CHƢƠNG 2 PHẦN THỰC NGHIỆM
3.2.4.2.2.Kadsuraligna nB (KhE.5)
Chất này thu được từ hệ dung mơi rửa giải cột clorform-metanol theo tỷ lệ (7:1) kết tinh lại trong dung mơi chloroform thu được chất kết tinh hình kim cĩ khối lượng 18,8mg, RfB = 62, nĩng chảy ở 175-176oC (KhE.5).
Phổ FI-IR cho biết cĩ hấp thụ của nhĩm OH ở vùng 3568cm-1
, nhĩm CH ở 2961cm-1, hấp thụ ở vùng và 1465cm-1
và 1620cm-1 đặc trưng cho liên kết C=C. Hấp thụ ở vùng 1722cm-1
đặc trưng cho liên kết C=O. Trong các phổ 1
H-NMR và 13C-NMR kết hợp với phổ DEPT đã cho biết trong phân tử của chất KhE.5 cĩ 27 nguyên tử cacbon trong đĩ cĩ 08 nhĩm CH3, 01 nhĩm metylen (CH2), 05 nhĩm metilen (CH) và 13 nguyên tử cacbon bậc 4.
Phổ khối lượng LC-ESI-MS cho [M-CH3COOH]+ 534 amu và [M- CH3COOH-C7H5COOH]+ 412. Các dữ liệu phổ 13C-NMR và LC-ESI-MS [13] cho phép xác định cơng thức phân tử chất này là C27H32O11.
Cũng tương tự như KhH.2, phổ 1H-NMR và 13C-NMR của KhE.5 cho thấy ở vùng trường thấp cĩ tín hiệu cộng hưởng của hai proton olephinic thuộc một phần nhĩm biphenyl ở H 6,74 (1H, s, H-4) và H 6,45 (1H, s, H-11) với cacbon tương ứng C 110,39ppm (C-4) và C 102,10ppm (C-11). Thêm vào đĩ là tín hiệu của các cacbon ở C 151,16; 140,63; 151,89; 110,39 và 121,8 (C-1, 2, 3, 4, 5, 16) và C 132,93; 102,10; 148,62; 135,51; 141,1 và 120,4 (C-10, 11, 12, 13, 14, 15). Trên phổ 1H-NMR cũng quan sát thấy tín hiệu của các proton thuộc nhĩm methylendioxy ở H5,95 (2H, d, J=3Hz, H-19) với cacbon tương ứng C101,06ppm. Cĩ 4 nhĩm methoxy ở H 3,91 (3H, s, 3-OCH3); 3,88 (3H, s, 14-OCH3); 3,85 (3H, s, 2- OCH3); 3,62 (3H, s, 1- OCH3) cĩ thể gắn với vịng biphenyl. Tín hiệu của nhĩm methyl ở H1,23 (3H, s, H-18) với cacbon tương ứng tại C 16,86ppm (C-18) là điểm rất đặc trưng của vịng
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
dạng singlet tại H1,30ppm (3H, s, H-17) với C 28,58ppm (C-17). Tín hiệu của nhĩm methyl dạng singlet cĩ thể được gắn với cacbon bậc 4 liên kết với nhĩm hydroxy tại C 73,80ppm.
Đặc biệt trên phổ 13
C-NMR cịn xuất hiện tín hiệu của 2 cacbon dạng liên kết C=O tại C169,31 (s, C-1’); 168,86 (s, C-1”). Trên phổ 1H-NMR cho thấy cĩ tín hiệu của proton thuộc 02 nhĩm axetyl ở H 1,58ppm (1H, s, H-2”); 1,62ppm (1H, s, H-2’) điều này cũng phù hợp với phổ 13C-NMR cho thấy cĩ tín hiệu đặc trưng của 2 cacbon thuộc nhĩm axetyl tương ứng C 20,48ppm (C- 2”); 20,17ppm (C-2’).
Kết quả phân tích phổ HSQC và HMBC của KhE.5 cho biết cũng cĩ bộ khung tương tự như KhH.2. Duy chỉ cĩ điều khác biệt trong phân tử này cĩ 2 nhĩm axetyl. Quá trình phân tích chi tiết các phổ kết hợp với các tài liệu tham khảo thu thập được cho phép khẳng định cấu trúc của KhE.5 hồn tồn phù hợp với cấu trúc của Kadsuralignan B hay 19-methylen-1,2,3,14-tetra methoxy-6,9-diacetyl-15,16-cyclolignan [13].
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bảng 3.5. Số liệu phổ NMR và các tƣơng tác xa củaKhE.5
TT C (δ ppm) CDCl3 H (δ ppm) CDCl3 H → C (HMBC) CHn (DEPT) 1 151,16 C 2 140,63 C 3 151,89 C 4 110,39 6,74 (1H, s) 2; 3; 5; 6; 16 CH 5 130,01 C 6 84,49 5,66 (1H, s) 4; 5; 7; 16 CH 7 73,80 C 8 42,72 2,08 (1H, d, J=7,5Hz) 7; 9; 17 CH 9 83,43 5,66 (1H, s) 8; 10; 11 CH 10 132,93 C 11 102,10 6,45 (1H, s) 9; 10; 12; 13 CH 12 148,62 C 13 135,51 C 14 141,1 C 15 120,4 C 16 121,8 C 17 28,58 1,30 (3H, s) 7; 8; 8 CH3 18 16,86 1,23 (3H, s) 6; 7; 8 CH3 19 101,06 5,95 (2H, d, J=3,0Hz) CH2 1’ 169,31 C 2’ 20,17 1,62 (3H, s) 1” CH3 1” 168,86 C 2” 20,48 1,58 (3H, s) 1’ CH3
Tiến hành phân lập và xác định cấu trúc các chất cho biết sự cĩ mặt của triglycerit mạch dài, nhĩm chất sterol (β-sitosterol, β-sitosterol-3-O- β-D- glucopyranosid), hợp chất tritecpen (01 chất: axit kadsuric), 03 hợp chất lignan, trong đĩ cĩ 2 hợp chất thuộc C18 dibenzocyclooctadien lignan.
Điều đáng quan tâm là trong số những hợp chất đã phân lập và nhận dạng cĩ axit dihydroguaiaretic (KhE.3). Một số nhà khoa học đã cơng bố
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
thấy hoạt tính chất này tốt hơn so với vitamin E là chất chuẩn chống oxy hĩa [19] ngồi ra chất này cũng đã được chứng minh cĩ tác dụng chống oxy hĩa và kháng viêm [27]. Cịn axit ursolic là một trong những tritecpen thuộc kiểu khung ursan đã được nghiên cứu sâu về các hoạt tính khác nhau. Như hoạt tính kháng khuẩn Staphylococus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas
aeruginosa và Bacillus subtilis [21]. Trước đây người ta chỉ ra axit ursolic cĩ
hoạt tính gây độc đối với dịng tế bào bạch huyết (leuk P388), dịng tế bào L- 1210 cũng như cĩ tác dụng gây độc đối với dịng tế bào ung thư phổi ở người
A-549 [9]. Ngồi ra axit này cịn được chứng minh là cĩ hoạt tính gây độc đối
với dịng tế bào ung thư gan (Hep-G2), tác dụng kháng viêm (invivo trên chuột), và trên một số dịng tế bào khác như tế bào bạch cầu (leuk-M1), ức chế lypoxygenasa-5, hoạt tính kháng u (invivo, trên thỏ), kháng nấm (Candida albicans) [16]. Đặc biệt là hoạt tính anti-HIV với giá trị nồng độ thấp IC50
6,5g/ml [9].
Với tác dụng về hoạt tính của các hợp chất nĩi trên, nghiên cứu ban đầu về cây Na leo cũng đã gĩp một phần làm sáng tỏ cây thuốc hay được sử dụng trong y học dân gian.
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
IV. KẾT LUẬN
1. Phân tích sàng lọc hĩa thực vật một số nhĩm chất của thân cây Na leo
(Kadsura heteroclita) ở Tam Đảo Vĩnh Phúc đã chỉ ra sự cĩ mặt của
sterol, tecpenoit, saponin và polyphenol. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2. Nghiên cứu hố thực vật thân cây Na leo ở Tam Đảo Vĩnh Phúc, đã xác định các tính chất hố lý của 9 đơn chất thuộc các nhĩm chất sterol, tritecpenoit và lignan.
3. Đo và phân tích các phổ IR, MS và NMR các chất nĩi trên đã nhận dạng được 7 chất, đĩ là -sitosterol, -sitosterol-glucosid, Triglycerit, axit kadsuric (axit 24 (Z)-3,4-seco-lanosta-4(28),9(11),24-triene-3,26-dioic), axit dihydroguaiaretic (4,4’-dihydroxy-3,3’-dimethoxy lignan), Heteroclitalignan D (19’-methylen-1,2,3,14-tetra methoxy-6-benzoyl-9- axetyl-15,16-cyclolignan) và Kadsuralignan B (19’-methylen-1,2,3,14- tetra methoxy-6,9-diacetyl-15,16-cyclolignan).
4. Từ thân cây Na leo ở Việt Nam đã phân lập được axit kadsuric là thành phần chính trong đĩ.
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn