Hoạt chất: Azoxystrobin 250g/l + Difenoconazole 150g/l
Đặc điểm của hoạt chất: Azoxystrobin Phạm Văn Biên và ctv., 2000): Tên gọi khác: Amistar
Tên hóa học: Methyl E – 2 – {2 – [6 – (2 – xiano – phenoxi) pyrimidin – 4 – yloxi] phenyl} – 3 – methoxiacrylat.
Đặc tính lý học: CTPT. C22H17N3O5, TLPT. 403,4. Thuốc nguyên chất kĩ thuật thể rắn, màu trắng, tan rất ít trong nƣớc, hòa tan tốt trong etylaxetat, diclomethan. Rất ít độc với ong mật, cá và các loài ký sinh có ích.
Công dụng: Azoxystrobin là hợp chất tổng hợp hóa học có cấu trúc đồng đẳng với strobilurins và oudemansins là chất chuyển hóa nấm khuẩn có trong tự nhiên. Tác dụng tiếp xúc và nội hấp.Ức chế bào tử nấm nẩy mầm và sợi nấm phát triển. Ức chế sự hình thành bào tử nấm khuẩn. Thuốc có phổ tác động rất rộng.
17
HƢƠNG 2
PHƢƠNG TIỆN V PHƢƠNG PHÁP 2.1. PHƢƠNG TIỆN
2.1.1. Thời gian và địa điểm
- Thí nghiệm đƣợc thực hiện từ tháng 5/2012 đến 12/2013
- Thí nghiệm đánh giá độ hiệu lực của 4 loại thuốc hóa học và 4 loại dịch trích thực vật đối với hai loại nấm Fusarium sp. và Curvularia sp., đƣợc bố trí tại phòng thí nghiệm Nedo và nhà lƣới bộ môn Bảo vệ Thực vật, khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng, trƣờng ĐHCT.
2.1.2. Các dụng cụ thí nghiệm: Đĩa petri, beaker, bình tam giác, que cấy nấm, tủ úm, tủ thanh trùng ƣớt, tủ thanh trùng khô, kính hiển vi, … úm, tủ thanh trùng ƣớt, tủ thanh trùng khô, kính hiển vi, …
2.1.3. Công thức môi trƣờng đƣợc dùng trong bố trí thí nghiệm: Môi trƣờng PDA Môi trƣờng PDA
Khoai tây 200 gram -Đƣờng Dextrose 20 gram
-Agar 20 gram
Nƣớc cất 1000 ml
- pH 6.5 – 6.8
2.1.4. Vật liệu thí nghiệm
- Các loại thuốc dùng trong thí nghiệm: Comcat 150WP, Man 800WP, Help 400SC, Tilt super 300EC.
- Các loại dịch trích thực vật đƣợc sử dụng: lá cỏ hôi, lá cỏ cứt heo, lá neem, củ cỏ Cú.
ảng 2 1 N ng đ các loại thuốc và dịch tr ch thực vật đƣợc sử dụng trong các th nghiệm
STT
Tên thuốc/dịch trích thực vật
Liều lƣợng sử dụng
18
1 Tilt super 300EC 46,9 µl/100ml 93,8 µl/100ml 187,6µ/100ml
2 Help 400SC 46,9 µl/100ml 93,8 µl/100ml 187,6 µl/100ml 3 Man 80WP 0,25g/100ml 0,5g/100ml 1g/100ml 4 Comcat 150WP 0,016g/100ml 0,032g/100ml 0,064g/100ml 5 Lá neem 2% 4% 8% 6 Lá cỏ hôi 2% 4% 8% 7 Lá cỏ cứt heo 2% 4% 8% 8 Củ Cỏ Cú 2% 4% 8%
* Chú thích đối với nồng độ thuốc: Nồng độ A bằng ½ khuyết cáo. Nồng độ B bằng khuyết cáo.
Nồng độ C gấp đôi khuyết cáo.
- Nguồn nấm Fusarium sp. và Curvularia sp. đƣợc cung cấp từ Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật, Khoa Nông nghiệp và SHƢD, Trƣờng Đại Học Cần Thơ.
2.2. PHƢƠNG PHÁP
2.2.1. Th nghiệm 1 khảo sát hiệu quả của các loại thuốc hóa học đối với nấm
Fusarium sp. và Curvularia sp. gây lem lép hạt lúa in vitro
Mục đ ch: Đánh giá hiệu quả của các loại thuốc hóa học đối với nấm
Curvularia sp. và Fusarium sp. gây lem l p hạt lúa.
Thực hiện th nghiệm:
- Thí nghiệm đƣợc bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 13 nghiệm thức 12 nghiệm thức sử dụng thuốc hóa học và 1 nghiệm thức đối chứng , 5 lần lặp lại. Loại thuốc và nồng độ thuốc đƣợc trình bày trong Bảng 2.1. Nghiệm thức đối chứng là môi trƣờng PDA không chứa thuốc hóa học.
- Chuẩn bị nguồn nấm Curvularia sp. và Fusarium sp.: nấm đƣợc nuôi cấy trong đĩa petri khoảng 10 ngày trƣớc khi tiến hành thí nghiệm. Khuẩn ty nấm sẽ đƣợc đục thành các khoanh có đƣờng kính 5mm khi thực hiện thí nghiệm.
- Các loại thuốc hóa học đƣợc tính toán liều lƣợng sao cho khi hòa tan vào chai thủy tinh chứa 100ml môi trƣờng PDA sẽ đạt đƣợc nồng độ đã định sẵn. Nấu tan môi trƣờng PDA. Khi chai môi trƣờng đạt nhiệt độ khoảng 55-60oC có thể cầm đƣợc chai môi trƣờng bằng tay thì đƣa lƣợng thuốc hóa học đã chuẩn bị vào chai, lắc chai môi trƣờng để thuốc hòa tan đều vào môi trƣờng. Sau đó, môi trƣờng trong
19
chai sẽ đƣợc chiết vào các đĩa Petri chiết 10ml môi trƣờng/ đĩa petri . Sau khi môi trƣờng đặc lại, đặt các khoanh khuẩn ty nấm đã chuẩn bị vào giữa đĩa petri Hình 2.1).
Cách bố tr trên đĩa peptri:
Hình 2 1: Sơ đ bố trí thử nghiệm hiệu quả của thuốc hóa học đối với nấm Fusarium sp. ho c
Curvularia sp gây lem l p hạt lúa
h tiêu ghi nhận: ghi nhận đƣờng kính khuẩn lạc của nấm vào các thời điểm 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168h giờ sau đặt khoanh khuẩn ty. Hoặc chỉ tiêu đƣợc ngừng ghi nhận khi khuẩn lạc của nấm phát triển đến m p đĩa petri.
Hiệu quả của thuốc đƣợc tính theo công thức: ĐKKLđc – ĐKKLi)
HQT(%) = x 100 ĐKKLđc
Trong đó: ĐKKLđc: Đƣờng kính khuẩn lạc của nghiệm thức đối chứng ĐKKLi: Đƣờng kính khuẩn lạc của nghiệm thức thuốc i
Qua kết quả thí nghiệm 1 sẽ chọn ra 2 nghiệm thức cho hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm tốt nhất và kinh tế nhất để thực hiện cho thí nghiệm 3.
Khoanh khuẩn ty nấm gây bệnh lem lép hạt đƣờng kính 5mm)
Môi trƣờng đã có thuốc hóa học theo nồng độ tính sẵn
20
2.2.2 Th nghiệm 2 khảo sát hiệu quả của các loại dịch tr ch thực vật đối với nấm Fusarium sp. và Curvularia sp. gây lem lép hạt lúa in vitro
Mục đ ch: Đánh giá hiệu quả của các loại dịch trích thực vật đối với nấm
Curvularia sp. và Fusarium sp. gây lem l p hạt lúa
Thực hiện th nghiệm:
- Thí nghiệm đƣợc bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 13 nghiệm thức 12 nghiệm thức sử dụng dịch trích thực vật và 1 nghiệm thức đối chứng , 5 lần lặp lại. Loại dịch trích thực vật và nồng độ dịch trích đƣợc trình bày trong Bảng 2.1. Nghiệm thức đối chứng là môi trƣờng PDA không chứa dịch trích thực vật.
- Chuẩn bị nguồn nấm Curvularia sp. Và Fusarium sp.: tƣơng tự Thí nghiệm 1.
- Các loại thực vật sau khi thu về sẽ đƣợc rửa sạch đất cát, sau đó đƣợc trích với nƣớc cất bằng cách tính nồng độ theo trọng lƣợng lá tƣơi/ thể tích, kế tiếp cho vào máy xay sinh tố xay nhuyển, lƣợt bỏ phần xác thu phần nƣớc trích. Sau cùng rót phần dịch trích thu đƣợc qua dụng cụ lọc có đƣờng kính lỗ lọc 0,2µm vào 1 cốc thủy tinh đã thanh trùng khô, thao tác đƣợc tiến hành trong tủ cấy. Nấu tan môi trƣờng PDA. Khi chai môi trƣờng đạt nhiệt độ khoảng 55-60oC có thể cầm đƣợc chai môi trƣờng bằng tay chiết dịch trích thực vật đã chuẩn bị sẳn vào chai môi trƣờng, lắc chai môi trƣờng để dịch trích hòa tan đều vào môi trƣờng. Sau đó, môi trƣờng trong chai sẽ đƣợc chiết vào các đĩa Petri chiết 10ml môi trƣờng/ đĩa petri . Sau khi môi trƣờng đặc lại, đặt các khoanh khuẩn ty nấm đã chuẩn bị vào chính giữa đĩa petri Hình 2.2 .
Cách bố tr trên đĩa peptri:
Hình 2.2: Sơ đ bố trí thử nghiệm hiệu quả của dịch tr ch thực vật đối với nấm Curvularia sp ho c Fusarium sp. gây lem l p hạt lúa
Khoanh khuẩn ty nấm gây bệnh lem lép hạt đƣờng kính 5mm)
Môi trƣờng đã có dịch trích thực vật theo nồng độ tính sẵn
21
h tiêu ghi nhận: ghi nhận đƣờng kính khuẩn lạc của nấm vào các thời điểm 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 giờ sau đặt khoanh khuẩn ty. Hoặc chỉ tiêu đƣợc ngừng ghi nhận khi khuẩn lạc của nấm phát triển đến m p đĩa petri.
Hiệu quả của thuốc đƣợc tính theo công thức: ĐKKLđc – ĐKKLi)
HQT(%) = x 100 ĐKKLđc
Trong đó: ĐKKLđc: Đƣờng kính khuẩn lạc của nghiệm thức đối chứng ĐKKLi: Đƣờng kính khuẩn lạc của nghiệm thức thuốc i
Qua kết quả thí nghiệm 2 sẽ chọn ra 2 nghiệm thức cho hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm hiệu quả và kinh tế cao nhất để thực hiện cho thí nghiệm 3.
2.2.3 Th nghiệm 3 đánh giá hiệu quả của các loại thuốc h a học và dịch tr ch thực vật đối với nấm Fusarium sp. và Curvularia sp. gây lem lép hạt lúa in vitro
Mục đ ch: đánh giá hiệu quả của các loại thuốc hóa học và dịch trích thực vật đối với hai loại nấm Fusarium sp. và Curvularia sp. gây lem l p hạt lúa.
Thực hiện th nghiệm:
- Thí nghiệm đƣợc bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 5 nghiệm thức 2 nghiệm thức sử dụng thuốc hóa học có hiệu quả cao từ TN1, 2 nghiệm thức sử dụng dịch trích thực vật có hiệu quả cao từ TN2 và 1 nghiệm thức đối chứng , 5 lần lặp lại. Nghiệm thức đối chứng là môi trƣờng PDA không có chứa thuốc hóa học hoặc dịch trích thực vật.
- Chuẩn bị nguồn nấm Fusarium sp. vàCurvularia sp: tƣơng tự Thí nghiệm 1. - Cách tiến hành các nghiệm thức thuốc hóa học tƣơng tự Thí nghiệm 1, các nghiệm thức dịch trích thực vật tƣơng tự Thí nghiệm 2.
-Sau khi hoàn thành thí nghiệm, tiến hành đếm mật số bào tử trong mỗi lần lập lại của mỗi nghiệm thức.
h tiêu ghi nhận: tƣơng tự Thí nghiệm 1 và 2.
Qua kết quả thí nghiệm 3 sẽ chọn ra 2 nghiệm thức 1 thuốc hóa học và 1 dịch trích thực vật và nồng độ) cho hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm cao nhất.
22
HƢƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. HIỆU QUẢ ĐỐI KHÁNG CỦA 4 LOẠI THUỐC HÓA HỌC LÊN SỰ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM Curvularia sp. và Fusarium sp. GÂY BỆNH SỰ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM Curvularia sp. và Fusarium sp. GÂY BỆNH LEM LÉP HẠT LÚA.
3.1.1. Nấm Curvularia sp.
Bảng 3.1 ghi nhận ảnh hƣởng của các loại thuốc hóa học lên sự phát triển đƣờng kính khuẩn ty nấm Curvularia sp. trong điều kiện in vitro. Ở thời điểm 48,72 và 96 giờ sau đặt khoanh khuẩn ty GSĐKKT , ngoại trừ nghiệm thức xử lý Comcat 150WP, các nghiệm thức xử lý thuốc hóa học còn lại đều cho đƣờng kính khuẩn ty nấm nhỏ hơn có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng không xử lý. Trung bình đƣờng kính khuẩn ty của các nghiệm thức xử lý hiệu quả lần lƣợt khoảng 0.5- 0.8 cm 24 GSĐKKT , 0.5-1.1 cm 48 GSĐKKT , và 0.5-1.3 72 GSĐKKT , Ở nghiệm thức đối chứng là 1.6 cm 24 GSĐKKT , 3.1 cm 48 GSĐKKT , và 4.9 cm 72 GSĐKKT . Kết quả về hiệu quả cũng đƣợc ghi nhận tƣơng tự ở hai thời điểm 96 và 120 GSĐKT, Tuy nhiên đối với Comcat 150WP (0,016g/100ml , đã cho kết quả đƣờng kính khuẩn ty nấm nhỏ hơn có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng không xử lý. Trung bình đƣờng kính khuẩn ty của nghiệm thức Comcat 150WP (0,016g/100ml) là 5.7 cm, Ở nghiệm thức đối chứng là 6.3 cm. Ở thời điểm khảo sát cuối cùng 144 GSĐKT, trừ nghiệm thức xử lý Comcat 150WP nồng độ (0,032g/100ml) và (0,064g/100ml) vẫn không có thể hiện khả năng ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm, trong khi các nghiệm thức xử lý với Comcat 150WP nồng độ (0,016g/100ml , Tilt super 300EC, Help 400SC và Man 800WP vẫn tiếp tục thể hiện khả năng ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm Curvularia sp. Đƣờng kính khuẩn ty nấm của các nghiệm thức ở thời điểm này lần lƣợt là Tilt super 300EC ở cả ba nồng độ đều là 0.5 cm, tƣơng tự Help 400SC là 1,3cm , và Man 0.5 cm.
23
Bảng 3.1. Ảnh hƣởng của các loại thuốc hóa học lên sự phát triển đƣờng kính (cm) của hu n ty nấm Curvularia sp trong điều iện in vitro
Nghiệm thức Thời điểm quan sát (giờ sau đặt khoanh khuẩn ty)
Loai thuốc Nồng độ 24h 48h 72h 96h 120h 144h
Comcat 150WP 0,016g/100ml 1.6 c 3.1 c 4.8 b 5.7 d 6.9 c 8.9 b
Comcat 150WP 0,032g/100ml 1.8 b 3.4 b 4.9 b 6.5 b 7.8 b 9.0 a
Comcat 150WP 0,064g/100ml 1.9 a 3.5 a 5.1 a 6.9 a 8.1 a 9.0 a
Tilt super 300EC 46,9 µl/100ml 0.5 f 0.5 f 0.5 d 0.5 g 0.5 e 0.5 d
Tilt super 300EC 93,8 µl/100ml 0.5 f 0.5 f 0.5 d 0.5 g 0.5 e 0.5 d
Tilt super 300EC 187,6µ/100ml 0.5 f 0.5 f 0.5 d 0.5 g 0.5 e 0.5 d
Help 400SC 46,9 µl/100ml 0.8 d 1.1 d 1.3 c 1.3 e 1.3 d 1.3 c Help 400SC 93,8 µl/100ml 0.6 f 0.8 e 1.1 c 1.1 f 1.3 d 1.3 c Help 400SC 187,6 µl/100ml 0.7 e 0.8 e 1.2 c 1.3 e 1.3 d 1.3 c Man 800WP 0,25g/100ml 0.5 f 0.5 f 0.5 d 0.5 g 0.5 e 0.5 d Man 800WP 0,5g/100ml 0.5 f 0.5 f 0.5 d 0.5 g 0.5 e 0.5 d Man 800WP 1g/100ml 0.5 f 0.5 f 0.5 d 0.5 g 0.5 e 0.5 d Đối chứng 1.6 c 3.1 c 4.9 b 6.3 c 7.8 b 9.0 a Mức ý nghĩa * * * * * * CV (%) 6.82 5.19 5.96 4.06 3.02 1.85
Ghi chú *: số liệu khác biệt ở mức ý nghĩa 5 % ns : khác biệt không ý nghĩa thống kê
24
Bảng 3.2 ghi nhận hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm
Curvularia sp. của các loại thuốc hóa học trong điều kiện in vitro. Ở thời điểm 24 giờ sau khi đặt khoanh khuẩn ty SKĐKKT , ngoại trừ các nghiệm thức xử lý với Comcat 150WP, thì các nghiệm thức xử lý thuốc còn lại đều cho hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm cao có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng không xử lý. Trung bình hiệu quả ức chế khuẩn ty nấm của các nghiệm thức xử lý có hiệu quả khoảng từ 47.93 – 69,07 . Kết quả về hiệu quả cũng đƣợc ghi nhận tƣơng tự ở thời điểm 48 GSKĐKKT. Ở thời điểm 72 GSKĐKKT ngoài các nghiệm thức xử lý với Tilt super 300EC, Help 400SC và Man 800WP tiếp tục cho hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng không xử lý. Nghiệm thức xử lý với Comcat 150WP vẫn không cho hiệu quả, trung bình hiệu quả ức chế khuẩn ty nấm của nghiệm thức xử lý Comcat 150WP không khác biệt ý nghĩa thống kê so với đối chứng không xử lý. Kết quả cũng đƣợc ghi nhận tƣơng tự ở thời điểm 96, 120, 144 GSKĐKKT. Ở thời điểm cuối 168 GSĐKKT, ngoại trừ Comcat 150WP thì các loại thuốc còn lại đều cho hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty nấm rất cao có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng không xử lý thuốc, hiệu quả của các nghiệm thức lần lƣợt là: Tilt super 300EC (46,9 µl/100ml) (94,44%), Tilt super 300EC (93,8 µl/100ml) (94,44%), Tilt super 300EC (187,6µ/100ml) (94,44%), Help 400SC (46,9 µl/100ml) (85.33%), Help 400SC (93,8 µl/100ml) (85.78%), Help 400SC (187,6 µl/100ml) (85.33%), và Man 80WP ở cả ba nồng độ đều là 94,44%.
25
Bảng 3 2 Hiệu quả ức chế sự phát triển hu n ty nấm Curvularia sp của các loại thuốc h a học trong điều iện in vitro
Thời điểm quan sát (giờ sau đặt khoanh khuẩn ty)
Loai thuốc Nồng độ 24h 48h 72h 96h 120h 144h
Comcat 150WP 0,016g/100ml -1.56 bc -0.02 b 2.00 b 8.58 b 11.25 b 1.33 b
Comcat 150WP 0,032g/100ml -11.28 c -9.10 c -0.62 b -4.52 b 0.75 c 0.00 c
Comcat 150WP 0,064g/100ml -17.61 d -12.39 d -4.36 c -10.27 c -3.86 d 0.00 c
Tilt super 300EC 46,9 µl/100ml 69.07 a 83.86 a 89.78 a 92.01 a 93.61 a 94.44 a
Tilt super 300EC 93,8 µl/100ml 69.07 a 83.86 a 89.78 a 92.01 a 93.61 a 94.44 a
Tilt super 300EC 187,6µ/100ml 69.07 a 83.86 a 89.78 a 92.01 a 93.61 a 94.44 a
Help 400SC 46,9 µl/100ml 47.93 a 65.15 a 73.87 a 79.22 a 83.37 a 85.33 a Help 400SC 93,8 µl/100ml 63.99 a 74.20 a 76.67 a 81.78 a 83.64 a 85.78 a Help 400SC 187,6 µl/100ml 57.95 a 73.58 a 75.82 a 79.22 a 83.12 a 85.33 a Man 800WP 0,25g/100ml 69.07 a 83.86 a 89.78 a 92.01 a 93.61 a 94.44 a Man 800WP 0,5g/100ml 69.07 a 83.86 a 89.78 a 92.01 a 93.61 a 94.44 a