V jmax ỹmi n'
3. Xác định đạm tổng số bằng phương pháp Kjeldahl
a. Nguyên tắc
Nitơ có trong thành phần các hợp chất hữu cơ, dưới tác dụng của H2SO4 đậm đặc với sự hiện diện của chất xúc tác thích họp thì tất cả các chất hữu cơ bị oxy hoá, còn NH3 được giải phóng ra liên kết với H2SO4 tạo thành (NĨỈ4)2S04. Dùng kiềm mạnh (NaOH, MgO) để đẩy NH3 từ muối (NÍỈ4)2S04 hình thành ra thể tự do. Định lượng NH3 bằng dung dịch acid có nồng độ xác định.
Các hợp chất hữu cơ + H2SO4 (đậm đặc)---► (NIỈ4)2S04
b. Tiến hành
Đốt đạm (vô cơ hoá).
Cân chính xác 1 g mẫu cho vào bĩnh Kjedahl và cho tiếp vào 5 g chất xúc tác, 10 mL H2SO4 đậm đặc, để nghiêng bình Kjedahl ừên bếp và đun từ từ đến khi thu được dung dịch trong suốt không màu hoặc có màu xanh lơ của C11SO4 để nguội.
c. Cất đạm
Sau khi vô cơ hoá mẫu hoàn toàn, cho một ít nước cất vào bình Kjedahl để tráng rồi cho vào bình định mức 100 mL, tráng rửa bình Kjeldahl vài lần và cho tiếp vào bình định mức. Đưa nước trong bình định mức lên đến 100 mL.
Dùng pipet hút 10 mL mẫu cho vào bình cầu của hệ thống kéo đạm và cho tiếp 10 -ỉ- 15 mL NaOH 40% vào. Sau đó gia nhiệt để cất kéo hơi nước và hứng NH3 thoát ra, ngưng
Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường Đại học cần Thơ
tụ bằng một bình tam giác 100 mL có chứa sẵn 20 mL dung dịch acid boric 20 g/L cho đến khi thu được 100 mL dung dịch.
Định lượng dung dịch hứng bằng H2SO4 0,1 N. Tính kết quả: ™ xr* J * _ 0.0014-V-10 , "
Hàm lượng Nitơ tông sô =---'---X100%
m
Trong đó V: Thể tích H2SO4 0,1 N (mL).
m: Khối lượng nguyên liệu vô Yơ hoá (g). 10: Hệ số pha loãng.
1, 0014: Số gam nitơ tương ứng với lmL H2SO4 0,1 N. Hàm lượng protein tổng số: % protein tổng số = % nitơ tổng số X H.
Với H: hệ số protein. Đối với thực phẩm có nguồn gốc động vật thì H = 6,25.
Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường Đại học cần Thơ
PHỤ LỤC 2 KÉT QUẢ THỐNG KÊ
1. Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của tỷ lệ mẫu:dung môi đến quá trình trích ly protease từ đầu tôm sú