trong môi trường khoáng tối thiểu
Quá trình làm giàu mật số cộng đồng vi sinh vật trong môi trường lỏng MM có bổ sung Chlorpyrifos ethyl ở nồng độ 20 ppm và phân lập vi sinh vật trên môi trường TSA đã phân lập được 8 dòng có khả năng phân hủy Chlorpyrifos ethyl.
20
Bảng 2.1 Nguồn gốc của tám dòng vi khuẩn phân lập được
Địa điểm Ký hiệu hệ vi khuẩn Ký hiệu dòng vi khuẩn
Phụng Hiệp - Hậu Giang PH C_3
PH C3.1 PH C3.2 PH C3.3 PH C3.4
Phụng Hiệp - Hậu Giang PH C_4
PH C4.1 PH C4.2 PH C4.3 PH C4.4
Các dòng vi khuẩn này được nhân mật số trong bình tam giác 100 mL có chứa 50 mL dung dịch giàu dinh dưỡng GYM tiệt trùng (gồm 10 gram glucose và 10 gram yeast extract cho 1 lít nước) trong hai ngày, trên máy lắc tròn với tốc độ 90 vòng/phút trong tối. Sinh khối của các dòng vi khuẩn được thu riêng biệt bằng cách chuyển toàn bộ dung dịch dinh dưỡng GYM có chứa sinh khối vi khuẩn vào trong ống Falcon 50 mL tiệt trùng. Quy trình ly tâm được thực hiện trong 3 phút với tốc độ 6.000 vòng/phút sau đó loại bỏ phần nước ở trên. Tiếp tục cho 30 mL nước khử khoáng tiệt trùng vào ống Falcon chứa sinh khối vi khuẩn, vortex 2 phút nhằm hòa tan sinh khối vi khuẩn vào nước, sau đó ly tâm. Toàn bộ quy trình được lặp lại liên tục trong ba lần nhằm loại bỏ hoàn toàn nguồn carbon còn sót lại từ môi trường dung dịch giàu dinh dưỡng GYM. Tiếp theo, hiệu chỉnh độ đục của dung dịch chứa vi khuẩn với nước khử khoáng tiệt trùng bằng máy so màu Spectrometer (Thermo Scientific, Multiskan Spectrum) về optical density (OD) 600 nm = 0,7.
Quy trình bố trí thí nghiệm đánh giá khả năng phân hủy Chlorpyrifos ethyl của các dòng vi khuẩn được thực hiện trong điều kiện nhiệt độ phòng thí nghiệm. Các dòng vi khuẩn được nuôi trong môi trường lỏng MM bổ sung Chlorpyrifos ethyl nồng độ 20 ppm và theo dõi hàm lượng Chlorpyrifos ethyl. Thí nghiệm gồm 2 nghiệm thức và 4 lần lặp lại được trình bày chi tiết trong bảng 2.1.
21
Bảng 2.2 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát tốc độ phân hủy Chlorpyrifos ethyl
Tên nghiệm thức Chỉ tiêu theo dõi
Nghiệm thức 1: 4 mL dung dịch MM + Chlorpyrifos ethyl 20 ppm, 4 lặp lại
Hàm lượng Chlorpyrifos ethyl
Nghiệm thức 2: 4 mL dung dịch MM + Chlorpyrifos ethyl 20 ppm + 100 L dung dịch vi khuẩn, 4 lặp lại
Xác định hàm lượng Chlorpyrifos ethyl còn lại trong môi trường MM