3. ðỊ Að IỂM, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
3.2. Nội dung và phương phỏp nghiờn cứu
3.2.1. ðiều tra tỡnh hỡnh sõu mọt trong kho bảo quản sắn lỏt khụ tại Yờn
Bỏi năm 2009
3.2.1.1. ðiều tra thành phần sõu mọt gõy hại trong kho bảo quản sắn lỏt khụ và thiờn ủịch của chỳng tại Yờn Bỏi năm 2009
ðiều tra tại cỏc kho lưu trữ sắn lỏt trờn ủịa bàn tỉnh Yờn Bỏi: kho Nhà mỏy chế biến thức ăn chăn nuụi cao cấp Bỡnh Sơn; kho Xý nghiệp chế biến thức ăn chăn nuụi Việt Thỏi; Tổng kho Nam Cường; kho cửa hàng lương thực Phường Hồng Hà - thành phố Yờn Bỏi.
ðiều tra theo Phương phỏp ủiều tra cơ bản cụn trựng hại kho của tỏc giả Bựi Cụng Hiển.
ðiều tra theo nguyờn tắc 5 ủiểm chộo gúc. ðiều tra ủịnh kỳ 7ngày/lần. ðiều tra sõu mọt gõy hại trực tiếp trờn sắn bảo quản, nơi sõu mọt thường tập trung như khe, kẽ nứt, nền, tường kho, gúc kho, trờn cỏc vật dụng làm kệ, kờ lút, bao bỡ, nơi cú hàng tồn ủọng lõu, mục nỏt. ðiều tra bổ sung khi cần thiết. Số liệu về thành phần sõu mọt hại trờn sắn lỏt bảo quản cú sổ theo dừi và ủược ghi chộp cụ thể, cẩn thận qua mỗi kỳủiều tra.
Lấy mẫu theo phương phỏp: Kiểm dịch thực vật - Phương phỏp lấy mẫu (tiờu chuẩn Việt Nam TCVN 4731-89) [26].
Phương phỏp thu thập, phõn loại mẫu cụn trựng: ðối với cụn trựng cỏnh cứng dựng panh, bỳt lụng và ống nghiệm ủể thu bắt. ðối với cụn trựng cú cỏnh, dựng ống nghiệm ủể chụp lờn trờn và chỳng sẽ bay ngược lờn phớa ủỏy ống hoặc dựng vợt ủể bắt. Mẫu thu ủược của từng ủịa ủiểm ủược ủể riờng trong tỳi nilon cú nhón theo quy ủịnh. Mẫu ủược giỏm ủịnh ủược gửi ủi giỏm ủịnh tại Trung tõm Kiểm dịch thực vật sau nhập khẩu I (ðụng Ngạc – Từ Liờn – Hà Nội).
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp………27
3.2.1.2. ðiều tra diễn biến một số loài sõu mọt gõy hại chớnh trờn sắn lỏt khụ bảo quản tại Yờn Bỏi năm 2009
ðiều tra mật ủộ của 3 loài: mọt ủục hạt nhỏ (Rhizopertha dominica); mọt gạo (Sitophilus ozyzea) và mọt thúc ủỏ (Tribolium castaneum). ðiều tra theo nguyờn tắc 5 ủiểm chộo gúc, ủịnh kỳ 7 ngày/lần. ðiều tra cốủịnh tại cỏc kho bảo quản sắn khỏc nhau.
Kho xylụ: kho bảo quản nằm trong dõy chuyền chế biến tại nhà mỏy chế biến thức ăn gia sỳc.
Kho nụng hộ: kho nụng hộ quy mụ nhỏ (bảo quản trong bể chứa, cú bạt phủ; quy mụ và khối lượng sắn lỏt bảo quản ớt, chủ yếu phục vụ chăn nuụi trong hộ);
Kho tiệp: kho thụng thường (kho kớn - kiểu kho tiệp cải tiến): Nền kho cao, cú hệ thống thụng giú ở phớa dưới ngầm kho; tường xõy gạch trỏt vữa 2 mặt; mỏi lợp ngúi; trần cút; trờn cửa ra vào và cỏc cửa sổủều bố trớ lưới ngăn sự xõm nhập của cỏc loài chim, chuột.. vào trong kho.
3.2.2. Phương phỏp nghiờn cứu ủặc ủiểm hỡnh thỏi, sinh học của mọt ủục
hạt nhỏR. dominica gõy hại trờn sắn khụ bảo quản
Thu mọt ủục hạt nhỏ trưởng thành qua quỏ trỡnh ủiều tra và nuụi trong hộp nhựa bờn trong cú chứa thức ăn là sắn lỏt ủó ủược khử trựng và làm sạch (khử trựng ở ủiều kiện nhiệt ủộ 600C trong 45phỳt) - ủõy là nguồn cung cấp mọt cho cỏc thớ nghiệm của ủề tài.
Quan sỏt, mụ tả màu sắc và ủo kớch thước của từng pha phỏt dục với số lượng mọt quan sỏt là 30 cỏ thể. ðơn vịủo là mm.
- Pha trứng: ủo chiều dài từ mộp trờn ủến mộp dưới của trứng theo hướng nhất ủịnh, chiều rộng ủo phần rộng nhất;
- Pha sõu non: chiều dài, chiều rộng: ủo ở nơi rộng nhất từng tuổi sõu; - Pha nhộng: ủo chiều dài, chiều rộng ủo nơi rộng nhất của nhộng; - Pha trưởng thành: ủo chiều dài, chiều rộng (nơi rộng nhất của cơ thể).
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp………28
Dựng cụng thức thống kờ sinh học ủể tớnh kớch thước trung bỡnh:
nXi Xi
X ∑
=
Trong ủú: X : kớch thước trung bỡnh của từng pha; Xi: giỏ trị kớch thước cỏ thể thứ i; n: số cỏ thể theo dừi.
Thời gian phỏt dục trung bỡnh ủược tớnh theo cụng thức: N ni Xi X ∑ = .
Trong ủú: X : thời gian phỏt dục trung bỡnh của từng pha; Xi: thời gian phỏt dục của cỏ thể thứ i;
ni: số cỏ thể lột xỏc trong ngày thứ i. N: số cỏ thể theo dừi. Tớnh sai số theo cụng thức: n t X X δ. ± =
t: tra bảng Student - Fisher, ủộ tin cậy P=95%, ủộ tự do v=n-1; δ: ủộ lệch chuẩn; n: số cỏ thể theo dừi.
Tiến hành thớ nghiệm nuụi sinh học loài mọt ủục hạt nhỏ Rhizopertha
dominica Fabricius: Dựng hộp petri loại nhỏ cú lút một lớp giấy trắng bờn dưới. Cho bột sắn ủó ủược làm sạch và khử trựng vào cỏc hộp petri. Trong mỗi hộp thả một cặp mọt với tỷ lệủực cỏi là 1:1. Kiểm tra, tỡm trứng và thay thức ăn hàng ngày (1 lần/ngày).
- Với pha trứng: kiểm tra hàng ngày. khi thấy trứng ghi lại ngày, thỏng và tiến hành tỏch riờng từng quả ủưa vào hộp petri (1 quả/hộp) cú chứa thức ăn là bột sắn. Tiếp tục theo dừi quan sỏt thời ủiểm trứng nở.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp………29
- Với pha sõu non: khi trứng nở thành sõu non tiếp tục theo dừi thời gian phỏt dục của từng tuổi. Quan sỏt mỗi ngày một lần và ghi lại thời ủiểm khi phỏt hiện thấy cú xỏc sõu non của mọt trong hộp petri. Thời gian phỏt dục của mỗi tuổi ủược tớnh từ thời ủiểm lột xỏc lần trước ủến lần lột xỏc tiếp theo.
- Pha nhộng: tiếp tục theo dừi mỗi ngày một lần. Ghi chộp thời ủiểm khi sõu non tuổi cuối bắt ủầu húa nhộng và khi nhộng vũ húa trưởng thành.
- Pha trưởng thành: khi phỏt hiện nhộng vũ húa trưởng thành. Chọn 01 cỏ thể cỏi cho ghộp ủụi với 01 cỏ thểủực và nuụi trong hộp petri cú thức ăn là ngụ hạt. Theo dừi mỗi ngày một lần ủến khi tỡm thấy quả trứng ủầu tiờn và ghi chộp ngày phỏt hiện.
Vũng ủời của mọt ủược tớnh từ khi trứng nở ủến khi mọt trưởng thành ủẻ quả trứng ủầu tiờn.
Thớ nghiệm với cỏc pha ủược tiến hành với hai ngưỡng nhiệt ủộ là 25 và 300C. Với mỗi pha tiến hành quan sỏt 30 cỏ thể. Sau khi thu ủược kết quả, so sỏnh thời gian phỏt dục cỏc pha và vũng ủời của mọt ủục hạt với hai ngưỡng nhiệt ủộở trờn.
Nghiờn cứu khả năng sinh sản của Rhizopertha dominica Fabricius:
Mọt ủục hạt nhỏ ủược nuụi trong mụi trường thức ăn là bột sắn. Trong ủiều kiện giao phối cưỡng bức, tiến hành thớ nghiệm nghiờn cứu khả năng sinh sản của mọt ủục hạt nhỏ với cỏc cụng thức bố trớ như sau:
- CT1: 1 cặp trưởng thành 3 ngày tuổi, ghộp ủụi trong 3 ngày;
- CT2: 1 cặp trưởng thành gồm 1 cỏ thểủực 7 ngày tuổi và 1 cỏ thể cỏi 3 ngày tuổi, ghộp ủụi trong 3 ngày;
- CT3: 1 cặp trưởng thành gồm 1 cỏ thể cỏi 7 ngày tuổi và 1 cỏ thểủực 3 ngày tuổi, ghộp ủụi trong 3 ngày;
- CT4: 1 cặp trưởng thành 7 ngày tuổi, ghộp ủụi trong 3 ngày. Mỗi cụng thức nhắc lại 3 lần.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp………30
Sau thời gian ghộp ủụi, cỏc cỏ thểở cỏc lần nhắc lại của từng cụng thức ủược nuụi riờng rẽ và theo dừi khả năng ủẻ trứng ởủiều kiện ẩm ủộ, nhiệt ủộ phũng.
Chỉ tiờu theo dừi: Số lượng trứng ủẻ trung bỡnh/ngày, thời gian ủẻ trứng trung bỡnh, số trứng ủẻ trung bỡnh và tỷ lệ trứng nở.
Số trứng ủẻ của 1 cỏ thể cỏi (quả) Số trứng ủẻ trung bỡnh/ngày/1 cỏ thể cỏi =
(quả/ngày) Thời gian ủẻ (ngày)
Tổng thời gian ủẻ của cỏc cỏ thể (ngày) Thời gian ủẻ trứng TB của một cỏ thể cỏi =
(ngày) Số cỏ thể cỏi (ngày) Tổng số trứng nở (quả)
Tỷ lệ trứng nở (%) = x 100 Tổng số trứng ủẻ (quả)
Nghiờn cứu thời gian sống của mọt ủục hạt nhỏ Rhizopertha dominica
Fabricius khi khụng cú thức ăn:
Thử nghiệm khả năng chịu ủựng ủiều kiện khụng cú thức ăn của mọt ủục hạt nhỏ R. dominica:
Mọt sử dụng trong thớ nghiệm là mọt trưởng thành ủược chia ra làm 3 loại. Loại 1 là cỏc cỏ thể mọt mới vũ húa trưởng thành 3 ngày tuổi; loại 2 là cỏc cỏ thể mọt vũ húa trưởng thành ủược 15 ngày tuổi và loại 3 là chọn ngẫu nhiờn trong quần thể mọt hỗn hợp.
Thớ nghiệm ủược bố trớ như sau: bắt 10 cặp mọt trưởng thành ủựng trong hộp petry và ủể ở cỏc ngưỡng nhiệt ủộ khỏc nhau là 25, 30 và 350C trong ủiều kiện khụng cú thức ăn.
Theo dừi hàng ngày và ghi chộp số cỏ thể mọt chết cho ủến khi khụng cũn cỏ thể nào sống sút.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp………31
3.2.3. Nghiờn cứu khả năng gõy hại của mọt ủục hạt nhỏ Rhizopertha
dominica Fabricius
3.2.3.1. Ảnh hưởng của thủy phần sắn lỏt ủến khả năng gõy hại của mọt ủục hạt nhỏ Rhizopertha dominica Fabricius
Thớ nghiệm ủược tiến hành trờn sắn lỏt, giống sắn KM94, ủó ủược làm sạch và sấy ởủiều kiện 650C trong vũng 45 phỳt.
Thớ nghiệm gồm 3 cụng thức, ở mỗi cụng thức ủược bố trớ như sau: cho vào mỗi hộp nhựa 500 g sắn lỏt và 30 cỏ thể mọt trưởng thành ủểở ủiều kiện phũng. Sắn lỏt trong cỏc cụng thức thớ nghiệm khỏc nhau ủược bố trớ ở cỏc mức thủy phần khỏc nhau là 10%; 12% và 14%. Thớ nghiệm ủược nhắc lại 3 lần.
CT1: 500 g sắn lỏt thủy phần 10% + 30 cỏ thể mọt; CT2: 500 g sắn lỏt thủy phần 12% + 30 cỏ thể mọt; CT3: 500 g sắn lỏt thủy phần 14% + 30 cỏ thể mọt.
Hỡnh 3.1: Thớ nghiệm ảnh hưởng của thủy phần sắn lỏt ủến khả năng gõy hại của mọt ủục hạt nhỏRhizopertha dominica Fabricius
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp………32
Thời ủiểm kiểm tra thớ nghiệm ủược ấn ủịnh là 30, 60 và 90 ngày. Tại mỗi thời ủiểm kiều tra: ủếm số lượng mọt sống tại mỗi cụng thức thớ nghiệm, kiểm tra thủy phần và cõn khối lượng. So sỏnh diễn biến quần thể mọt ủối với cỏc mức thủy phần khỏc nhau. Tớnh tỷ lệ hao hụt phần trăm trọng lượng ở mỗi cụng thức.
Tớnh tỷ lệ hao hụt phần trăm theo Kenton L. Hernis: % Hao hụt trọng lượng x100
OWCW CW OW −
= Trong ủú: OW: khối lượng chất khụ của mẫu ban ủầu
CW: khối lượng chất khụ của mẫu thớ nghiệm cuối cựng.
3.2.3.2 Khả năng gõy hại của mọt ủục hạt nhỏ Rhizopertha dominica
Fabricius trờn cỏc loại nụng sản khỏc nhau.
Thớ nghiệm ủược tiến hành trờn cỏc loại nụng sản là thúc tẻ, gạo, ngụ hạt, sắn lỏt và ủậu xanh (ủó ủược làm sạch và sấy ở nhiệt ủộ 650C trong vũng 45 phỳt).
Dựng cỏc hộp nhựa, trong mỗi hộp chứa một loại thức ăn là thúc tẻ, gạo, ngụ hạt, sắn lỏt và ủậu xanh với trọng lượng là 300g. Cho vào mỗi hộp 20 cỏ thể mọt R. dominica trưởng thành. Thớ nghiệm trong ủiều kiện nhiệt ủộ phũng, mỗi cụng thức ủược nhắc lại 3 lần. CT1: 300 g gạo + 20 cỏ thể mọt; CT2: 300 g ngụ hạt + 20 cỏ thể mọt; CT3: 300 g thúc tẻ + 20 cỏ thể mọt; CT4: 300 g sắn lỏt + 20 cỏ thể mọt; CT5: 300 g ủậu xanh + 20 cỏ thể mọt.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp………33
Hỡnh 3.2: Thớ nghiệm khả năng gõy hại của mọt ủục hạt nhỏRhizopertha
dominica Fabricius trờn cỏc loại nụng sản khỏc nhau
Sau 30 ngày, 60 ngày và 90 ngày tiến hành kiểm tra, ủếm số lượng mọt sống, cõn lại trọng lượng thức ăn. Tớnh mức ủộ hao hụt phần trăm trọng lượng ở mỗi cụng thức theo Kenton L. Hernis. So sỏnh khả năng gõy hại của mọt trờn cỏc loại thức ăn.
3.2.3.3. Khả năng gõy hại của mọt ủục hạt nhỏ Rhizopertha dominica
Fabricius ủến cỏc giống sắn khỏc nhau.
Thớ nghiệm sử dụng cỏc giống sắn ủang ủược trồng nhiều trong sản xuất: giống KM60, KM94, KM95, xanh Vĩnh Phỳc và giống ủịa phương (sắn dự). Cỏc giống sắn làm thớ nghiệm ủó ủược làm sạch, sấy ở ủiều kiện 650C trong vũng 45 phỳt, và bố trớ ở mức thủy phần như nhau là 14%. Mỗi cụng thức thớ nghiệm là một giống sắn: 500g sắn và 30 cỏ thể mọt ủục hạt trưởng thành ủược ủựng trong hộp nhựa ủể ở ủiều kiện phũng. Cỏc cụng thức nhắc lại 3 lần ủược bố trớ cụ thể như sau: CT1: 500g sắn lỏt giống KM60 + 30 cỏ thể mọt; CT2 : 500g sắn lỏt giống KM94 + 30 cỏ thể; CT3 : 500g sắn lỏt giống KM95 + 30 cỏ thể; CT4 : 500g sắn lỏt giống xanh Vĩnh Phỳc + 30 cỏ thể; CT5: 500g sắn lỏt giống ủịa phương + 30 cỏ thể.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp………34
Hỡnh 3.3: Thớ nghiệm khả năng gõy hại của mọt ủục hạt nhỏRhizopertha dominica Fabricius ủến cỏc giống sắn khỏc nhau
Thời ủiểm kiểm tra thớ nghiệm ủược ấn ủịnh là 30, 60 và 90 ngày. Tại mỗi thời ủiểm kiều tra: ủếm số lượng mọt sống tại mỗi cụng thức thớ nghiệm, kiểm tra thủy phần và cõn khối lượng. So sỏnh diễn biến quần thể mọt ở cỏc cụng thức. Tớnh tỷ lệ hao hụt phần trăm trọng lượng ở mỗi cụng thức theo Kenton L. Hernis.
3.2.4. Phũng trừ mọt ủục hạt nhỏRhizopertha dominica Fabricius
3.2.4.1. Thử nghiệm phũng trừ mọt ủục hạt nhỏ Rhizopertha dominica
Fabricius bằng lỏ cõy
Thớ nghiệm ủược tiến hành trờn sắn lỏt ủó ủược làm sạch và khử trựng. Dựng 3 loại lỏ cõy là lỏ xoan ta (Melia azedarach), lỏ xoan Ấn ðộ (Azadirachta indica) lỏ cơi (Pterocarya tonkinensis) ở cỏc tỷ lệ khỏc nhau ủể phũng trừ mọt ủục hạt nhỏ (lỏ cõy dựng trong thớ nghiệm ủược làm khụ dưới ỏnh sỏng tỏn xạ).
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp………35
Cỏc cụng thức thớ nghiệm ủược bố trớ như sau:
Cụng thức TN
Loại lỏ cõy Tỷ lệ
(%)
Số cỏ thể mọt
ủưa vào (con)
Khối lượng sắn (g) CT1 Lỏ xoan Ấn ðộ 1 30 500 CT2 Lỏ xoan Ấn ðộ 2 30 500 CT3 Lỏ xoan ta 1 30 500 CT4 Lỏ xoan ta 2 30 500 CT5 Lỏ cơi 1 30 500 CT6 Lỏ cơi 2 30 500 CT7(ðC) Khụng dựng lỏ 30 500
Tỷ lệ % của lỏ ủưa vào thớ nghiệm là tỷ lệ về khối lượng, với tỷ lệ 1% cú nghĩa là sử dụng 5 g lỏ trộn với 500 g sắn lỏt khụ.
Thớ nghiệm ủược bố trớ với 7 cụng thức như trờn, 3 lần nhắc lại.
Hỡnh 3.4: Thớ nghiệm sử dụng lỏ cõy trong phũng trừ mọt
ủục hạt nhỏRhizopertha dominica Fabr.
Kiểm tra, ủếm số lượng mọt sống sau 15, 30, 45, 60, 75 và 90 ngày và tớnh hiệu lực theo cụng thức ABBOTT. 100 ) ( (%) x Ca Ta Ca H = − Trong ủú: H(%): là hiệu quả của thuốc;