4. Nội dung nghiên cứu
2.4. Phương pháp nghiên cứu
Phương pháp chiết xuất mẫu:
Mẫu cây đương quy được loại bỏ các lá khô, hỏng và rửa sạch. Củ và lá được thái nhỏ, lát mỏng, sau đó mẫu đương quy được phơi sấy khô ở nhiệt độ 30 - 32oC ngoài trời râm mát, tránh ánh nắng trực tiếp buổi trưa.
Sử dụng các hệ dung môi có độ phân cực khác nhau để tách một số phân đoạn dịch chiết từ các hoạt chất thiên nhiên từ cây Đương quy (Angelica sinensis).
Ngâm cây Đương quy đã sấy khô trong trong ethanol 96% trong thời gian 7 ngày rồi đổ lượng dịch thu được ra bình và bảo quản. Dịch chiết thu được đem cô đặc dưới bóng đèn sợi đốt (tránh nhiệt độ cao làm biến tính các hợp chất có trong mẫu và tránh cho sự bay hơi của ethanol quá nhanh) tạo thành dạng cao và bảo quản trong tủ lạnh.
Cặn chiết thu được đem chiết phân bố trong nước với dung môi n- hexan sau đó thu dịch chiết n-hexan .
Cặn chiết thu được đem chiết phân bố trong nước với dung môi ethylacetate trong vòng 10 ngày sau đó thu dịch chiết và cô dưới đèn sợi đốt như trên tạo thành dạng cao và bảo quản trong tủ lạnh.
Hình 2.2. Hình ảnh thực tế ấy m u và tiến hành ọc, chiết m u đương quy
Định tính các hợp chất tự nhiên có trong cặn chiết đương quy (ĐQ) [6] Các cặn chiết ĐQ1 ÷ ĐQ4 được hòa tan trong các dung môi thích hợp với từng loại phản ứng định tính các nhóm chất và thực hiện các phản ứng nhận biết định tính một số nhóm chất hữu cơ có trong mẫu cây đương quy như sau:
Nhóm chất Thuốc thử/ Dấu hiệu nhận biết phản ứng
Flavonoid
Wilstater
Màu vàng, xanh, đỏ xuất hiện chứng tỏ sự có mặt của flavon, flavonol và các dẫn xuất hydro của chúng.Màu tím xuất hiện chứng tỏ có lencoantoxyanidin.
Mg/ HCl
H2SO4 đặc
Phản ứng cho màu vàng tươi cho thấy sự có mặt của flavon, flavonol, màu vàng cam cho thấy sự có mặt của flavonon, màu đỏ hoặc tím cho thấy sự có mặt của chalcon, auron.
Dung dịch kiềm
Phản ứng cho màu vàng cho thấy sự có mặt của flavon, flavonol; màu tím cho thấy sự có mặt của chalcon; màu cam, đỏ cho thấy sự có mặt của flavon, isofavonon; màu cà phê cho thấy sự có mặt của flavonol; màu xanh cho thấy sự có mặt của autoxyanin.
Chì acetate 10% Phản ứng cho màu vàng là dương tính.
Alkaloid
Bouchardat Phản ứng dương tính nếu có kết tủa màu đỏ thẫm.
I2 + KI + H2O
Dragendorff Phản ứng dương tính nếu có kết tủa màu da cam.
Coumarin
NaOH 10% Phản ứng dương tính nếu xuất hiện hỗn hợp
màu vàng.
FeCl3 Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu xanh.
Muối diazoni Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu vàng,
cam, đỏ cam, hồng, đỏ. trong alcohol
Tannin
Vanilin/ H2SO4 Phản ứng dƣơng tính nếu xuất hiện màu đỏ đậm.
gelatin 5% +
Phản ứng dƣơng tính nếu xuất hiện kết tủa. NaCl 1%
Pb(CH3COO)2
Phản ứng dƣơng tính nếu xuất hiện kết tủa. 10%
Glycoside
Baljet Phản ứng dƣơng tính nếu xuất hiện màu
vàng cam hoặc hồng xỉn.
Kedde Phản ứng dƣơng tính nếu xuất hiện màu hồng
tím.
Raymond Phản ứng dƣơng tính nếu xuất hiện màu tím
hoặc xanh.
Tollens Phản ứng dƣơng tính nếu xuất hiện kết tủa.
Bortrager/ KOH Phản ứng cho màu đỏ, tím hoặc xanh lục
cho thấy sự có mặt của quinone.
Dung dịch kiềm Phản ứng cho màu vàng chứng tỏ có các polyphenol khác nhau.
polyphenol
FeCl3/ HCl Phản ứng dƣơng tính nếu xuất hiện màu lục, xanh, đen.
Rosenheim Phản ứng cho màu xanh dƣơng cho thấy sự
có mặt của saponin triterpen.
Terpenoid Salkowski Phản ứng cho màu đỏ đậm, xanh, tím cho
thấy sự có mặt của steroid. và steroid
Liebermann Phản ứng dƣơng tính nếu xuất hiện màu đỏ
hoặc xanh cho thấy sự có mặt của steroid và terpenoid.
- Burchardt Phenol và
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN