng cao hơn, bởi ví 1 phân tử kháng nguyên có thể bị nhiều kháng kháng thể bám vào độ phát quang tăng lên, dễ phát hiện.
+Độ nhạy của phản ứng cao hơn, bởi ví 1 phân tử kháng nguyên có thể bị nhiều kháng kháng thể bám vào độ phát quang tăng lên, dễ phát hiện. không gắn.
-Cho kháng nguyên cần chẩn đoán vào (kháng nguyên đc chiết xuất ở dạng hoà tan) để độ 1 giờ, rửa nước (loại bỏ những thành phần thừa).
-Cho kháng thể đặc hiệu đó gắn enzim vào. Để một thời gian, rửa nước. -Cho cơ chất đặc hiệu với enzim vào, để một thời gian (20 - 30'). Đọc kết quả.
+Nếu có màu tức là có kháng nguyên tương ứng với kháng thể đặc hiêu, phản ứng dương tình. So màu trong quang phổ kế để định lượng mức độ của phản ứng.
+Nếu không có màu: Phản ứng âm tình.
Phản ứng ELISA gián tiếp: Dùng để phát hiện kháng thể.
-Cho kháng nguyên đó biết hấp phụ lên bản nhựa, để một thời gian (qua đêm), rửa nước để loại kháng nguyên thừa.