L ỜI CẢM ƠN
2.3. Một số loại thuốc điều trị bệnh cầu trùng đang được ứng dụng trong và
ngoài nước
Toltrazuril
Thuốc ở dạng dung dịch tan trong nước, gây tổn hại đến toàn bộ các giai đoạn phát triển nội bào của cầu trùng. Toltrazuril tác động đến thể liệt sinh, đến các tiểu giao tử (giao tửđực) và đại giao tử (giao tử cái) nhưng không tác động đến mô tế bào của động vật máu nóng. Toltrazuril cản trở việc phân chia nhân và hoạt động của ty lạp thể, tức cản trở quá trình hô hấp của cầu trùng. Đối với đại giao tử Toltrazuril làm tổn hại việc hình thành vỏ tế bào. Trong qua trình phát triển nội bào Toltrazuril tạo nhiều không bào bất lợi do làm căng phồng lưới mô nội chất của cầu trùng.
Thuốc có tác dụng ức chế sự sinh sản và phát triển của thể bào tử
(sporozoites). Toltrazuril có tác dụng phổ rộng chống lại các chủng Eimeria spp và
Isospora spp gây bệnh cầu trùng ở gia súc.
Đặc biệt hiệu quả với chủng Isospora suis gây bệnh trên heo con. Công thức hóa học:
Quino-coc
Thuốc có thành phần chính là: Sulfaquinoxalin và Pyrimethamine. Sulfaquinoxalin là nhóm thu
khuẩn do cạnh tranh với para cho sự phát triển của m Sulfamid cản trở sự tổng h ribosom. Vi khuẩn không ch sẽ tiêu diệt vi khuẩn. Tất c Do PAPA cũng rất cần cho t do vi khuẩn mẫn cảm với thu dihydropteroic từ PAPA và 2 của adenosinetriphosphat và Mg Pyrimethamine nó chuyển đổi dihydrofolat th
sulfaquinoxalin và pirymethamine gây ra s acid folic, chất không thể
Công thức hóa học: Sulfaquinoxalin:
Pyrimethamine:
18
n chính là: Sulfaquinoxalin và Pyrimethamine.
Sulfaquinoxalin là nhóm thuốc sulfamid ức chế sự sinh sản phát tri i para-aminobenzoic acid, một yếu tố sinh trư a mọi tế bào, trong đó có cả tế bào vật chủ
ng hợp acid dihydrofolic cần thiết cho sự tổng h n không chết, sau đó nhờ hệ thống miễn dịch tế bào
t cả các vi khuẩn cần PAPA đều rất mẫm cảm v n cho tế bào vật chủ nên chỉ sử dụng thuốc khi b
i thuốc gây ra. Thuốc ức chế men gây cản trở PAPA và 2-amino-4-hydroxy-methyldihydropteridin và s a adenosinetriphosphat và Mg2+.
Pyrimethamine nó ức chế cạnh tranh dihydrofolat reductase, enzyme giúp s i dihydrofolat thành tetrahydrofolat. Việc sử dụng
sulfaquinoxalin và pirymethamine gây ra sựức chế nối tiếp trong quá trình t ể thiếu trong sự tổng hợp acid nucleic cho cầ
n phát triển của vi sinh trưởng cần thiết ủ và vi khuẩn. ng hợp protein ở bào đại thực bào m với sulfamid. c khi bị nhiễm trùng ở việc tổng hợp methyldihydropteridin và sự có mặt nh tranh dihydrofolat reductase, enzyme giúp sự
ng đòng thời p trong quá trình tổng hợp
19
CHƯƠNG 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 3.1. Thời gian và địa điểm
3.1.1. Thời gian: từ tháng 12/2013 đến tháng 4/2014.
3.1.2. Địa điểm
Mẫu phân được lấy ở các trại chăn nuôi trong địa bàn xã Thành Thới B, huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre và được xét nghiệm tại Phòng Ký Sinh Trùng, Bộ Môn Thú y, Khoa Nông nghiệp và Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ.
3.2. Tổng quan về địa điểm điều tra 3.2.1. Sơ lược về huyện Mỏ Cày Nam 3.2.1. Sơ lược về huyện Mỏ Cày Nam
Vị trí địa lý
Vềđịa giới hành chính, Mỏ Cày Nam có: Phía Đông giáp huyện Giồng Trôm; Tây giáp tỉnh Trà Vinh;
Bắc - Đông Bắc giáp huyện Mỏ Cày Bắc và huyện Giồng Trôm; Nam - Tây Nam giáp huyện Thạnh Phú và tỉnh Trà Vinh.
Dân cư
Mỏ Cày Nam có diện tích tự nhiên là 21.988,95 ha, đất nông nghiệp là 17.371,30 ha. Dân số 169.668 người, mật độ dân số 757 người/km2. Số người trong độ tuổi lao động 102.548 người; lao động nông nghiệp 86.505 người, chiếm 84,4% số lao động.
Địa hình
Được hình thành từ nguồn phù sa của hai con sông lớn Hàm Luông và Cổ Chiên bồi đắp qua nhiều thế kỷ, Mỏ Cày Nam có địa hình tương đối bằng phẳng, gồm những cánh đồng lúa, những ruộng mía và vườn cây ăn trái thỉnh thoảng xen kẽ một số cồn cát. Ngoài hai con sông lớn cặp hai bên bờ cù lao, Mỏ Cày còn có nhiều sông nhỏ và vừa và những con rạch chia cắt dọc ngang, rất thuận lợi về mặt giao thông thủy nhưng hạn chế vềđường bộ.
Khí hậu
Mỏ Cày Nam nằm trong miền khí hậu nhiệt đới gió mùa cận xích đạo, nhưng lại nằm ngoài ảnh hưởng của gió mùa cực đới, nên nhiệt độ cao, ít biến đổi trong năm.
Mùa gió đông bắc là thời kỳ khô hạn, mùa gió tây nam là thời kỳ mưa ẩm. Lượng mưa trung bình hằng năm từ 1.250 mm-1.500 mm, tập trung từ tháng 5 đến tháng 11. Số giờ nắng trung bình 2.407 giờ/ năm (trung bình 8 giờ/ngày). Tuy nhiên, ngoài thuận lợi trên, Bến Tre cũng gặp những khó khăn do thời tiết nóng ẩm nên thường có nạn sâu bệnh, dịch bệnh, và nấm mốc phát sinh, phát triển quanh năm.
Hành chính Mỏ Cày Nam gồm 17 Thị trấn: Thị trấn Mỏ Các xã: An Định, An Thanh, An Th Cẩm Sơn, Đa Phước Hội, Đ Thành Thới A, Thành Th Tình hình chăn nuôi
Ngành chăn nuôi trong toàn huy phát triển qua các năm. Tuy nhiên, t kinh tế-xã hội còn thấp, chư
thác là phát triển heo nạc hóa, bò Zebu, gà th heo với tổng đàn trên 220.000 con.
Chăn nuôi heo tại Mỏ lẻ (70%), chăn nuôi theo h khu vực các xã Thành Th đàn, chất lượng của tỉnh Bế Tình hình chăn nuôi, thú y B Hình 6: Bản đồ huy (Nguồn: http://ipabentre.gov.vn/vi/news/Huyen
Trại A, trại B nuôi công nghi huyện Mỏ Cày, Tỉnh Bến Tre.
20 ồm 17 đơn vị hành chính: ị ấn Mỏ Cày
ịnh, An Thanh, An Thới, Bình Khánh Đông, Bình Khánh Tây, ớ ội, Đinh Thủy, Hương Mỹ, Minh Đức, Phước Hi
ành Thới B, Tân Trung.
ăn nuôi
ăn nuôi trong toàn huyện đã đạt được những kết qu ăm. Tuy nhiên, tỷ trọng đóng góp của ngành chă
p, chưa tương xứng với lĩnh vực trồng trọt. Thế
c hóa, bò Zebu, gà thả vườn. Toàn huyện có 13.612 h àn trên 220.000 con.
ại Mỏ Cày Nam chủ yếu theo phương thức nuôi gia n nuôi theo hướng trang trại qui mô tập trung (30%) phát tri
ã Thành Thới A, Thành Thới B, Cẩm Sơn,... luôn dẫn đầ ủ ỉnh Bến Tre.
ăn nuôi, thú y tại các địa điểm khảo sát tại xã Thành Th
huyện Mỏ Cày Nam và vị trí địa lý của xã Thành Th
http://ipabentre.gov.vn/vi/news/Huyen-Mo-Cay-Nam )
ại B nuôi công nghiệp và các trại gia đình tại xã Thành Th ỉ ến Tre. ình Khánh Tây, ớc Hiệp, Tân Hội, t quả nhất định và a ngành chăn nuôi vào nền ế mạnh cần khai n có 13.612 hộ nuôi ức nuôi gia đình nhỏ p trung (30%) phát triển mạnh ở ẫn đầu về về tổng xã Thành Thới a xã Thành Thới B ) ã Thành Thới B,
21
Trại A:
• Tổng đàn là 580 con, gồm: 80 heo con theo mẹ, 90 heo cai sữa, 330 heo thịt, 80 heo nái.
• Xây dựng theo kiểu chuồng hở, mái tole, có phòng sát trùng, có hệ thống làm mát. Heo nuôi trên nền sàn, nền xi măng, ô chuồng, chuồng ép. Thông tin của heo ở mỗi ô chuồng được theo dõi qua sổ lưu thông tin.
Trại B:
• Tổng đàn 568 con, gồm: 100 heo con theo mẹ, 100 heo cai sữa, 200 heo thịt, 160 heo nái.
• Xây dựng theo kiểu chuồng hở, mái tole, có phòng sát trùng, hệ thống làm mát. Heo nuôi nền xi măng, đệm lót sinh học.
Trại gia đình:
• Nằm xa trục lộ chính, hộ nuôi nhỏ lẻ trung bình 20 heo/hộ.
• Chuồng nuôi xây dựng tận dụng diên tích xung quanh nhà, nuôi trên nền xi măng, mái lá hoặc mái tole.
• Tình hình thú y:
Bảng 1. Quy trình tiêm phòng cho heo ở xã Thành Thới B, huyên Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre
Trang trại
Heo con theo mẹ
Circovirus, uống thuốc trị cầu trùng (3 ngày tuổi); Mycoplasma (7-10 ngày tuổi); dịch tả, thương hàn, tụ huyết trùng (21- 30 ngày tuổi)
Heo cai sữa FMD, PRRS
Heo thịt
Heo nái Parvovirus, Dịch tả, PED, PRRS (mang thai lúc 85 – 90 ngày tuổi)
Trại gia đình
Heo con theo mẹ Mycoplasma (7-10 ngày tuổi); dịch tả (21-30 ngày tuổi) Heo cai sữa
Heo thịt Thương hàn, tụ huyết trùng
Heo nái Dịch tả (trước khi phối giống); E. Coli (mang thai lúc 90 ngày tuổi)
22
Hình 7. Heo nuôi ở trại gia đình
23
3.3. Nội dung khảo sát
- Xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm cầu trùng trên heo tại xã Thành Thới B, huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre.
- Xác định tỷ lệ nhiễm, cường độ nhiễm cầu trùng heo theo phương thức chăn nuôi, lứa tuổi và theo loại nền chuồng.
- Xác định các loài cầu trùng ký sinh trên heo.
3.4. Các chỉ tiêu theo dõi
- Hình dạng, kích thước noãn nang cầu trùng heo: ghi nhận lại hình dạng, đo kích thước của noãn nang qua kính hiển vi bằng thước trắc vi thị kính. Lấy trị số trung bình.
- Xác định thời gian sinh bào tử của noãn nang cầu trùng trong môi trường nuôi cấy.
- Tính tỷ lệ nhiễm, tính cường độ nhiễm chung, nhiễm theo phương thức chăn nuôi, lứa tuổi và loại nền chuồng.
3.5. Phương tiện thí nghiệm 3.5.1. Đối tượng khảo sát 3.5.1. Đối tượng khảo sát
Phân heo được lấy mẫu ngẫu nhiên tại xã Thành Thới B, huyện Mỏ Cày, tỉnh Bến Tre, phân heo được chia và kiểm tra theo lứa tuổi:
- Heo con theo mẹ (7-28 ngày) - Heo con cai sữa (29-56 ngày) - Heo thịt (57-112 ngày)
- Heo nái sinh sản: nái mang thai Giống heo
- Heo nái: Landrace, Yorkshire x Landrace, Landrace x Duroc. - Heo thịt: Landrace x Duroc, Yorkshire x Landrace.
Có 2 kiểu chuồng nuôi: - Nuôi trên sàn - Nuôi trên nền xi măng Phương thức chăn nuôi: - Nuôi trang trại - Nuôi trại gia đình
Heo được lấy mẫu một lần theo phương thức điều tra cắt ngang.
Ước lượng mẫu điều tra
Dựa vào công thức tính số mẫu khảo sát là N = (1,96)2.q.p/d2, với: + p là tỷ lệ thăm dò.
+ q = 1 – p.
+ d là độ chính xác mong muốn (0,05) giữa tỷ lệđạt được và tỷ lệ thăm dò. (Dựa theo Canon và Poe, 1982 và dẫn liệu của Thrusfield, 1995).
24
Qua khảo sát tham dò trên 87 mẫu phân ở 4 lứa tuổi trên tại xã Thành Thới B, huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre, cho thấy tỷ lệ nhiễm noãn nang cầu trùng là 29,07%. Số mẫu phân kiểm tra ởđộ tin cậy 95% là 317 mẫu. Như vậy số lượng mẫu khảo sát ở các địa điểm trên địa bàn xã Thành Thới B, nhiều hơn số mẫu ước lượng, được thể hiện qua bảng 1. Bảng 2: Phân bố lấy mẫu tại địa bàn xã Thành Thới B Địa điểm Số mẫu khảo sát toàn xã Lứa tuổi Heo con
theo mẹ Heo cai sữa Heo thịt Nái sinh sản
Trại A 176 26 50 50 50
Trại B 79 4 25 25 25
Trại gia đình 159 29 58 49 23
Tổng 414 59 133 124 98
3.5.2. Cách lấy mẫu
- Mẫu phân được kiểm tra phải mới, lấy ở từng cụm dọc theo dãy chuồng, lấy bao quát khắp chuồng, đảm bảo tính ngẫu nhiên.
- Thu thập mẫu cho vào túi nylon cột lại và ghi lại thông tin của từng mẫu (địa điểm, lứa tuổi, ngày lấy mẫu, tình trạng phân, phương thức chăn nuôi). - Mẫu vừa lấy xong phải được bảo quản trong thùng có đá khô, dán kín và
mang về phòng thí nghiệm để tiến hành kiểm tra.
Mẫu phân được bảo quản lạnh ở nhiệt độ 5-100C và tiến hành kiểm tra trong vòng 2-3 ngày.
3.5.3. Vật liệu thí nghiệm
Mẫu: Phân heo lấy tại xã Thành Thới B, huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre.
Dụng cụ:
Kính hiển vi, thước trắc vi thị kính, phiến kính (lame) và lá kính (lamelle), đĩa petri, ống nhỏ giọt, lọ penicillin, đũa thủy tinh, kẹp, bi sắt, buồng đếm Mc Master, cốc 50ml, 200ml, ống đong 50ml, rây lược 81 lỗ/cm2, ống nghiệm có nắp, máy ly tâm
Hóa chất:
Dung dịch NaCl bão hòa (gồm: NaCl tinh thể 450g; nước cất 1000ml) Dung dịch Kali Bicromate 2,5%
25
Hình 9. Một số dụng cụ sử dụng trong thí nghiệm 3.6. Phương pháp thí nghiệm
3.6.1. Phương pháp phù nổi (Willis)
Nguyên lý: Dựa trên sự chênh lệch về tỷ trọng. Dùng dung dịch NaCl bão hòa có tỷ trọng lớn hơn tỷ trọng của noãn nang cầu trùng làm noãn nang nổi lên trên bề mặt của dung dịch.
Mục đích: Xác định sự hiện diện của noãn nang cầu trùng trong phân. Tính tỷ lệ nhiễm:
Tỷ lệ nhiễm (%) = Số mẫu nhiễm
Số mẫu kiểm tra× 100
Cách tiến hành:
- Lấy khoảng 3g phân cho vào lọ penicillin sạch. - Cho dung dịch phù nổi NaCl bão hòa vào đến 1/2 lọ.
- Dùng đũa hòa tan phân trong lọ (mỗi mẫu dùng một đũa khuấy riêng để tránh noãn nang từ mẫu này lẩn sang mẫu khác).
- Cho dung dịch phù nổi vào tiếp đến gần đầy lọ và gắp bỏ hết phân còn lại nổi trên bề mặt dung dịch.
- Cho tiếp dung dịch đến đầy lọ (tránh cho tràn dung dịch ra ngoài).
- Đậy lá kính lên trên miệng lọ (đảm bảo không có bọt khí) và để yên khoảng 25-30 phút.
- Giở thẳng lá kính lên, đặt trên phiến kính (đảm bảo không có bọt khí) rồi quan sát dưới kính hiển vi ở vật kính X10 để tìm noãn nang cầu trùng.
26
Hình 10: Thực hiện tiêu bản phù nổi 3.6.2. Phương pháp Mc Master
Mục đích: xác định cường độ nhiễm cầu trùng, bằng cách đếm số lượng noãn nang trong 1 gram phân bằng buồng đếm Mc Master, đánh giá hiệu quả sử dụng thuốc để tẩy trừ.
Cách tiến hành:
- Cho 42ml dung dịch NaCl bão hòa vào ống đong thủy tinh - Cho mẫu phân vào đến vạch 45ml (tương đương 3gram phân)
- Sau đó cho 20 viên bi sắt vào lắc cho phân được tán đều trong dung dịch - Dùng pipet hút dung dịch cho vào 2 buồng đếm Mc Master, để yên 5-10
phút rồi đếm số noãn nang quan sát được trong 2 buồng đếm.
- Đặt buồng đếm lên kính hiển vi xem ở vật kính X10, và đếm số lượng noãn nang cầu trùng có trong 2 buồng đếm.
Tính giá trị trung bình
Gọi N là số noãn nang trung bình:
N =Số noãn nang trên buồng đếm 1 + số noãn nang trên buồng đếm 2 2
Cách tính:
Thể tích mỗi buồng đếm là 0,15ml
0,15ml của 3 gram phân trong dung dịch 45ml - Số noãn nang trong tổng số 45ml = ∗
,"
- Vậy số noãn nang có trong 1 gram phân X = ∗
," ∗#=N*100
- Cường độ nhiễm: Sau khi tính số noãn nang có trong 1 gram phân, chúng tôi chia thành các mức độ nhiễm sau:
Nhiễm cường độ 1 (+): >50-5000 noãn nang/1 gram phân Nhiễm cường độ 2 (++): >5000-10000 noãn nang/1 gram phân Nhiễm cường độ 3 (+++): >10000 noãn nang/1gram phân
27
Hình 11: Phương pháp Mc Master kiểm tra cường độ nhiễm ở X10 3.6.3. Phương pháp nuôi cấy noãn nang
Mục đích: Theo sự phát triển của noãn nang cầu trùng trong môi trường Bichromate Kali 2,5%, xác định thời gian sinh bào tử của noãn nang để bổ sung cho nghiên cứu định danh loài cầu trùng ký sinh trên heo.
Cách tiến hành:
- Mẫu phân sau khi kiểm tra và xác nhận cường độ nhiễm cao, mẫu phân này được sử dụng thực hiện nuôi cấy.
- Lấy 3 gram phân cho vào 50ml nước cất, dùng que khuấy đều. - Lược qua rây 81 ô/cm2, bỏ cặn.
- Dung dịch sau lọc cho vào cốc 500ml, thêm nước đến vạch 500ml, để yên 5- 10 phút (cho noãn nang lắng xuống đáy).
- Bỏ phần nước trong, phần cặn cho vào ống nghiệm đem ly tâm với tốc độ 3000 vòng/phút, trong 5 phút.
- Lấy ra đổ bỏ phần nước trong chỉ giữ lại phần cặn trong ống nghiệm, ở trong cặn này mật độ noãn nang rất cao.
- Cho vào đĩa Petri phần cặn của ống nghiệm và dung dịch Bichromate Kali 2,5% theo tỉ lệ 1:1 (một phần dung dịch chứa noãn nang, một phần dung dịch Bichromate Kali 2,5%) để yên ở nhiệt độ phòng.
- Sau 12 giờ nuôi cấy, cứ 2 giờ kiểm tra và quan sát dưới kính hiển vi 1 lần ghi nhận thời gian sinh bào tử.
Mỗi ngày kiểm tra sự phát triển và hình thành bào tử của noãn nang cầu trùng, theo dõi thời gian hình thành bào tử của noãn nang. Thời gian sinh bào tử của