2.5.2.1. Phát hiện hoạt tính catalase [3]
Nhỏ một giọt H2O2 3% lên bề mặt khuẩn lạc, nếu thấy hiện tượng sủi bọt khí thì chủng vi khuẩn đó được coi là có hoạt tính catalase (catalase +). Ngược lại, chủng vi khuẩn đó không có hoạt tính catalase (catalase -).
Ngoài ra có thể nhỏ trực tiếp H2O2 3% lên sinh khối tế bào của chủng nghiên cứu đã được tách từ dịch nuôi cấy bằng cách đem li tâm 5000vòng/10phút, quan sát hiện tượng như trên.
Phí Văn Tá K33B – SP Sinh 31 2.5.2.2. Phát hiện khả năng oxy hoá rượu êtylic thành acid acetic
Nuôi cấy chủng vi khuẩn tuyển chọn trên môi trường bao gồm: Cao nấm men: 10g Rượu êtylic: 10%-15% (vol/vol) Nước máy : 1000ml pH : 6,8-7.0
Blue Bromophenol (BPB) 0,04%: 20ml
Phân môi trường vào các ống nghiệm (4-5ml), khử trùng ở 1210C trong 20 phút, để nguội khoảng 30oC cấy vi khuẩn nghiên cứu mới hoạt hoá, nuôi 7 ngày trong điều kiện thích hợp. Quan sát thấy môi trường chuyển sang màu vàng là dương tính, không đổi màu là âm tính.
Pha dung dịch BPB 0,04%: cân 0,1g BPB nghiền nhỏ trong cốc sứ, sau đó bổ sung 14,9 ml NaOH 0,001N hoà tan cho đều. Đổ tất cả vào bình định mức thêm nước cho đến khi thể tích đạt 250ml [4].
2.5.2.3. Phát hiện khả năng oxy hoá acid acetic
Sử dụng môi trường sau để thử khả năng oxy hoá acid acetic của vi khuẩn tuyển chọn.
Thành phần: Cao nấm men: 10g Canxi acetat: 10g Thạch agar : 20g Nước máy : 1000ml pH : 7,0-7,2
Phân môi trường vào bình tam giác đem khử trùng ở 121oC trong 20 phút, để nguội khoảng 40-45oC đổ thạch đĩa, cấy vi khuẩn tuyển chọn mới hoạt hoá (18-24 giờ) nuôi 6-7 ngày ở điều kiện thích hợp. Quan sát hiện tượng: Nếu xung quanh khuẩn lạc có vòng phân giải canxi là phản ứng dương tính, ngược lại là âm tính.
Phí Văn Tá K33B – SP Sinh 32
Hình 2.7. Vòng phân giải CaCO3 của vi khuẩn A.xylinum BHN2
2.5.2.4. Phát hiện khả năng chuyển hoá glucose thành acid [14]
Để xác định khả năng hình thành acid của chủng vi khuẩn tuyển chọn chúng tôi cấy vi khuẩn trên môi trường thạch GCP. Nếu xung quanh chuẩn lạc tạo vòng phân giải canxi, chứng tỏ chủng tuyển chọn có khả năng hình thành acid từ glucose.
2.5.2.5. Phát hiện khả năng chuyển hoá glycerol thành dihydroxyaceton [14]
Để thử khả năng hình thành dihydroxyaceton từ glycerol. Chúng tôi tiến hành nuôi vi khuẩn trong môi trường bao gồm thành phần sau:
Glycerol: 4% CaCO3: 0,3% (NH4)2SO4 : 0,1% Cao nấm men: 0,3 % Thạch : 2g Cao ngô: 3% pH: 5,3 H2O : 1000ml
Hấp thanh trùng 120oC trong 10 phút. Để môi trường nguội cấy giống vi khuẩn nghiên cứu nuôi lắc 140 vòng/ phút ở nhiệt độ 30oC trong vòng 48h.
Nhỏ dung dịch Fehling vào 1ml dịch nuôi cấy trong ống eppendorf để kiểm tra sự tạo thành dihydroxyaceton (có sự xuất hiện kết tủa Cu2O màu đỏ gạch).
Cách pha dung dịch Fehling [3], [6]
Fehling 1: CuSO4.5H2O: 34,6g Nước cất : 500ml
Fehling 2: Na.K.Tartrat: 173g NaOH: 70g, Nước cất: 500ml
Trộn Fehling 1 và Fehling 2 theo tỷ lệ 1:1 ta được dung dịch Fehling màu xanh thẫm.
Phí Văn Tá K33B – SP Sinh 33 2.5.2.6. Sinh trưởng trên môi trường Hoyer [10]
Thành phần môi trường: (g/l)
(NH4)2SO4 : 1g KH2PO4: 0,9g FeCl3.6H2O : 0,02g MgSO4.7H2O : 0,25g K2HPO4: 0,1g Rượu êtylic 99,5%: 20ml Hấp thanh trùng 121oC trong 15 phút. Để môi trường nguội bổ sung giống nghiên cứu nuôi ở nhiệt độ khoảng 30oC trong 0, 12, 24, 48 giờ sau đó hút 1mml dịch nuôi cấy cho vào eppendorf ly tâm ở 5000 vòng trong 10 phút và xác định giá trị OD ở λ = 610nm.
2.5.2.7. Phát hiện khả năng tổng hợp cellulose
Nuôi cấy vi khuẩn trên môi trường dịch thể ở nhiệt độ 28-30oC trong vòng 3-4 ngày, quan sát sự hình thành màng. Kiểm tra khả năng bắt màu của màng bằng cách nhỏ lên đó dung dịch lugol và H2SO4 60% nó chuyển hoá thành màu xanh lam.