tạo nên huyền dịch vi khuẩn, cho đĩa giấy urea vào, ủ ở 35P
o P
C trong 24 giờ. Nếu môi trường chuyển sang màu đỏ là phản ứng dương, nếu môi trường có màu vàng là phản ứng âm.
Đối với mẫu nước tiểu, phải đếm định lượng, chỉ làm tiếp khi số lượng CFU > 100.000/ml.
− Dựa vào các thử nghiệm, chọn khuẩn lạc được xác định là các chủng
Staphylococcus spp.
Làm kháng sinh đồ đối với các chủng Staphylococci phân lập và định danh được.
− Chọn khúm vi khuẩn đạt yêu cầu của các chủng Staphylococci phân lập và định danh được và làm kháng sinh đồ. Thực hiện kháng sinh đồ bằng máy miniAPI, hoặc thực hiện kháng sinh đồ theo phương pháp Kirby - Bauer (Độ đục McFarland để làm kháng sinh đồ tương đương 0,5): kháng sinh tẩm vào đĩa giấy với nồng độ quy định theo tiêu chuẩn quốc tế sẽ khuếch tán vào thạch, ức chế sự phát triển của vi khuẩn tạo thành vòng vô khuẩn.
− Đối chiếu bảng kết quả kháng sinh đồ (kháng sinh đồ bằng máy miniAPI) hoặc tiến hành đo đường kính vòng vô khuẩn xuất hiện quanh đĩa giấy kháng sinh (kháng sinh đồ theo phương pháp Kirby – Bauer) để xác định sự nhạy cảm, trung gian hay đề kháng với các loại kháng sinh đó.
− Kỹ thuật tiến hành:
Kỹ thuật làm kháng sinh đồ theo phương pháp Kirby – Bauer:
Nguyên tắc: Kháng sinh tẩm vào đĩa giấy với nồng độ thích hợp sẽ khuếch tán ra mặt thạch chung quanh, ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn. Đường kính vòng vô khuẩn bị ức chế diễn đạt tính nhạy cảm của vi khuẩn đối với thuốc kháng sinh. Trường hợp không có vòng ức chế, vi khuẩn kháng lại thuốc kháng sinh.
Chuẩn bị:
Đĩa kháng sinh: trước khi thử nghiệm kháng sinh đồ, các ống chứa đĩa kháng sinh phải được lấy ra khỏi tủ lạnh 1-2 giờ trước khi mở nắp.
Sử dụng các hộp thạch MHA có độ dày khoảng 4mm, đã được ủ và kiểm tra đảm bảo vô trùng để làm kháng sinh đồ. Để phát hiện S. aureus kháng Methicillin, sử dụng môi trường có thêm NaCl 2%.
Phương pháp:
Sử dụng nước cất vô trùng để pha loãng khuẩn lạc vi khuẩn thành huyền dịch ở độ đục tương đương 10P
8 P
CFU/ml (so sánh với độ đục chuẩn Mc Farland 0.5). Dùng tăm bông vô trùng nhúng vào huyền dịch, ép hết nước thừa trên thành ống nghiệm, trãi đều vi khuẩn trên mặt thạch, xoay hộp petri 90P
o P
rồi vạch đều một lần nữa. Sau đó, để yên khoảng 5-10 phút cho khô mặt thạch trước khi đặt đĩa kháng sinh.
Dùng pince đặt các đĩa kháng sinh lên mặt thạch, ép nhẹ mỗi đĩa để đảm bảo mặt đĩa kháng sinh tiếp xúc đều với mặt thạch. Các đĩa kháng sinh cách mép hộp thạch từ 2 – 2,5cm và cách nhau 2 - 3cm. Không dời đĩa kháng sinh sau khi đã đặt lên mặt thạch.
Ủ 37P o
P
c trong vòng 18 đến 24 giờ.
Đọc kết quả kháng sinh đồ: đo đường kính vòng vô khuẩn (mm) và dựa theo tiêu chuẩn của CLSI để xác định mức độ là nhạy cảm (S: susceptible), trung gian (I: intermediate) và kháng (R: resistant) (xem phần phụ lục).