4. ðố it ượ ng, phạm vi và ñị añ iểm nghiên cứ u
2.3.8.Phương pháp xác ñị nh tên vi sinh vật ñố i kháng
Xác ựịnh tên vi sinh vật bằng phương pháp phân loại học phân tử dựa trên cơ sở giải trình tự ựoạn gen 16s ARN riboxom của các vi khuẩn, và 26s ADN riboxom của nấm nghiên cứu. So sánh với các trình tự có sẵn trong ngân hàng gen quốc tế EMBL bằng phương pháp FASTA 33 ựểựịnh loại ựến loài các vi sinh vật. Trình tự
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ50
nucleotit của các VSV nghiên cứu ựược giải trình trên máy tự ựộng ABI-377 của Hãng Perkin-Elmer (Mỹ), sau ựó ựược xử lý bằng chương trình SeqEd1.03 và chương trình AssemblyLIGN 1.9 trong hệ chương trình MacVector 6.5.3 (Oxford Molecular Inc.). Truy cập Ngân hàng Gen bằng chương trình Entrez/nucleotide/ tìm kiếm các trình tự gen 16s ARN riboxom của vi khuẩn và 26s ADN riboxom của nấm. So sánh ựối chiếu và xử lý số liệu của tất cả các chuỗi bằng chương trình GENDOC2.5. Thành phần nucleotit ựược thu nhận bằng cách sử dụng bộ mã của vi sinh vật bậc thấp trong Ngân hàng Gen (bảng mã di truyền số 11) thông qua chương trình GENDOC 2.5. Tên vi sinh vật ựược xác ựịnh với xác suất tương ựồng cao nhất.
độ an toàn sinh học của các chủng vi sinh vật sử dụng trong ựời sống có ý nghĩa ựặc biệt quan trọng. Theo hướng dẫn số 90/679/EWG ngày 26 thàng 11 năm 1990 của cộng ựồng Châu Âu về an toàn sinh học, nhóm tác nhân sinh học ựược phân làm 4 cấp ựộ an toàn, trong ựó chỉ các vi khuẩn ở cấp ựộ 1 và 2 ựược ứng dụng trong sản xuất ởựiều kiện bình thường.
- Cấp ựộ 1 (Risiko gruppe 1) là các vi khuẩn không có thể gây bất cứ một nguy hiểm nào ựối với người và ựộng vật
- Cấp ựộ 2 (Risiko gruppe 2) bao gồm các vi khuẩn có thể gây bệnh ựối với người, ựộng vật ở mức ựộ thấp, không có khả năng lan truyền và có thể phòng, chống và loại trừ dễ dàng trong ựiều kiện bình thường.
- Cấp ựộ 3 (Risiko gruppe 3) là các vi khuẩn có nguy cơ gây bệnh nặng ựối với người, ựộng vật và có khả năng lan truyền rộng, song vẫn có thể phòng chống và loại trừ ựược.
- Cấp ựộ 4 (Risiko gruppe 4) là các vi khuẩn có thể gây bệnh nặng ựối với người, ựộng vật, có nguy cơ lớn về mức ựộ lan truyền rộng và không thể phòng, chống hoặc loại trừ.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ51
2.3.9. Phương pháp xử lý số liệu
Tất cả số liệu thắ nghiệm ựều ựược phân tắch, so sánh theo phương pháp thống kê sinh học của Phạm Chắ Thành (1988) [28] và chương trình phân tắch số liệu Excel, phần mềm IRRISTAT 4.0.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ52 CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. đIỀU TRA MỨC đỘ NHIỄM BỆNH HÉO RŨ VÀ TRIỆU CHỨNG BỆNH HÉO RŨ TRÊN DƯA HẤU
3.1.1. điều tra mức ựộ nhiễm bệnh héo rũ dưa hấu tại một số tỉnh phắa Bắc
Trong năm 2007, ựề tài tiến hành ựiều tra bệnh héo rũ dưa hấu tại các nơi thuộc một số tỉnh phắa Bắc có trồng nhiều dưa hấu như Hoà Bình, Vĩnh Phúc, Bắc Giang và Hải Dương. Bệnh héo rũ dưa hấu ựã ựược phát hiện ở hầu hết các vùng trồng dưa hấu như huyện Kim Bôi, Lạc Sơn, Yên Thuỷ, Lạc Thuỷ, Tân Lạc thuộc tỉnh Hoà Bình; huyện Yên Lạc, Vĩnh Tường, Tam đảo thuộc tỉnh Vĩnh Phúc; huyện Tân Yên, Yên Dũng thuộc tỉnh Bắc Giang và huyện Gia Lộc, Hải Dương.
Tại Hoà Bình dưa hấu ựược trồng phổ biến trong vụ Xuân từ tháng 2 ựến tháng 5 với các giống chủ yếu là dưa hấu lai nhập khẩu của Thái Lan, Trung Quốc, Hàn Quốc như Simenit 359, 668; Hưng Nông 1789, 1888, 1752, 148; Siêu nhân 150; Syngenta 24,29Ầ
Tại Vĩnh Phúc dưa hấu ựược trồng 2-3 vụ/năm, có nơi trồng 3 vụ liên tiếp như vụ Xuân, vụ Hè, vụ Thu (Yên Lạc); Vụ Xuân, vụ đông (Tam đảo) với các giống như An Tiêm, Syngenta 227, Syngenta TN 308, Hưng nông, Simenit.
Tại Bắc Giang dưa hấu ựược trồng nhiều trong vụ đông, vụ Xuân với các giống chủ yếu là dưa hấu hạt lai nhập từ Thái Lan (Syngenta 227, 229).
Tại huyện Gia Lộc, Hải Dương nông dân trồng dưa hấu Hè và dưa hấu vụ đông-Xuân. Giống dưa sử dụng chủ yếu là giống của công ty Giống Trang Nông, Nông Hữu, Hưng Nông.
Năm 2007 ựề tài ựiều tra trong vụ Xuân, vụ Hè-Thu. Tiến hành ựiều tra chủ yếu trong thời kỳ cây con, thời kỳ cây ra hoa và hình thành quả. Kết quả ựiều tra cho thấy sự gây hại của bệnh héo rũ dưa hấu rất khác nhau phụ thuộc vào ựiều kiện khắ hậu của từng nơi, tỉ lệ gây hại khác nhau ở các ựiều kiện khắ hậu khác nhau. Có
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ53
thể bắt gặp ở các ựịa ựiểm và thời ựiểu khác nhau cây dưa hấu chết hàng loạt, có khi cả ruộng thậm chắ cả cánh ựồng. Mức gây hại của bệnh trên hình 3.1.
Hình 3.1. Ruộng dưa hấu bị héo rũ tại Hoà Bình
Bệnh héo rũ dưa hấu phổ biến ở tất cả các ựịa phương trồng dưa hấu. Tỉ lệ cây bị bệnh biến ựộng tuỳ thuộc vào mùa vụ và ựiều kiện khắ hậu của từng ựịa phương. Số liệu ựiều tra tỉ lệ bệnh trong vụ Xuân, vụ Hè-Thu năm 2007 tại các tỉnh trồng nhiều dưa hấu ựược tổng hợp trên bảng 3.1.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ54
Bảng 3.1. Tỉ lệ (%) dưa hấu bị bệnh héo rũở các tỉnh phắa Bắc năm 2007
địa ựiểm Tỉ lệ cây chết (%) TT
Tỉnh Huyện Xã Vụ Xuân Vụ Hè- Thu
1 Hoà Bình Kim Bôi Tân Thành 22,9 -
-- -- Hợp Thành 33,4 - -- Lập Sơn 25,7 - -- Vĩnh Tiến 24,1 - -- Lạc Sơn Yên Nghiệp 30,4 - -- -- Yên Phú 32,2 - -- -- Liên Vũ 34,1 - -- -- An Nghĩa 31,6 - -- Yên Thuỷ Bảo Hiệu 45,6 - -- -- Lạc Thịnh 37,9 - -- -- Lạc Lương 46,4 - -- -- đoàn Kết 27,8 - -- Tân Lạc Ngọc Mỹ 21,8 - -- -- Tứ Lê 25,6 - -- -- Mãn đức 18,7 - -- Lạc Thuỷ An Lạc 23,6 - -- -- An Bình 21,5 - -- -- đại Thắng 23,4 - 2 Vĩnh Phúc Vĩnh Tường đại đồng 14,0 28,6 -- -- Chấn Hưng 13,5 31,4 -- -- Thổ Tang 11,8 32,8 -- Tam đảo đạo Trù 40,5 - -- -- Bắc Bình 45,6 - -- -- Bồ Lý 44,2 - (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ55 -- Yên Lạc Hồng Phương 22,3 42,1
-- -- Liên Châu 24,7 39,3
3 Bắc Giang Tân Yên Tân Trung 21,5 - -- Yên Dũng Tân Tiến 27,8 -
-- -- Tân An 24,9 -
4 Hải Dương Gia Lộc Gia Xuyên 11,2 14,6 -- -- Toàn Thắng 12,1 13,3
-- -- Gia Tân 12,3 14,5
Ghi chú: --: như trên; -: không trồng, không theo dõi
Kết quả bảng 3.1 cho thấy tỉ lệ cây dưa hấu bị héo rũ tại Hoà Bình biến ựộng từ 18,7 ựến 46,4% (vụ Xuân 2007), cao nhất ở các xã thuộc huyện Lạc Sơn và huyện Yên Thuỷ. Tại xã Lạc Lương, xã Bảo Hiệu thuộc huyện Yên Thuỷ tỉ lệ bệnh là 45,6-46,4%; xã Yên Phú, xã Liên Vũ huyện Lạc Sơn là 32,2-34,1%.
Tỉnh Hải Dương có tỉ lệ dưa hấu chết héo thấp nhất (dưới 15%). đây là vùng chuyên trồng cây màu, dưa hấu mới ựược phát triển ựược trong vài năm gần ựây. Người nông dân sử dụng chế ựộ luân canh thường xuyên, vì vậy tỉ lệ cây nhiễm bệnh khá thấp.
Tại tỉnh Vĩnh Phúc và Bắc Giang tỉ lệ cây dưa hấu chết do héo rũ cũng tương ựối cao (trên 20%). Riêng tại các xã thuộc huyện Tam đảo, Vĩnh Phúc tỉ lệ bệnh 40,5-45,6%, có thể là do nông dân tại ựây trồng dưa hấu trong nhiều năm không có chế ựộ luân canh và ựiều kiện khắ hậu tại Tam đảo rất thắch hợp cho bệnh héo phát triển.
Như vậy, bệnh héo rũ dưa hấu ựều xuất hiện ở các tỉnh trồng dưa hấu như Hoà Bình, Vĩnh Phúc, Bắc Giang, Hải Dương với tỉ lệ cây bệnh biến ựộng từ 11,2 ựến 46,4% phụ thuộc vào từng vùng.
Kết quả ựiều tra tại vùng trồng 2 vụ dưa hấu liên tiếp trong năm, cho thấy ở Vĩnh Phúc trong vụ Hè-Thu tỉ lệ cây dưa hấu bị bệnh héo rũựều cao hơn trong vụ Xuân. Ở xã Liên Châu (Yên Lạc, Vĩnh Phúc) tỉ lệ cây héo trong vụ Hè-Thu là
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ56
39,3% cao hơn 24,7 trong vụ Xuân. Xã Hồng Phương (Yên Lạc, Vĩnh Phúc) tỉ lệ cây dưa hấu bị bệnh héo là 42,1% trong vụ Hè-Thu, cao hơn 22,3% trong vụ Xuân.
0 5 10 15 20 25 30 T ỉ l ệ b ệ nh ( % )
Hoà Bình Vĩnh phúc Bắc Giang Hải Dương
Hình 3.2. Tỉ lệ (%) cây dưa hấu bị héo rũở các tỉnh phắa Bắc trong vụ Xuân năm 2007 năm 2007
Nhìn chung, tỉ lệ cây dưa hấu bị bệnh héo rũ tại tỉnh Hòa Bình cao nhất mặc dù có những xã, những huyện có tỉ lệ bệnh thấp. đây là vùng trồng cây dưa hấu liên tục qua nhiều năm, mầm bệnh ựược tắch luỹ dần trong ựất gây bệnh cho cây khi gặp ựiều kiện thuận lợi. Tỉ lệ cây dưa hấu bị bệnh héo chết cũng ựồng nghĩa với tỉ lệ giảm năng suất quả ảnh hưởng tới thu nhập của người nông dân.
Ngoài ra tại các tỉnh Vĩnh Phúc, tỉnh Bắc Giang tỉ lệ cây dưa hấu chết do héo rũ cũng rất phổ biến. đề tài cũng tiến hành ựiều tra diễn biến của bệnh héo dưa hấu tại những nơi trồng dưa hấu nhiều vụ trong năm.
Kết quả ựiều tra diễn biến bệnh héo rũ dưa hấu tại huyện Vĩnh Tường, Vĩnh Phúc trong vụ Xuân-Hè 2007 ựược thể hiện trên bảng 3.2.
Bảng 3.2. Diễn biễn bệnh héo rũ dưa hấu trên ựồng ruộng tại huyện Vĩnh Tường, Vĩnh Phúc (vụ Xuân-Hè 2007)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ57
Tỉ lệ bệnh (%) sau trồng Ngày ựiều tra
20 ngày 35 ngày 50 ngày
19/3 0 10,1 23,9 26/3 0 11,4 27,5 2/4 0 13,2 30,2 9/4 1,32 13,8 - 16/4 2,14 14,4 - 23/4 3,12 15,2 -
Kết quảựiều tra cho thấy triệu chứng bệnh héo bắt ựầu xuất hiệu từ giai ựoạn cây con và tăng cao vào giai ựoạn ra hoa hình thành quả non. Trong cùng một ngày ựiều tra những ruộng từ 20-35 ngày tuổi bệnh không xuất hiện hoặc xuất hiện thấp, ở những ruộng từ 50 ngày tuổi trở lên, bệnh ựều xuất hiện và có xu hướng tăng cao dần theo tuổi cây. Năm 2007, vào ngày ựiều tra 2/4 ở ruộng sau trồng 35 ngày tỉ lệ bệnh là 13,2%, ở ruộng sau trồng 50 ngày tuổi tỉ lệ bệnh tăng cao ựạt 30,2%.
Diễn biến héo rũ dưa hấu tại huyện Yên Lạc, Vĩnh Phúc cũng theo xu hướng trên. Kết quả ựiều tra tỉ lệ bệnh héo rũ dưa hấu trong mùa vụ khác nhau ựược thể hiện trên bảng 3.3.
Bảng 3.3. Tình hình bệnh héo rũ dưa hấu ở Yên Lạc, Vĩnh Phúc năm 2007 Tỉ lệ bệnh (%) sau trồng
Thời vụ
15-20 ngày 40-45 ngày 50-55 ngày (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Vụ xuân 18,8 22,5 23,1
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ58
Kết quả bảng 3.3 cho thấy bệnh héo rũ dưa hấu ở huyện Yên Lạc,Vĩnh Phúc ựều phát sinh trong cả vụ Xuân và vụ Hè-Thu. Bệnh phát sinh phát triển từ giai ựoạn cây con, gây hại nặng vào thời kỳ cây ra hoa và hình thành quả. Vụ Hè- Thu bệnh phát triển hơn trong vụ Xuân.
0 5 10 15 20 25 30 35 40
15-20 ngày 40-45 ngày 50-55 ngày
T ỉ l ệ b ệ n h ( % ) Vụ xuân Vụ hè Ờthu
Hình 3.3. Tỉ lệ (%) cây dưa hấu bị héo rũ tại Yên Lạc, Vĩnh Phúc năm 2007
Mức ựộ chết héo của dưa hấu phụ thuộc vào ựiều kiện thời tiết của từng vùng và thời vụ trồng. Hình 3.3 cho thấy tỉ lệ cây dưa hấu bị chết héo cao hơn (từ 25,9 ựến 37,4% trong vụ Hè-Thu) có thể do nhiệt ựộ vụ Hè-Thu tăng cao và có mưa. Tham khảo ý kiến của nông dân cho biết, nếu có nắng to sau những trận mưa thì bệnh héo rũ dưa hấu xuất hiện rất nhanh, có khi cả ruộng bị chết héo. Hiện tượng này có thể do những nguyên nhân sau:
- Khi trời mưa thường có sự dịch chuyển ựất, nước và kéo theo cả nguồn gây bệnh từ nơi này tới nơi khác.
- Lá, rễ hoặc thân cây dưa hấu bị tổn thương sau trận mưa và là nơi tác nhân gây bệnh dễ dàng xâm nhập vào bên trong cây.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ59
- Nhiệt ựộ, ẩm ựộ cao dấn tới tăng nhịp ựộ sinh trưởng của tác nhân gây bệnh bên trong cây chủ. Số lượng tế bào vi khuẩn hoặc bào tử nấm tăng lên nhanh chóng bên trong mạch dẫn, bó mạch trở nên tắc nghẽn gây ra cản trở sự dịch chuyển nước và chất dinh dưỡng từ ựất vào rễ lên thân, dẫn tới cây bị chết héo.
3.1.2. Thu mẫu bệnh dưa hấu héo rũ
Thu mẫu bệnh cây là ựiều cần thiết khi nghiên cứu tác nhân gây bệnh. Các mẫu cây dưa hấu bị bệnh héo ựược thu ở tất cả các ựiểm ựiều tra, có ựịa ựiểm thu mẫu 3 lần (mỗi lần cách nhau 15 ngày) ựể phân lập tác nhân gây bệnh.
Quan sát trên ựồng ruộng thấy từng cây héo hoặc từng ựám cây héo, ựôi khi lan rộng ra cả cánh ựồng. Có khi các cây héo chỉở một thân hoặc lá, phần thân còn lại hoàn toàn bình thường (hình 3.4). Cây con bị bệnh thường héo và chết. Cây trưởng thành nhiễm bệnh thì thường còi cọc, sau một thời gian toàn bộ cây héo, chết và ảnh hưởng ựến năng suất của dưa hấu. Nếu trồng liên tục qua nhiều vụ, bệnh sẽ nặng hơn và cả cánh ựồng bị nhiễm bệnh.
Hình 3.4. Cây dưa hấu bị bệnh héo rũ
để phân lập và xác ựịnh tác nhân gây bệnh héo rũ dưa hấu, tạo ựiều kiện cho các thắ nghiệm tiếp theo 113 mẫu cây dưa hấu bị bệnh héo rũ ựã ựược thu thập ựại diện cho các vùng trồng dưa hấu ở 4 tỉnh phắa Bắc (bảng 3.4). Những nơi có diện
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ60
tắch trồng lớn thì lượng mẫu ựược thu sẽ nhiều hơn so với những nơi có diện tắch nhỏ, số lần thu mẫu từ 2 ựến 4 lần. Những nơi có diện tắch rộng trồng dưa hấu trong