CC, silica gel n hexan-EtOAc 9:
4.5.3Phân tách phần chiết etyl axetat lá cây Vông nem (EL3)
THỰC NGHIỆM
4.5.3Phân tách phần chiết etyl axetat lá cây Vông nem (EL3)
Phần chiết etyl axetat (EL3) được kết tinh trong EtOAc cho một chất bột màu vàng, chất này được rửa lần lượt với các dung môi n-hexan và điclometan cho chất R (0,2 g).
Phần chiết etyl axetat (EL3) (5 g) được phân tách bằng sắc ký cột trên silica gel (Merck, cỡ hạt 0,063-0,2 mm), rửa giải với hệ dung môi n-hexan-etyl axetat-axit fomic với tỷ lệ 20:20:1 cho 18 phân đoạn, mỗi phân đoạn 50 ml. Cuối cùng dội cột bằng MeOH.
Các phân đoạn cho sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại thành 4 nhóm phân đoạn từ EL3.1 đến EL3.4.
Quá trình phân tách phần chiết etyl axetat (EL3) được trình bày trong Sơ đồ 4, Mục 3.4.3, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
Từ dịch chiết n-hexan (EB1) kết tủa được một chất bột màu trắng. Bột này được rửa với các dung môi n-hexan và điclometan thu được S là hỗn hợp phức tạp của các tecpen glycosid (phổ 1H-NMR).
Phần chiết n-hexan (EB1) (14 g) được phân tách bằng sắc ký cột trên silica gel (Merck, cỡ hạt 0,063-0,2 mm). Rửa giải với hệ dung môi điclometan-EtOAc với các tỷ lệ là 49:1, 19:1 và 10:1, thu được 25 phân đoạn, mỗi phân đoạn 50 ml. Cuối cùng dội cột bằng EtOAc.
Các phân đoạn cho sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại thành 8 nhóm phân đoạn từ EB1.1 đến EB1.8.
Nhóm phân đoạn EB1.3 (1 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường với hệ dung môi n-hexan-EtOAc 9:1, thu được 70 phân đoạn, mỗi phân đoạn 5 ml. Sắc ký lớp mỏng cho phép gộp các phân đoạn thành 9 nhóm phân đoạn từ EB1.3.1 đến
EB1.3.9 trong đó nhóm phân đoạn EB1.3.6 (phân đoạn 24-33) là chất bột vô định
hình màu trắng (15 mg) và được định tính là chất M nhận được từ phần chiết n- hexan lá cây Vông nem (phân tích TLC và co-TLC).
Các nhóm phân đoạn EB1.4 và EB1.5 được rửa bằng n-hexan cho tinh thể hình kim màu trắng (100 mg). Phân tích định tính sắc ký lớp mỏng với mẫu chuẩn β-sitosterol chúng tôi cho kết quả chất mới được phân lập này β-sitosterol (C).
Phân đoạn EB1.6 (1,5 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường với hệ dung môi n-hexan-EtOAc 6:1, thu được 65 phân đoạn, mỗi phân đoạn 5 ml. Phân tích sắc ký lớp mỏng đã gộp các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau thành 5 nhóm phân đoạn EB1.6.1 đến EB1.6.5. Tiếp tục sử dụng phương pháp sắc ký cột thường với hệ dung môi n-hexan-EtOAc 8:1 để phân tách nhóm phân đoạn EB1.6.2 thu
được 23 phân đoạn. Từ 2 nhóm phân đoạn 7-17 và 19-23 kết tinh cho 2 loại tinh thể màu xanh nhạt, hình kim và màu trắng, hình nấm. Rửa các tinh thể bằng n-hexan và
kết tinh lại trong điclometan thu được 2 chất tinh khiết, kí hiệu là T (130 mg) và X (20 mg).
Nhóm phân đoạn EB1.8 (0,5 g) được rửa bằng n-hexan thu được tinh thể hình kim màu trắng, kí hiệu là H (0,1 g).
Quá trình phân tách phần chiết n-hexan vỏ thân cây Vông nem (EB1) được trình bày trong Sơ đồ 5, Mục 3.4.4, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.