T ỔNG QUAN ÀI LIỆU
4.3 Xây dựng phương trình đường chuẩn
4.3.1 Đường chuẩn trifluralin trên mẫu cá
Bảng 4.5 Tín hiệu (diện tích peak) trifluralin ở các nồng độ khác nhau
Nồng độ dung dịch chuẩn (ppb) Diện tích peak 5 14687 10 25663 20 32360 30 38260 50 81252 70 87700 Hiệu suất (%) Quy trình
33 y = 1184.2x + 10140 R2 = 0.9475 0 20000 40000 60000 80000 100000 0 20 40 60 80
Hình 4.8 Đồ thị đường chuẩn trifluralin trên mẫu cá
Hình 4.9 Sắc ký đồ chạy chuẩn trifluralin trên mẫu các ở các nồng độ
khác nhau Diện tích peak Nồng độ (ppb) Peak trifluralin 70ppb 50ppb 30ppb 20ppb 10ppb 5ppb
34
4.3.2 Đường chuẩn trifluralin trên mẫu nước
Bảng 4.6 Diện tích peak của dung dịch chuẩn trifluralin ở các nồng độ
khác nhau Nồng độ dung dịch chuẩn (ppb) Diện tích peak 5 40213 10 42911 20 48491 30 63310 50 74682 70 77179 y = 622.7x + 38598 R2 = 0.9248 0 20000 40000 60000 80000 100000 0 10 20 30 40 50 60 70 80
Hình 4.10 Đường chuẩn trifluralin trên mẫu nước
4.5 Giới hạn định lượng Cách quy đổi ppb Cách quy đổi ppb g ng g g ppm 1000 1 1000 1 1 1
Spike chuẩn trên 2 g mẫu cá
Trifluralin : 60 µL nồng độ 10 ppb => 0,6 ŋg
/2 g = 0,3 ŋg/g Spike chuẩn trên 50 mL mẫu nước
Trifluralin : 100 µL nồng độ 100 ppb => 10 ŋg/50 mL = 0,2 ŋg/mL
Nồng độ (ppb) Diện tích peak
35 Bảng 4.7 Giới hạn phát hiện trên mẫu
Mẫu LOQ trên mẫu (ppb)
Trifluralin
Cá 0,3 ppb
Nước 0,2 ppb
4.6 Thí nghiệm xác định thời gian tồn lưu của trifluralin trong sản phẩm
cá tra (pangasianodon hypophthalmus) và trong mẫu nước 4.6.1 Các yếu tố môi trường
4.6.1.1 Nhiệt độ
Bảng 4.8 Nhiệt độ trong quá trình thí nghiệm
Nghiệm thức Nhiệt độ trung bình các ngày thu mẫu
Sáng Trưa Chiều
I 28,1 ± 0,21 29,5 ± 0,25 28,8 ± 0,15 II 28,3 ± 0,44 29,8 ± 0,53 29,3 ± 0,52 Qua bảng 4.8 cho thấy nhiệt độ trung bình trong ngày dao động trong khoảng 28,1 đến 29,8. Do ảnh hưởng của ánh sáng mặt trời, nhiệt độ trung bình buổi trưa và chiều luôn cao hơn buổi sáng. Nhiệt độ từ 28 – 300C thích hợp cho sự phát triển của cá tra.
4.6.1.2 Oxy hòa tan
Bảng 4.9 Oxy hòa tan trong quá trình thí nghiệm
Nghiệm thức Nhiệt độ trung bình các ngày thu mẫu
Sáng Trưa Chiều
I 7,9 ± 0,2 6,8 ± 0,15 7,8 ± 0,25 II 7,7 ± 0,46 6,7 ± 0,53 7,7 ± 0.15 Hàm lượng oxy hòa tan giữa các thí nghiệm dao động trong khoảng từ 6,8 đến 7,9. Hàm lượng oxy hòa tan cao do thí nghiệmđược bố trí sục khí liện
36
4.6.1.3 pH
Bảng 4.10 pH trong quá trình thí nghiệm
Nghiệm thức Nhiệt độ trung bình các ngày thu mẫu
Sáng Trưa Chiều
I 7,5 ± 0,32 6,5 ± 0,25 7,0 ± 0,42 II 7,3 ± 0,12 6,6 ± 0,40 7,1 ± 0,32 Giá trị pH giữa các thí nghiệmdao động không lớn hơn 1 đơn vị (từ 6,5
đến 7,5). pH giữa các buổi không có sự chênh lệch nhiều và nhìn chung pH nằm trong khoảng thích hợp cho cá. Theo Dương Nhật Long (2002), pH thích
hợp cho cá khoảng 6,0 – 8.
4.6.2 Sự tồn lưu trifluralin trong nước
Bảng 4.11 Sự tồn lưu trifluralin trong nước trong quá trình thí nghiệm
Hóa chất
Nồng độ
(ppb)
Nồng độ hóa chất ở các thời gian khác nhau (ppb)
Trifluralin Ngày 0 6h sau gây nhiễm lần 1 (T1) 6h sau gây nhiễm lần 2 (T2) 3 ngày (T3) 25 < LOD 0,8 ± 0,54 1,5 ± 0,83 < LOD 50 < LOD 1,9 ± 0,77 2,5 ± 0,52 < LOD
Hình 4.11 Sự tồn lưu của trifluralin trong nước theo thời gian thí
nghiệm
Kết quả phân tích cho thấy nồng độ trifluralin trong nước sau khi gây
nhiễm lần một ở nghiệm thức 0,025 ppm là 0,8 0,54 ppb và ở nghiệm thức
0,05 ppm là 1,9 0,77 ppb.
Nồng độ
37
Nồng độ trifluralin trong nước tăng lên (khoảng 2 lần) khi tiếp tục gây
nhiễm lần hai. Tuy nhiên sau 3 ngày lấy mẫu nước phân tích thì không còn phát hiện nồng độ trifluralin trong mẫu nước. Nguyên nhân do quá trình thí nghiệm, bể được sục khí liên tục đồng thời mỗi ngày các bể thí nghiệm được thay 30% nước sẽ làm giảm dần nồng độ trifluralin trong nước, cho nên đến
ngày thứ ba sau khi kết thúc gây nhiễm hóa chất trifluralin lần hai, nồng độ
trifluralin còn lại trong nước thấp hơn giới hạn phát hiện.
4.6.2 Sự tồn lưu trifluralin trong cá
Bảng 4.12 Sự tồn lưu trifluralin trong cá theo thời gian
Nồng độ
(ppb)
Nồng độ hóa chất ở các thời gian khác nhau (ppb)
6h sau gây nhiễm lần1 (T1) 6h sau gây nhiễm lần2 (T2) 3 ngày (T3) 7 ngày (T4) 15 ngày (T5) 30 ngày (T6) 45 ngày (T7) 25 147 54 175 17 86 23 77 9 66 15 36 2 < LOD 50 265 49 584 58 188 3 99 33 68 12 46 17 < LOD
T0 : Ngày thu mẫu trước khi gây nhiễm.
Hình 4.12 Sự tồn lưu trifluralin trong cá tra Thời gian
38
Sau khi gây nhiễm, lượng tồn lưu trifluralin trong cơ cá cao nhất ở các
bể gây nhiễm nồng độ 0,025 ppm là 175 17 ppb và ở các bể gây nhiễm nồng độ 0,05 ppm là 584 ± 58 ppb.
Kết quả bảng 4.12 cho thấy lượng trifluralin trong cơ cá giảm dần theo thờigian đến ngày thứ 30 kể từ khi kết thúc gây nhiễm. Lượng trifluralin trong các bể gây nhiễm nồngđộ 0,025 ppm còn lại 36 2 ppb giảm 79,4% và các bể
nồng độ 0,05 ppm là 46 17 ppb, giảm 92,0% so với nồng độ sau lần gây nhiễm lần thứ hai. Càng về sau sự đảo thải diễn ra chậm dần, sau khi kết thúc gây nhiễm lầnhai đến ngày thứ 7, lượng trifluralin đào thảiđược 83% ở các bể
nồngđộ gây nhiễm 0,05 ppm, bể có nồngđộ gây nhiễm 0,025 ppm là 55,7%. Trong khi đó từ ngày 7 đến ngày thứ 15 chỉ có 30,5% lượng trifluralin trong cơ cá ở các bể có nồngđộ gây nhiễm 0,05 ppm đượcđào thải còn ở các bể có nồngđộ gây nhiễm 0,025 ppm thì chỉ có 14,8%. Từ ngày 15 đến ngày 30 trung bình lượng trifluralin ở hai nồng độ gây nhiễm đào thải được 45,3% so với lượng còn lại của ngày thứ 15. Đến ngày 30 ở các bể có nồngđộ gây nhiễm
0,025 ppm lượng trifluralin còn lại trong cơ cá là 36 2 ppb, bể nồngđộ 0,05 ppm là 46 17 ppb. Theo dõi đến ngày 45 sau khi kết thúc gây nhiễm lượng trifluralin trong cơ cá khi phân tích thấp hơn giới hạn phát hiện.
Từ kết quả phân tích được khi gây nhiễm trifluralin vào cá tra ở hai nồng độ 0,025 ppm và 0,05 ppm với hai lần gây nhiễm, mức độ tồn lưu của
trifluralin sau 45 ngày trong cá tra thấp hơn giới hạn phát hiện. Như vậy sau 45 ngày trifluralin được đào thải gần như hoàn toàn khỏi cơ thịt cá tra.
39
Chương 5
Kết Luận Và Đề Xuất 5.1 Kết luận
Sau thời gian thí nghiệm khảo sát các phương pháp chiết tách và điều
kiện phân tích trifluralin trên hệ thống sắc ký khí đã cho kết quả như sau:
Chiết tách trifluralin trong sản phẩm cá tra bằng dung môi acetonitril : aceton
(tỷ lệ 1:1) với hiệu suất thu hồi 84,1% và chạy trên hệ thống sắc ký khí sử
dụng cột SPB-1 với chương trình nhiệt độ cột giữ ở 1000C trong 3 phút, tăng
lên 2000C giữ 2 phút tốc độ tăng nhiệt độ 150C/phút, tăng lên 2400C giữ 1 phút
tốc độ tăng nhiệt độ 150C/phút và tăng lên 2700C giữ 2 phút, tốc độ tăng nhiệt độ 100C/phút.
Ở thí nghiệm xác định thời gian tồn lưu của trifluralin trong cá tra, sau
khi cá được gây nhiễm ở các nồng độ 0,025 ppm và 0,05 ppm. Kết quả sau 45
ngày lượng trifluralin còn lại trong cơ cá ở các bể nồng độ gây nhiễm 0,025
40
Hình 5.1 Quy trình phân tích trifluralin trên mẫu cá
Hỗn hợp tách 2 phần
- Dung dịch chuẩn Trifluralin - Thêm 2 g Na2SO4
- Vortex
Ống ly tâm 15 mL
Cân 2 gmẫu đã nghiền đồng nhất
Dịch chiết (lần 1) Hỗn hợp tách 2 phần Dịch chiết (lần 2) Phần rắn - Thêm 5 mL dung dịch acetonitril : aceton (tỉ lệ 1:1) - Lắc ngang 20 phút, tốc độ 300 vòng/phút, ly tâm 20 phút, tốc độ 4000 vòng/phút ở 250C Cô quay ở 450C - Thêm 5 mL acetonitril : aceton (tỉ lệ 1:1) - Lắc ngang 20 phút, tốc độ 300 vòng/phút, ly tâm 20 phút, tốc độ 4000 vòng/phút ở 250C Hoàn nguyên bằng 1 mL n-hexan và đem vortex. Lọc (Ø = 2 µm)
Phân tích trên GC Phần rắn
41
Hình 5.2 Quy trình phân tích triflualin trong mẫu nước
Cân 50 mLmẫu (nướcđã được lọc)
Hỗn hợp tách 2 lớp Cô quay ở 450C - Thêm 5 mL Etylacetat - 5 mL chlorofom - Lắc đều, để yên 5 phút. Hoàn nguyên bằng 1 mL
n-hexan và đem vortex.
Lọc (Ø = 2 µm) Phân tích trên GC Loại bỏ 250 mL Lớp dưới (chiết lần 1) Lớp trên - Thêm 5 mL Etylacetat - 5 mL chlorofom - Lắc đều, để yên 5 phút. Hỗn hợp tách 2 lớp Lớp trên Lớp dưới (chiết lần 2) 2 mL DEG
42
5.2 Đề Xuất
Khảo sát thêm ở những cột sắc ký khác và chương trình nhiệtđộ khác nhau.
Nghiên cứu tồn lưu trên một số đối tượng khác như tôm sú, cá lóc, cá rô phi… ở quy mô ao nuôi.
43
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1.Dương Nhật Long 2005. Giáo trình kỹ thuật nuôi thủy sản nước lợ.
Khoa Thủy Sản – Đại Học Cần Thơ (trang 19 – 20).
2.Erdogan, M, 2002. Investigation of dichlorvos and Trifluralin pesticide levels in tahtali dam water. Master of science. Izmir Institute of Technology Izmir, Turkey.
3.GmbH, B, 2010. Exploration of management options for trifluralin. 4.Hartless, C. M. Janson and R. Miller, 2009. Risks of trifluralin use to
the federally listed California red-legged Fog (rana aurora draytonii), delta smelt (hypomesus transpacificus), San francisco garter snake (thamnophis sirtalis tetrataenia), and san joaquin kit fox (vulpes macrotis mutica). Washington, D.C. 91 pp.
5.http://www.uvvietnam.com.vn/NewsDetail.aspx?newsId=12, truy cập ngày 20/01/2011. 6.http://www.gso.gov.vn/default.aspx?tabid=621&ItemID=11071, truy cập ngày 10/06/2011. 7.http://www.docstoc.com/docs/38539222/Maximum-Residue-Limits- %28MRLs-%28ppm%29#, truy cập ngày 20/11/2010. 8.http://www.bannhanong.vietnetnam.net/home.php?cat_id=29&id=717& kh 9. http://www.qppl.quangngai.gov.vn/congbao.nsf/.../$file/Bnn13%202604 02.doc , truy cập ngày 10/11/2010.
10.http://www.fluoridealert.org/pesticides/trifluralin.japan.limits.htm, truy cập ngày 13/11/2010.
11.Quyết định số 07/2005/QĐ-BTS của Bộ Thủy Sản.
12.Quyết định số 2985/QĐ-BNN-QLCL của Bộ Nông nghiệp & PTNT.
13.Thông tư số 20/2010/TT-BNNPTNT của Bộ Nông nghiệp & PTNT.
14.Thông tư số 64/2010/TT-BNNPTNT của Bộ Nông nghiệp & PTNT.
15.Trần Phương Ngọc Hân, 2009. Tìm hiểu phương pháp kiểm nghiệm
thủy sản tại phòng kiểm nghiệm Intertek-Cần Thơ. Luận văn tốt nghiệp đại học, Đại học Cần Thơ, Cần Thơ.
16.US EPA, 1996. Reregistration Eligibility Decision Trifluralin.United States Environmental Protection Agency, Washington D.C.
17.WHO, 1999. Occupational exposures in insecticide application, and some pesticides. IARC monographs on the evaluation of carcinogenic risks to humans, volume 53: 515 – 531.
44
18.WHO, 1996. Trifluralin in drinking water. Guidelines for drinking- water quality, volumn 2.
19.W, A, 2009. Trifluralin. Biology. 447. 89 pp.
20.VASSEP, 2010. Bản tin thương mại thủy sản. VASEP, 39: trang 3.
21.VASSEP, 2010. Bản tin thương mại thủy sản. VASEP, 43: trang 2.
22.Võ Phước Thọ, 2009. Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích dư lượng trifluralin trong sản phẩm thủy sản (cá Tra - Pangasianodon hypophthalmus) bằng phương pháp sắc ký. Luận văn tốt nghiệpđại học, Đại học Cần Thơ, Cần Thơ.
23.Vương Thanh Tùng, 2009. Bài giảng Phân Tích Thực Phẩm Thủy Sản.
45
Phụ Lục 1
BỘ THỦY SẢN
Số: 07/2005/QĐ-BTS
CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM
Độc lập - Tự do - Hạnh phúc
Hà Nội, ngày 24 tháng 02 năm 2005
QUYẾT ĐỊNH CỦA BỘ TRƯỞNG BỘ THỦY SẢN
V/v ban hành danh mục hoá chất, kháng sinh cấm và hạn chế sử dụng trong sản xuất, kinh doanh thuỷ sản
BỘ TRƯỞNG BỘ THỦY SẢN
Căn cứ Pháp lệnh Thú y năm 2004;
Căn cứ Nghị định số 43/2003/NĐ-CP ngày 2/5/2003 của Chính phủ quy định chức năng, nhiệm vụ, quyền hạn và cơ cấu tổ chức của Bộ Thuỷ sản
Căn cứ Quyết định số 03/2002/QĐ-BTS ngày 22/1/2002 của Bộ trưởng Bộ
Thuỷ sản về việc ban hành Qui chế quản lý thuốc thú y thuỷ sản;
Xét đề nghị của Cục trưởng Cục Quản lý Chất lượng, an toàn vệ sinh và thú y thuỷ sản và Vụ trưởng Vụ Khoa học công nghệ.
QUYẾT ĐỊNH Điều 1: Ban hành kèm theo Quyết định này:
Danh mục hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng trong sản xuất, kinh doanh
thuỷ sản nêu tại Phụ lục 1 và Danh mục hoá chất, kháng sinh hạn chế sử dụng
trong sản xuất, kinh doanh thuỷ sản nhằm khống chế dư lượng trong sản phẩm
thuỷ sản thấp hơn giới hạn tối đa cho phép nêu tại Phụ lục 2.
Điều 2: Không cho phép trộn lẫn quá 02 loại chất kháng sinh trong 01 sản
phẩm thuốc, hoá chất; không cho phép trộn lẫn các hoạt chất cùng nhóm Fluoroquinolone với nhau. Trong trường hợp một sản phẩm có chứa 02 loại
hoạt chất kháng sinh, cơ sở sản xuất phải có đủ bằng chứng khoa học và thực
tiễn để đảm bảo trộn lẫn không làm giảm tính năng tác dụng của tứng loại và không phát sinh tác dụng xấu đối với động vật nuôi và môi trường.
Mọi sản phẩm thức ăn, hoá chất tẩy rửa khử trùng, hoá chất tẩy rửa ao đầm
nuôi, thuốc thú y, hoá chất bảo quản thủy sản phải ghi nhãn theo Quyết định
số 178/1999/QĐ-TTg ngày 308/1999 của Thủ tướng Chính phủ, Thông tư số
03/2000/TT-BTS ngày 22/9/2000 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản và kèm theo dòng chữ: “Không chứa các chất cấm sử dụng theo Quyết định số
07/2005/QĐ-BTS ngày 24 tháng 2 năm 2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản”.
Điều 3: Quyết định này có hiệu lực thi hành sau mười lăm (15) ngày kể từ ngày đăng Công báo và thay thế Quyết định số 01/2002/QĐ-BTS ngày
46
22/1/2002 của Bộ Thủy sản về việc cấm sử dụng một số hoá chất, kháng sinh
trong sản xuất, kinh doanh thủy sản và Danh mục thuốc thú y thủy sản hạn chế
sử dụng trong nuôi trồng thủy sản ban hành kèm theo Quyết định số 17/2002/QĐ-BTS ngày 24/5/2002 của Bộ Thủy sản. Riêng đối với các chất có
số thứ tự từ 12 đến 17 tại Phụ lục 1 có hiệu lực thi hành từ ngày 1/7/2005.
Điều 4: Cục trưởng Cục Quản lý Chất lượng, an toàn vệ sinh và Thú y thủy
sản chịu trách nhiệm tổ chức thực hiện và kiểm tra việc thực hiện Quyết định
này.
Chánh Văn phòng Bộ; Thủ trưởng các Cục, Vụ, Thanh tra Bộ; Giám đốc
Trung tâm Khuyến ngư Quốc gia và Thủ trưởng các đơn vị sự nghiệp trực
thuộc Bộ; Giám đốc các Sở thủy sản, Sở Nông nghiệp và phát triển nông thôn có quản lý Nhà nước về thủy sản; và các cá nhân, tổ chức sản xuất, kinh
doanh, nhập khẩu, sử dụng thức ăn, thuốc thú y, hoá chất, chế phẩm sinh học,
vi sinh vật dùng trong hoạt động thủy sản chịu trách nhiệm thi hành Quyết định này.
KT.BỘ TRƯỞNG BỘ THỦY SẢN
THỨ TRƯỞNG
47
DANH MỤC HOÁ CHẤT, KHÁNG SINH CẤM SỬ DỤNG TRONG
SẢN XUẤT, KINH DOANH THỦY SẢN
(Ban hành kèm theo Quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24 tháng 2 năm 2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản)
TT Tên hoá chất, kháng sinh Đối tượng áp dụng
1 Aristolochia spp và các chế phẩm từ
chúng
Thức ăn, thuốc thú y, hoá
chất, chất xử lý môi trường,
chất tẩy rửa khử trùng, chất
bảo quản, kem bôi da tay
trong tất cả các khâu sản
xuất giống, nuôi trồng động
thực vật dưới nước và lưỡng cư, dịch vụ nghề cá và bảo quản, chế biến. 2 Chloramphenicol 3 Chloroform 4 Chlorpromazine 5 Colchicine 6 Dapsone 7 Dimetridazole 8 Metronidazole
9 Nitrofuran (bao gồm cả Furazolidone)
10 Ronidazole
11 Green Malachite (Xanh Malachite) 12 Ipronidazole 13 Các Nitroimidazole khác 14 Clenbuterol 15 Diethylstibestrol (DES) 16 Glycopeptides 17 Trichlorfon (Dipterex)