1.Tiệt trùng bề mặt và môi trường làm việc
Khi làm việc với vi sinh vật, để tránh bị lây nhiễm những vi sinh vật không mong muốn ở môi trường xung quanh, cần phải đảm bảo cho môi trường và bề mặt làm việc được vô khuẩn. - Làm sạch môi trường làm việc.
- Tiệt trùng bề mặt làm việc bằng cồn 70% hoặc propanol 70%.
Lưu ý: Khi lau cồn, lưu ý không được bật đèn cồn vì có thể gây hỏa hoạn. - Tủ cấy vô trùng: tiệt trùng không khí bằng đèn UV, quạt lọc gió.
2.Tiệt trùng dụng cụ làm việc
Có 2 phương pháp để tiệt trùng dụng cụ làm việc + Phương pháp tiệt trùng bằng nhiệt khô:
Sấy trong tủ sấy ở nhiệt độ 150- 160oC trong 2,5 đến 3 giờ
Dùng cho dụng cụ thủy tinh không chứa môi trường nuôi cấy (có thể có nắp bông), pipet, hộp petri, que trang, phễu thủy tinh, đũa thủy tinh, …
+ Phương pháp tiệt trùng bằng nhiệt ẩm:
Hấp trong nồi hấp autoclave ở nhiệt độ 121oC trong 20-30 phút.
Dùng cho các dụng cụ bằng kim loại, dụng cụ có nắp bằng cao su, giấy nhôm, màng; dụng cụ bằng nhựa chịu nhiệt; ống bóp cao su; ống nghiệm hay bình thủy tinh có chứa môi trường nuôi cấy; đầu pipetman; ống nghiệm chứa nước để pha loãng…
2.1 Dụng cụ thủy tinh hoặc kim loại
- Trước khi tiệt trùng dụng cụ thủy tinh cần được làm sạch và sấy khô.
- Ống nghiệm thủy tinh: cần được đậy bằng nút bông không thấm nước, sau đó gói kín phần đầu ống nghiệm có nút bông bằng giấy.
- Bình tam giác: cần được đậy kín bằng nút bông và gói phần có nút bông bằng giấy. - Hộp petri cần được gói kín trong giấy
- Pipet thủy tinh cần được gắn một nút bông nhỏ ở phần cuối, sau đó bọc kín trong giấy. - Que trang, đũa thủy tinh nếu cần cũng phải được gói kín vào giấy.
2.2 Dụng cụ bằng nhựa chịu nhiệt
Ống nghiệm có nắp nhựa chịu nhiệt, nắp bằng cao su hay đầu micropipette được tiệt trùng bằng nhiệt ẩm.
2.3 Môi trường nuôi cấy vi sinh vật
Môi trường nuôi cấy vi sinh vật thường được tiệt trùng trong nồi hấp tiệt trùng autoclave ở 121oC trong 20-30 phút.
Đối với những thành phần của môi trường dinh dưỡng nhạy cảm với nhiệt độ cao thì cần dùng màng lọc vi khuẩn để tiệt trùng.