triển của khuẩn ty nấm Colletotrichum sp. T.VL1 trong điều kiện phòng thí
nghiệm
Mục đích: nhằm tìm ra loại thuốc hiệu quả cao trong việc ức chế nấm
Colletotrichum sp. T.VL1 gây bệnh thán thư trên hành.
Phương tiện
Nấm Colletotrichum sp. T.VL1 được nuôi cấy trên đĩa Petri chứa 10 ml môi
trường PDA khoảng 5 - 7 ngày.
Cấy các khoanh nấm Colletrotrichum (đường kính 5 mm) lên đĩa Petri chứa 10
ml môi trường PDA khoảng 1 ngày trước khi tiến hành đặt thuốc.
Đánh giá 7 loại thuốc trừ nấm (Bảng 2.2). Mỗi loại thuốc trừ bệnh cây được pha với nước cất thanh trùng theo khuyến cáo của nhà sản xuất.
Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, gồm 7 nghiệm thức thuốc với 5 lần lặp lại.
Phương Pháp
Khi nấm phát triển được khoảng 7 ngày thì dùng dụng cụ đục lỗ đường kính 5 mm đã thanh trùng đục lấy khoanh nấm từ đĩa nguồn chuyển vào giữa đĩa Petri có chứa 10 ml môi trường PDA. Sau 1 ngày, đặt khoanh giấy thấm có tẩm thuốc được
pha theo nồng độ của nhà sản xuất đặt đối xứng với khoanh nấm Colletotrichum sp.
T.VL1 và cách thành đĩa 1 cm. Trên mỗi đĩa Petri được thử nghiệm cho hai loại thuốc.
Chỉ tiêu theo dõi: đo bán kính vòng vô khuẩn và tính hiệu suất đối kháng giống như Thí Nghiệm 1.
2.2.3. Thí nghiệm 3: hiệu quả phòng trị của xạ khuẩn và thuốc trừ nấm đối
với nấm Colletotrichum sp. T.VL1 trong điều kiện nhà lưới
Mục đích: nhằm đánh giá hiệu quả phòng trị bệnh của hai chủng xạ khuẩn và thuốc hóa học chọn ra từ thí nghiệm 1 và 2 trong phòng trị bệnh thán thư trên
hành do Colletotrichum sp. T.VL1 trong điều kiện nhà lưới.
Phương tiện: 2 chủng xạ khuẩn đối kháng được chọn ra từ thí nghiệm 1 và 1
loại thuốc trừ nấm hiệu quả chọn ra từ thí nghiệm 2, chủng nấm Colletotrichum sp.
T.VL1, hành lá được trồng trong chậu nylon tại nhà lưới bộ môn Bảo vệ Thực vật, trang thiết bị khác.
21 Phương pháp
Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên 2 nhân tố:
Nhân tố 1 gồm 2 chủng xạ khuẩn và 1 loại thuốc trừ nấm
Nhân tố 2 gồm 3 biện pháp xử lý gồm:
- Phun đều lên toàn cây bằng huyền phù xạ khuẩn (108 cfu/ml) hoặc thuốc trừ nấm được pha theo nồng độ khuyến cáo trước khi chủng bệnh 1 ngày.
- Phun đều lên toàn cây bằng huyền phù xạ khuẩn (108 cfu/ml) hoặc thuốc trừ nấm được pha theo nồng độ khuyến cáo sau chủng bệnh 3 ngày.
- Phun đều lên toàn cây bằng huyền phù xạ khuẩn (108 cfu/ml) hoặc thuốc trừ nấm được pha theo nồng độ khuyến cáo trước khi chủng bệnh 1 ngày và sau chủng bệnh 3 ngày.
Nghiệm thức đối chứng có chủng bệnh. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tổng cộng 10 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức với 6 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại là 1 chậu, mỗi chậu trồng 3 cây hành.
Cách thực hiện
- Chuẩn bị huyền phù xạ khuẩn: xạ khuẩn được nuôi trên đĩa Petri chứa 10 ml môi trường MS trong khoảng 10 ngày, sau đó cho nước cất vô trùng vào, trộn đều và thu được huyền phù xạ khuẩn.
- Xác định mật số xạ khuẩn: được thực hiện bằng phương pháp pha loãng và chà lên đĩa Petri chứa 10 ml môi trường MS. Dựa vào số khuẩn lạc hình thành trên đĩa ở mỗi nồng độ pha loãng sau 48h, suy ra mật số bào tử sống trong huyền phù ban đầu. Sau đó thực hiện pha loãng thu được huyền phù xạ khuẩn mật số (108
cfu/ml).
- Thuốc trừ nấm được pha với nước cất thanh trùng theo khuyến cáo của nhà sản xuất.
- Chuẩn bị nguồn nấm: nấm Colletotrichum sp. T.VL1 được nuôi trên đĩa Petri
chứa môi trường PDA trong khoảng 10 ngày ở nhiệt độ phòng 250C, sáng tối xen kẽ 12 giờ để tạo bào tử. Sau đó cho nước cất vào, cạo nấm và thu hoạch bào tử bằng cách lược huyền phù nấm trong đĩa Petri qua vải lược vô trùng, xác định mật số bằng lam đếm hồng cầu, pha loãng để đạt mật số 5x105 bào tử/ml.
- Cách chủng bệnh: phun huyền phù bào tử nấm Colletotrichum sp. T.VL1 với
22
nấm thì ngưng. Sau khi chủng bệnh cây được ủ trong bóng tối và ẩm độ cao trong 3 ngày, sau đó cây được đặt trong môi trường tự nhiên.
Chỉ tiêu theo dõi: tỉ lệ lá bệnh (số lá bệnh/tổng số lá).
Tỉ lệ bệnh: ghi nhận số lá hành bị bệnh trên tổng số lá quan sát trong một nghiệm thức, được tính theo công thức sau (Anonymous, 2005)
Số lá bị bệnh
TLB (%) = X 100 Tổng số lá quan sát
* Xử lý số liệu
Các số liệu ghi nhận được tính toán và xử lý trên phần mềm Microsoft Office Excel và phân tích bằng phần mềm thống kê MSTATC qua phép thử DUNCAN
23
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN