CHƢƠNG 2 PHẦN THỰC NGHIỆM
2.4.1.Cặn dịch chiết n-hexan của thân (KhH)
Lấy 30,2 g cặn chiết hexan đem tách trên cột silica gel, rửa giải cột bằng hệ dung mơi etylaxetat-hexan theo tỷ lệ tăng dần từ 0-100%. Dịch rửa giải thốt ra từ cột được thu ở những khoảng cách nhỏ (5-10 ml/ phân đoạn). Kiểm tra cặn thu được bằng sắc ký lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin-H2SO4 5%, sau đĩ các phân đoạn giống nhau được dồn lại rồi đem cất loại dung mơi.
2.4.1.1. - Sitosterol (KhH)
Rửa giải cột bằng hệ dung mơi n-hexan - etyl axetat (20:1), thu được khối chất rắn vơ định hính, tách lặp lại trên cột silicagel và kết tinh lại trong n-hexan đã thu được tinh thể hính kim khơng màu (51 mg), điểm chảy 136- 137 0C.
IR (νmax , cm-1): 3431,5 (dao động hĩa trị OH), 2931,3 (dao động hĩa trị CH); 1647,2 (C=C); ESI-MS (m/z): 414[M]+. 1 H-NMR (500MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 3,51 (1H, m, H-3); 5,31 (1H, dd, J=5 và 2 Hz, H-6); 1,01 (3H, s, H-18); 0,92 (3H, d, J = 6,6Hz, H-21); 0,85 (3H, d, J = 7,1Hz, H-26); 0,84 (3H, d, J = 6,6Hz, H-29); 0,81 (3H, d, J = 6,6Hz, H-28); 0,68 (3H, s, H-19). 13C-NMR (125MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 37,3 (C-1); 31,7 (C-2); 71,8 (C-3); 42,3 (C-4); 140,8 (C-5); 121,7 (C-6); 31,9 (C-7); 31,9 (C-8); 50,2 (C-9); 36,5 (C-10); 21,1 (C-11); 39,8 (C-12); 42,3 (C- 13); 56,8 (C-14); 24,3 (C-15); 28,3 (C-16); 56,1 (C-17); 11,9 (C-18); 19,4 (C-
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
25); 19,1 (C-26); 19,4 (C-27); 23,1 (C-28); 11,9 (C-29).
2.4.1.2. Axit kadsuric 24 (Z)-3,4-seco-lanosta-4(28),9(11),24-triene-3,26-dioic axit (KhH.1) 3,26-dioic axit (KhH.1)
Thay đổi hệ dung mơi rửa giải cột bằng hệ n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ (15:1) thu được khối chất vơ định hính. Đem kết tinh lại trong dung mơi chloroform thu được chất kết tinh dạng hính kim nhỏ, cĩ khối lượng 0,820g, nĩng chảy ở 156-158o
C, RfB=75.
Phổ IR νmax (cm-1): 2969, 1700, 1632, 1461, 1258, 943.
LC-ESI/MS (m/z): 471,0 [M+H]+, ứng với cơng thức phân tử C30H46O4.
1H-NMR (500MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 6,09 (1H, dd, J=7,5Hz, H- H-NMR (500MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 6,09 (1H, dd, J=7,5Hz, H- 24); 5,34 (1H, dd, J=5,5Hz, H-11); 4,88 (1H, m, H-29a); 4,69 (1H, m, H- 29b); 2,43 (1H, m, H-2a); 2,58 (1H, m, H-2b); 2,14 (1H, m, H-8); 2,05 (1H, m, H-5); 1,64 (1H, m, H-17); 1,43 (1H, m, H-20); 1,90 (3H, s, H-27); 1,76 (3H, s, H-30); 1,07 (3H, s, H-19); 0,95 (3H, d, H-21); 0,75 (3H, s, H-28); 0,66 (3H, s, H-18). 13 C-NMR (125MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 32,0 (C-1); 26,7 (C-2); 181,1 (C-3); 147,5 (C-4); 49,5 (C-5); 27,8 (C-6); 28,9 (C-7); 42,5 (C-8); 142,4 (C- 9); 42,5 (C-10); 118,6 (C-11); 37,6 (C-12); 43,9 (C-13); 47,2 (C-14); 33,7 (C- 15); 27,8 (C-16); 50,7 (C-17); 14,6 (C-18); 26,8 (C-19); 36,0 (C-20); 18,2 (C- 21); 35,7 (C-22); 26,7 (C-23); 147,3 (C-24); 125,8 (C-25); 173,7 (C-26); 20,4 (C-27); 18,1 (C-28); 113,7 (C-29); 23,2 (C-30). 2.4.1.3. Hợp chất Heteroclitalignan D (KhH.2).
Tiếp tục rửa giải cột bằng hệ dung mơi n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ (15:1) thu được khối chất rắn vơ định hính. Khối chất rắn này lại tinh chế trên cột silica gel cỡ hạt 0,040 – 0,063mm, hệ dung mơi rửa giải n-hexan – etyl axetat tỷ lệ 10 :1 thu được hỗn hợp hai chất cĩ RfB = 75 và RfB = 62. Thực
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
hiện lại trên cột hệ dung mơi rửa giải n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ 5 :1 thu được chất kết tinh hình kim KhH.2 cĩ khối lượng 18,8mg, RfB = 62, nĩng chảy ở 175-176o
C.
Phổ IR νmax (cm-1): 3568, 2961, 1722, 1620, 1465, 1380, 1331, 1237, 1106, 974.
Phổ khối LC-ESI/MS (m/z): 534 [M-CH3COOH]+ và 412 [M- CH3COOH-C7H5COOH], ứng với cơng thức phân tử C32H34O11.
1H-NMR (500MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 7,51 (1H, m, H-4’); 7,47 H-NMR (500MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 7,51 (1H, m, H-4’); 7,47 (2H, m, H-6’); 7,32 (2H, m, H-5’); 6,84 (1H, s, H-4); 6,52 (1H, s, H-11); 5,88 (1H, s, H-6); 5,78 (1H, d, J=1,5Hz, H-19’); 5,75 (1H, s, H-9); 5,63 (1H, d, J=1,5Hz, H-19’); 3,95 (3H s, 3-OCH3); 3,87 (3H, s, 2-OCH3); 3,62 (3H, s, 1- OCH3); 3,32 (3H, s, 14-OCH3); 2,30 (1H, d, J=7,0Hz, H-8); 1,60 (3H, s, H- 19); 1,39 (3H, s, H-18); 1,31 (3H, d, J=7,0Hz, H-17). 13 C-NMR (125MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 168,84 (s, C-21); 164,70 (s, C-20); 151,92 (s, C-3); 151,35 (s, C-1); 148,77 (s, C-12), 141,16 (s, C-2); 140,52 (S, C-14), 135,50 (s, C-13); 132,93 (s, C-4’); 132,63 (s, C-10); 129,69 (s, C-5), 129,44 (d, C-2’,6’); 129,33 (s, C-1’); 127,87 (d, C-3’,5’), 121,87 (s, C-16); 110,26 (d, C-4); 101,67 (d, C-11), 100,82 (t, C-19’), 85,19 (d, C-6); 83,40 (d, C-9); 74,01 (s, C-7); 60,47 (q, 1-OCH3); 60,47 (q, 2-OCH3); 58,68 (q, 14-OCH3); 56,01 (q, 3-OCH3); 43,22 (d, C-8); 28,80 (q, C-18); 20,47 (q, C-19); 17,05 (q, C-17). 2.4.1.4.(Kí hiệu phổ: KhH.3)(KhH24)
Thay đổi hệ rửa giải cột bằng hệ dung mơi n-hexan: etyl axetat theo tỷ lệ 5:1 thu được chất vơ định hính, kết tinh lại trong dung mơi n-hexan: Etyl axetat (2:1) thu được chất rắn tinh thể hính kim khơng màu, khối lượng 5mg, nĩng chảy ở nhiệt độ 183 – 184 0
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hợp chất T.Ka.H6 cũng thu được từ dịch chiết n-hexan của cây Na leo sau khi chạy qua cột Silica gel với hệ dung mơi n-hexan: etyl axetat= 2:1 và kết tinh lại trong chloroform thu được chất rắn khơng màu (3,9 mg). Do lượng mẫu ìt nên khơng đủ để ghi phổ.