5. Tính mới của đề tài
3.2.1. Kết quả nghiên cứu khử trùng mẫu
Vô trùng là một trong những điều kiện bắt buộc của quá trình nuôi cấy in vitro, là yếu tố quyết định tới thành công của thí nghiệm. Vì vậy, trước khi nuôi cấy in vitro thì mẫu cấy phải được khử trùng sạch nấm và vi khuẩn bằng hóa chất. Các hóa chất sát trùng thường được sử dụng là HgCl2 0,1%; NaOCl 10%.
Các mẫu nụ non của hoa cúc được cắt thành từng đoạn có cuống dài 1cm. Rửa sạch nụ bằng xà phòng rồi tráng dưới vòi nước chảy nhiều lần. Tráng mẫu bằng cồn 700 trong khoảng 30 giây rồi tráng lại bằng nước cất vô trùng. Tiếp đó cho mẫu vào bình đựng HgCl2 0,1% lắc trong khoảng thời gian từ 10 hoặc NaOCl 10% lắc trong vòng 20 phút. Sau đó gạn bỏ các hóa chất khử trùng và tráng lại mẫu bằng nước cất vô trùng nhiều lần.
Kết quả khử trùng thu được sau một tuần nuôi cấy trên môi trường khởi động như ở bảng sau:
Bảng 3.2 Kết quả khử trùng mẫu đối với giống cúcC01sau 1 tuần nuôi cấy
Hoá chất Thời gian khử trùng Tỷ lệ mẫu nhiễm Tỷ lệ mẫu chết Tỷ lệ mẫu sống
khử trùng (phút) (%) (%) (%) HgCl2 0,1% 8 74,3 5,0 20,7 10 32,3 7,7 60 12 12,6 54,1 33,3 NaOCl 10% 15 100 0 0 20 75 5 10 25 63,4 10,3 26,3
Bảng 3.3 Kết quả khử trùng mẫu của giống cúc C03sau 1 tuần nuôi cấy
Hoá chất Thời gian Tỷ lệ mẫu nhiễm Tỷ lệ mẫu chết Tỷ lệ mẫu sống
khử trùng khử trùng (phút) (%) (%) (%) 8 71,4 9,6 19 HgCl2 0,1% 10 34,3 12,3 55,6 12 12,7 54,3 33 15 95 0 5 NaOCl 10% 20 73,3 5,4 11,3 25 64,2 10,6 25,2
Kết quả đã cho thấy khử trùng bằng NaOCl 10% hiệu quả khử trùng rất thấp. Tỉ lệ mẫu sạch và có khả năng sống đạt cao nhất là 25,2-26,3% ở cả hai giống hoa cúc. Khi thời gian khử trùng ngắn 20 phút các mẫu đều bị nhiễm nấm và khuẩn 100%, khi tăng thời gian khử trùng lên thì số lượng mẫu nhiễm giảm nhưng xuất hiện các mẫu chết và thời gian khử trùng càng tăng số lượng mẫu chết càng lớn. Do vậy sử dụng NaOCl 10% để khử trùng mẫu có hiệu quả không cao và thời gian khử trùng là khá lâu.
Khi khử trùng bằng HgCl2 0,1% với thời gian ngắn hơn so với khử trùng bằng NaOCl 10% thì tỉ lệ mẫu nhiễm giảm hơn và tỉ lệ mẫu sống đạt được nhiều hơn. Tỉ lệ mẫu sống đạt được cao nhất là 60%. Tuy nhiên khi tăng thời gian khử trùng lên 12 phút thì tỉ lệ mẫu chết lại tăng lên và tỉ lệ mẫu sống lại giảm xuống.
Như vậy hóa chất khử trùng thích hợp để khử trùng nụ hoa cúc C01 và C03 là HgCl2 0,1% và thời gian khử trùng thích hợp là 10 phút.
lệ mẫu sống đạt được đều trên 60%. Do đó, hóa chất khử trùng thích hợp để khử trùng nụ hoa cúc các loại là HgCl2 0,1% và thời gian khử trùng thích hợp là 10 phút.