5. Tính mới của đề tài
3.3.Thiết lập quy trình xây dựng, cấy chuyền lưu giữ, bảo quản và sử dụng quỹ gen
gen invitro giống hoa cúc
Dựa vào kết quả thu được, tiến hành thiết lập quy trình xây dựng, cấy chuyền lưu giữ và sử dụng quỹ gen invitro mẫu giống nghiên cứu. Kết quả được trình bày trong hình bên dưới.
Mô tả
- Phương pháp: Nụ non của hoa cúc cắt thành từng đoạn có cuống dài 1cm. Rửa sạch nụ bằng xà phòng rồi tráng dưới vòi nước chảy nhiều lần. Tráng mẫu bằng cồn 700 trong 30 giây rồi tráng lại bằng nước cất vô trùng. Tiếp đó cho mẫu vào bình đựng HgCl2 0,1% lắc trong 10 phút. Sau đó gạn bỏ các hóa chất khử trùng và tráng lại mẫu bằng nước cất vô trùng nhiều lần. (Hoặc sử dụng lá, thân, rễ cây cúc invitro trên quỹ gen)
-Môi trường: MS+30g/l sucrose+6,5g/l agar+ 2mg/l BAP
Mô tả
- Phương pháp: Các chồi cúc trên môi trường
nhân nhanh (hoặc các chồi trên quỹ gen) được cắt QUỸ GEN
thành từng đoạn có chiều dài 1cm và cấy trên môi trường lưu giữ.
- Môi trường: ½MS + 15g/l sucrose + 12g/l agar
Mô tả
-Phương pháp:Khi các chồi trên môi trườngra rễ (hoặc các chồi trên quỹ gen) có kích thước từ 1-2 cm, rễ dài 0,5-1 cm cho cây ra vườn ươm.
VÀO MẪU BAN ĐẦU
/TẠO CALLUS
TÁI SINH CHỒI
NHÂN NHANH
TẠO CÂY HOÀN CHỈNH
VƯỜN ƯƠM
Mô tả
-Phương pháp: Các callus hình thành trên môi trường vào mẫu ban đầu được sử dụng để tái sinh chồi. (Hoặc sử dụng lá, thân,rễ cây cúc invitro trên quỹ gen)
-Môi trường: MS + 30g/l sucrose +6,5g/l agar + 2mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA
Mô tả
- Phương pháp: Các chồi tái sinh trên callus
(hoặc các chồi trên quỹ gen) được dùng đểnhân nhanh tạo số lượng lớn.
-Môi trường: MS + 30g/l sucrose + 6,5g/l agar + 1mg/l BAP
Mô tả
-Phương pháp:Các chồi trên môi trường nhân nhanh (hoặc các chồi trên quỹ gen) được cắt thành từng đoạn có chiều dài 1cm và cấy trên môi trường tạo rễ.
-Môi trường: MS + 30g/l sucrose +6,5g/l agar + 0,5mg/l NAA
Ghi chú:
Cấy chuyền
Mô tả giai đoạn thực hiện
CHƯƠNG 4 : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1. Kết luận
4.1.1. Về khối lượng công việc và mục tiêu của đề tài
Đề tài đã thực hiện đầy đủ các nội dung nghiên cứu và đã thu được kết quả tốt, đáp ứng mục tiêu của thuyết minh, bảo đảm các chủng loại sản phẩm của đề tài đầy đủ về số lượng và chất lượng.
4.1.2. Về các nội dung khoa học của đề tài
- Đề tài đã nghiên cứu thành công quy trình vào mẫu ban đầu, cấy chuyền lưu giữ và sử dụng quỹ gen invitro mẫu giống nghiên cứu. Những kết quả đạt được được trình bày ở bảng sau:
Bảng 4.1 Kết quả đạt được cácnội dung, công việc đã được thực hiện
Stt Các nội dung, công việc được thực hiện Kết quả đạt được
Nội dung 1: Điều tra, thu thập và lựa chọn mẫu giống nghiên cứu.
- Thu thập mẫu giống nghiên cứu. Thu thập được 10 mẫu giống hoa cúc phổ biến tại Đà Lạt.
1
- Điều tra đặc tính hình thái, tính chống Nêu được đặc tính hình thái, tính chống chịu chịu mẫu giống thu thập. mẫu giống thu thập.
- Lựa chọn mẫu giống nghiên cứu. Đưa 10 mẫu giống thu thập được vào phục vụ nghiên cứu.
Nội dung 2: Nghiên cứu tạo nguồn mẫu vô trùng cho nuôi cấy invitro.
- Đánh giá và lựa chọn hóa chất khử Lựa chọn được 2 loại hóa chất khử trùng trùng mẫu nghiên cứu. thích hợp: HgCl2, NaOCl.
2 Đưa ra được quy trình khử trùng mẫu thích
- Khảo sát quá trình khử trùng mẫu để tạo hợp.
nguồn mẫu vô trùng bằng hóa chất khử Chất khử trùng thích hợp đối với mẫu nụ non
trùng. hoa cúc là HgCl2 0,1%. Thời gian khử trùng
thích hợp là 10 phút. 38
Nội dung 3: Nghiên cứu môi trường nuôi cấy, tái sinh invitro mẫu giống nghiên cứu.
Đưa ra được môi trường tái sinh mẫu cấy thích hợp.
- Nghiên cứu môi trường tái sinh mẫu Môi trường tạo callus thích hợp nhất là: MS + 30g/l sucrose +6,5g/l agar + 2mg/l BAP. cấy.
Môi trường tái sinh thích hợp là: MS + 30g/l
3 sucrose +6,5g/l agar + 2mg/l BAP + 0,2 mg/l
NAA.
Đưa ra được môi trường nhân nhanh mẫu cấy - Nghiên cứu môi trường nhân nhanh thích hợp.
mẫu cấy. Môi trường nhân chồi thích hợp là: MS +
30g/l sucrose + 6,5g/l agar + 1mg/l BAP. Đưa ra được môi trường tạo cây hoàn chỉnh - Nghiên cứu môi trường tạo cây hoàn mẫu cấy thích hợp.
chỉnh mẫu cấy. Môi trường tạo rễ thích hợp là: MS + 30g/l sucrose +6,5g/l agar + 0,5mg/l NAA.
Đưa ra được môi trường lưu giữ quỹ gen
Nội dung 4: Nghiên cứu môi trường lưu invitro thích hợp.
4 giữ quỹ gen invitro mẫu giống nghiên Môi trường thích hợp để lưu giữ quỹ gen
cứu. invitro các giống hoa cúc là ½MS + 15g/l
sucrose + 12g/l agar.
Nội dung 5: Thiết lập quy trình cấy Đưa ra quy trình xây dựng, cấy chuyền lưu
5 chuyền lưu giữ và sử dụng quỹ gen giữ và sử dụng quỹ gen invitro mẫu giống invitro mẫu giống nghiên cứu đã xây hoa cúc.
dựng.
- Xây dựng được quỹ gen invitro giống hoa cúc phổ biến tại Đà Lạt: tạo ra được trên 500 cây hoa cúc invitro cho mỗi giống, có tổng cộng 10 giống đã được xây dựng.
- Sản phẩm của đề tài đã nhanh chóng được ứng dụng vào thực tiễn: sử dụng quỹ gen xây dựng được để giảng dạy môn Nhân giống cây hoa cúc – lớp CNSH K8 và môn Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật – lớp BVTV K8A/B.
4.2. Đề nghị
- Tiếp tục kiểm tra xây dựng quy trình cho các giống cúc khác.
- Cần có sự hỗ trợ kinh phí hàng năm để duy trì và bảo quản quỹ gen xây dựng được. - Mở rộng hướng nghiên cứu trên đối tượng cây trồng khác.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Nguyễn Sanh Mân, 2010, Giáo trình Kỹ thuật nhân giốngInvitro.
2. Võ Văn Chi, Dương Đức Tiến, 1988, Phân loại thực vật, Nxb Đại học và trung học chuyên nghiệp: tr.424-436.
3.Phạm Văn Duệ (2005), Giáo trình di truyền và chọn giống cây trồng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
1. Trần Duy Quý (1997), Các phương pháp mới trong chọn tạo giống cây trồng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
2. Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật-nghiên cứu và ứng dụng. 3. Nguyễn Quang Thạch, Đặng Văn Đông, 2002, Cây hoa cúc và kĩ thuật trồng, Nxb kĩ thuật : tr1-24.
4. Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2004),
Giáo trình công nghệ sinh học nông nghiệp,NXB Nông nghiệp.
Tiếng Anh
5. Bhojwani, S.S. and M.K. Razdan, 1996. Plant tissue culture: Theory and practice,
a revised edition. Elsevier Science B.V. The Netherlands.
6. Boase MR, Miller R, Deroles SC. 1997. Chrysanthemum systematics, genetics, and
breeding. In : Jamick J, editor. Plant breeding reviews, vol 14. New York: Wiley; p.
321-61.
7. Plants through Tissue Culture. Hughes, K.W., Henker, R. and Constantin, M.
(Eds.). Conf. 7804111. Technical Inf. Center, U.S. Dep. Energy, Springfield, VA p. 44-58.
8. Gamborg, O.L., T. Murashige, T.A. Thorpe, and I. K. Vasil, 1976. Plant tissue
culture media. In Vitro 12:473-8.
9. George, E.F. and P.D. Sherrington, 1984. In: Plant Propagation by Tissue Culture. Exegetics Ltd., Eversley, England, pp. 324-366.
10. Gisler0d, H.R., L.M. Mortensen, and A.R. Selmer-Olsen, 1986. The effect of air
humidity on growth and nutrient content of some greenhouse plants. Acta Hort.
PHỤ LỤC
Thành phần môi trường lưu trữ quỹ gen
Nồng độ Stt Thành phần (Số mg cần có trong 1 lít môi trường lưu trữ) (mg/l) 1 NH4NO3 825 2 KNO3 950 3 KH2PO4 85 4 MgSO4.7H2O 185 5 CaCl2.2H2O 220 6 MnSO4.4H2O 11.15 7 H3BO3 3.1 8 ZnSO4.7H2O 4.3 9 KI 0.415 10 Na2MoO4.2H2O 0.125 11 CuSO4.5H2O 0.0125 12 CoCl2.6H2O 0.0125 13 Na2EDTA 18.65 14 FeSO4.7H2O 13.9 15 Meso - inositol 50 16 Pirydoxine (B6) 0.25 17 Biotin (H) 0.005 18 Nicotinic acid (P.P) 0.25 19 Thiamin – HCl (B1) 0.05 20 Pantotate – Ca 0.5 21 Glycine 1 22 Agar 12000 23 Đường sucrose 15000 42
LÝ LỊCH TRÍCH NGANG
- Họ và tên:Nguyễn Đình Tiến
- Ngày sinh: 11/11/1988
- Nơi sinh:Đà Lạt – Lâm Đồng
- Địa chỉ liên lạc: Số 1 Hoàng Văn Thụ, P.4, Đà Lạt
- Điện thoại: 0979.7700.67 - Quá trình đào tạo:
Từ 2006-2011: Học đại học tại Trường Đại Học Bách Khoa - Đại Học Quốc Gia Tp.HCM.
2012 – 2014: Học cao học tại Viện Môi Trường và Tài Nguyên - Đại Học Quốc Gia Tp.HCM.
- Quá trình công tác:
Từ 2011 đến 2014: Công tác tại Đại Học Quốc Gia Tp.HCM. Từ 2014 đến nay: Công tác tại Trường Cao đẳng Nghề Đà Lạt.