Tuýp cao su non (8 mm Aldrich Chemical Co. Ltd). Lọ thủy tinh màu nâu có nắp đậy (thể tích 4 ml). Micro syringe (dung tích 100 μl, 25 μl).
Hộp plastic (2,5x3 cm), hộp nhựa tròn đường kính 15 x 18 cm, cao 10 cm. Máy chụp ảnh, kinh lúp, giấy nhôm, băng keo, kéo, bông gòn...
Hình 2.1 Tuýp cao su non (A) và lọ thủy tinh có nắp đậy (B)
2.1.2.2 Hóa chất
Dung môi n-hexane tinh khiết (Merk, Germany).
Pheromne giới tính tổng hợp: (Z)-9-tetradecenyl acetate (Z9-14:OAc); (Z)- 11-tetradecenyl acetate (Z11-14:OAc); (E)-11-tetradecenyl acetate (E11-14:OAc); tetradecyl acetate (14:OAc) và (Z)-9-dodecenyl acetate (Z9-12:OAc) được cung cấp bởi Công ty hóa chất Shin-Etsu (Nhật Bản) và phòng thí nghiệm Sinh thái học hóa chất của Trường Đại học Nông nghiệp và Công nghệ Tokyo (Nhật Bản).
18
2.1.2.3 Mồi pheromone
Mồi pheromone được dùng trong thí nghiệm là tuýp cao su (0,8 cm OD rubber septum, Aldrich, Germany) được nhồi pheromone giới tính tổng hợp theo thành phần và tỉ lệ trong Bảng 2.1. Pheromone giới tính tổng hợp được pha loãng trong n-hexane ở nồng độ 10 mg/ml (# 10 µg/µl). Dùng các micro syginge có dung tích 25 và 100 microliter (µl) để rút dung dịch pha loãng ở các hàm lượng tương ứng rồi nhồi vào tuýp cao su, đặt các tuýp cao su vào tủ hút khoảng 10 phút để dung môi bay hơi. Sau đó, tuýp cao su không thêm bất kỳ chất ổn định hay chất chống oxy hóa nào, được gói lại bằng giấy nhôm, dán nhãn và trữ trong điều kiện mát của tủ lạnh cho đến khi đưa ra áp dụng ngoài đồng.
Bảng 2.1 Thành phần pheromone giới tính tổng hợp của nhóm sâu cuốn lá họ Tortricidae (Theo Hồ Như Thủy, 2012)
2.1.2.4 Bẫy pheromone và cách đặt bẫy
Bẫy pheromone bao gồm một tấm dính (27 cm x 30 cm) và mái che và mồi pheromone được đặt ở giữa của tấm dính như hình 2.2.
Hình 2.2 Bẫy pheromone và bẫy được treo ở vườn
Cánh đặt bẫy trên vườn thí nghiệm: mồi pheromone giới tính được đặt vào giữa tấm dính của bẫy, rồi treo bẫy trên các cây ở độ cao khoảng 1,2 – 1,5 m (nhằm giúp thao tác được thuận tiện) trong tán cây, nơi râm mát và tránh ánh nắng trực tiếp. Khoảng cách giữa các bẫy khoảng 50m.
Bướm Thành phần mồi (mg/tuýt)
Z11-14:OAc Z9-14:OAc Z9-12:OAc E11-14:OAc 14:OAc
A. atrolucens 0,64 0,32 0,04
A. privatana 0,9 0,1
H. tabescens 0,9 0,1
19
2.2 PHƯƠNG PHÁP
2.2.1 Thí nghiệm 1: Đánh giá hiệu quả hấp dẫn của pheromone giới tính tổng hợp đối với sâu cuốn lá Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng hợp đối với sâu cuốn lá Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng
Mục đích: xác định thành phần và kiểu phối hợp pheromone giới tính tổng hợp cho hiệu quả hấp dẫn cao nhất đối với thành trùng Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ.
Địa điểm: trên vườn cam sành 6 - 7 tuổi có diện tích từ 3.500 m2 tại khu vực Phú Tân, Phường Tân Phú, Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ.
Thời gian: thí nghiệm được thực hiện trong 4 tuần, từ ngày 2/3/2013 đến 24/3/2013.
Cách tiến hành: thí nghiệm được bố trí theo thể thức khối hoàn toàn ngẫu nhiên một nhân tố với 5 nghiệm thức và 3 lần lặp lại. Mỗi lần lặp lại tương ứng với 1 bẫy pheromone trong đó có 4 nghiệm thức với 3 thành phần: Z11-14:OAc, E11- 14:OAc, Z9-12:OAc được phối trộn ở các tỉ lệ khác nhau được trình bày ở bảng 2.2. Ở nghiệm thức A-5 là tuýp cao su non Aldrich chỉ nhồi 10 μl n-hexane được sử dụng làm nghiệm thức đối chứng.
Bảng 2.2 Thành phần pheromone giới tính H. tabescens trong thí nghiệm 1
Chỉ tiêu ghi nhận: số lượng bướm Homona tabescens vào bẫy tuần/lần, ghi nhận chỉ tiêu trong 4 tuần.
2.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát hiệu quả của pheromone giới tính tổng hợp theo dãy nồng độ đối với bướm Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng dãy nồng độ đối với bướm Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng
Mục tiêu: xác định nồng độ hiệu quả nhất của pheromone giới tính tổng hợp đối với bươm Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ.
NT
Thành phần mồi (mg/tuýp)
Z11-14:OAc E11-14:OAc Z9-12:OAc
A-1 0,9 0,1 0,0
A-2 0,5 0,5 0,0
A-3 0,5 0,0 0,5
A-4 0,9 0,0 0,1
20
Thời gian: thí nghiệm được thực hiện trong 4 tuần, từ ngày 6/9/2013 đến 27/9/2013.
Địa điểm: thí nghiệm được bố trí trên một vườn cam sành 5 - 6 tuổi có diện tích 5.000 m2 tại khu vực Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ.
Cách tiến hành: thí nghiệm được bố trí theo thể thức khối hoàn toàn ngẫu nhiên một nhân tố với 6 nghiệm thức và 3 lần lặp lại. Mỗi lần lặp lại tương ứng với 1 bẫy pheromone trong đó có 5 nghiệm thức với 2 thành phần: Z11-14:OAc và Z9- 12:OAc được phối trộn ở tỉ lệ 9:1 theo các nồng độ khác nhau được trình bày trong
Bảng 2.2. Ở nghiệm thức A-6 là tuýp cao su non Aldrich chỉ nhồi 10 μl n-hexane được sử dụng làm nghiệm thức đối chứng.
Chỉ tiêu ghi nhận: số lượng bướm Homona tabescens vào bẫy tuần/lần, ghi nhận chỉ tiêu trong 4 tuần.
Bảng 2.3 Dãy nồng nộ của pheromone giới tính H. tabescens ở thí nghiệm 2
2.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát diễn biến mật số quần thể và tỉ lệ gây hại của bướm sâu cuốn lá trên các vườn cam quýt
Mục tiêu: khảo sát diễn biến mật số quần thể thành trùng của nhóm sâu cuốn lá họ Tortricidae bằng bẫy pheromone giới tính tổng hợp vùng trồng cây có múi thuộc tỉnh Hậu Giang và Tp. Cần Thơ nhằm quản lý nhóm sâu cuốn lá ở ĐBSCL.
Thời gian: thí nghiệm được thực hiện trong vòng 1 năm, từ ngày 29/8/2012 đến ngày 29/8/2013
Địa điểm: thí nghiệm được thực hiện tại các vườn cam sành được trình bày ở bảng 2.4
NT
Thành phần mồi Z11-14:OAc và Z9-12:OAc (tỉ lệ 9:1) (mg/tuýp) B-1 0,1 B-2 0,3 B-3 0,5 B-4 0,7 B-5 1,0 B-6 n-hexane
21
Bảng 2.4 Địa điểm thí nghiệm tại các vườn cam sành ở tỉnh Hậu Giang và Tp. Cần Thơ
Cách tiến hành: tại các vườn 1, 2, 3 mỗi vườn đặt 3 bẫy pheromone giới tính tổng hợp của A. atrolucens, A. privatana, H. tabescens tương ứng, với thành phần và tỉ lệ được trình bày trong bảng 2.1.
Ở vườn 4 được dùng để khảo sát diễn biến mật số bướm của cả ba loài A.
atrolucens, A. privatana và H. tabescens. Trên vườn được đặt 9 bẫy pheromone giới
tính, trong đó mỗi loài bướm sẽ đặt 3 bẫy pheromone giới tính tổng hợp với thành phần và tỉ lệ được trình bày ở bảng 2.1.
Khoảng cách giữa các bẫy trên mỗi vườn thí nghiệm vào khoảng 50 m. Mồi pheromone trong bẫy được thay mới 8 tuần/lần.
Ghi nhận số lượng bướm vào bẫy 2 tuần/lần trong suốt thời gian của thí nghiệm.
Bên cạnh chỉ tiêu số lượng bướm vào bẫy, tỉ lệ đọt bị hại và tỉ lệ lá bị hại bởi ấu trùng cuốn lá cam quýt cũng được ghi nhận. Trên mỗi vườn khảo sát, chọn 5 điểm theo đường chéo góc, mỗi điểm chọn 5 cây cam, trên mỗi cây chọn 4 hướng và 1 điểm trung tâm, mỗi hướng chọn 3 đọt. Ghi nhận tỉ lệ đọt bị, tỉ lệ lá bị hại 2 tuần/lần trong suốt thời gian một năm của thí nghiệm.
Tỷ lệ gây hại được tính theo công thức:
2.3 XỬ LÝ SỐ LIỆU
Số liệu được sử lý bằng phần mềm Microsoft Excel và trương trình thống kê MSTATC Vườn thí nghiệm Diện tích (m2) Tuổi cây
(năm) Địa điểm
Vườn 1 5.000 5 Xã Đông Phú, huyện Châu Thành, tỉnh Hậu Giang
Vườn 2 2.500 5-7 Xã Đông Thành, huyện Châu Thành, tỉnh Hậu Giang
Vườn 3 3.500 6-7 Phường Tân Phú, quận Cái Răng, Tp. Cần Thơ
Vườn 4 8.500 7-8 Xã Đông Thành, huyện Châu Thành, tỉnh Hậu Giang
Tỉ lệ gây hại 100
Tổng số đọt (lá) quan sát Tổng số đọt (lá) bị hại
22
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1 HIỆU QUẢ HẤP DẪN CỦA PHEROMONE GIỚI TÍNH ĐỐI VỚI BƯỚM
SÂU CUỐN LÁ Homona tabescens Ở ĐIỀU KIỆN NGOÀI ĐỒNG
Hiệu quả hấp dẫn ngoài đồng của pheromone giới tính tổng hợp Z11- 14:OAc, E11-14:OAc và Z9-12:OAc đối với bướm đực Homona tabescenstại vườn cam sành tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ được trình bày trong bảng 3.1.
Bảng 3.1 Hiệu quả hấp dẫn của pheromone giới tính đối với bướm đực Homona tabescens tại Quận Cái Răng, Tp. Cần Thơ
NT
Thành phần mồi (mg/tuýp) Số lượng thành trùng H. tabescens (TT/bẫy/tuần)a Z11-14:OAc E11-14:OAc Z9-12:OAc
A-1 0,9 0,1 0 0 b A-2 0,5 0,5 0 0 b A-3 0,5 0 0,5 0 b A-4 0,9 0 0,1 17,6 ± 2,82 a A-5 0 0 0 0 b CV (%) 2,45 Mức ý nghĩa **
Ghi chú: a Giá trị trung bình thành trùng vào bẫy được quy đổi về log(x+10) trước khi xử lý thống kê. Giá trị trong cùng một cột có cùng chữ cái theo sau không khác biệt ý nghĩa ở mức 5% qua phép thử Duncan. * Khác biệt ý nghĩa ở mức 5% qua phép thử Duncan.
Từ kết quả trên cho thấy số lượng thành trùng đực Homona tabescens chỉ vào bẫy ở nghiệm thức (A-4) có thành phần mồi pheromone giới tính hợp chất (Z11-14:OAc và Z9-12:OAc) với tỉ lệ phối trộn (9:1) là 17,6 TT/bẫy/tuần cao nhất có ý nghĩa so với các nghiệm thức còn lại A-1, A-2, A-3, A-5 là 0 TT/bẫy/tuần. Kết quả này phù hợp với kết quả của Hồ Như Thủy (2012) phân tích GC-EAD và GC- MS của mẫu pheromone ly trích từ thành trùng cái Homona tabescens và với dẫn suất DMDS đã xác định thành phần pheromone giới tính tổng hợp của H. tabescens
gồm các thành phần Z11-14:OAc và Z9-12:OAc.
Theo Vang et al. (2013) thì pheromone giới tính tổng hợp của nhóm sâu cuốn lá họ Tortricidae ở ĐBSCL có thành phần chính là Z11-14:OAc, ở các nghiệm thức A-1 đến A-4 đều có thành phần Z11-14:OAc nhưng chỉ có nghiệm thức A-4 có thêm Z9-12:OAc cho hiệu quả hấp dẫn H. tabescens. Mặt khác, theo các nghiên cứu
23
của Ando et al. (1981) và Noguchi et al. (1979) và (1981) loài Homona magnanima
Diakonoff ở Nhật Bản và theoWhittle et al. (1987) loài Homona spargotis Meyrick ở Australia pheromone giới tính của các loài này đều có thành phần phụ là Z9- 12:OAc. Từ đó có thể khẳng định pheromone giới tính của loài Homona tabescens
ở ĐBSCL có 2 thành phần Z11-14:OAc và Z9-12:OAc tỉ lệ phối trộn 9:1.
3.2 KHẢ NĂNG HẤP DẪN THÀNH TRÙNG Homona tabescens CỦA HỖN
HỢP Z11-14:OAC, Z9-12:OAC VỚI TỈ LỆ 9:1 THEO DÃY NỒNG ĐỘ
Hiệu quả hấp dẫn của pheromone giới tính tổng hợp đối với thành trùng
Homona tabescens được đánh giá bằng thí nghiệm tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ
với kết quả ghi nhận được trình bày trong bảng 3.2.
Bảng 3.2 Hiệu quả hấp dẫn bướm Homona tabescens của dãy nồng độ hỗn hợp Z11-14:OAc, Z9-12:OAc (tỉ lệ 9:1) tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ
Ghi chú: a Giá trị trung bình thành trùng vào bẫy được quy đổi về log(x+10) trước khi xử lý thống kê. Giá trị trong cùng một cột có cùng chữ cái theo sau không khác biệt ý nghĩa ở mức 5% qua phép thử Duncan.
* Khác biệt ý nghĩa ở mức 5% qua phép thử Duncan
Kết quả thí nghiệm được trình bày ở bảng 3.2 cho thấy: thì các nghiệm thức từ B-1 đến B-5 ở các nồng độ 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 1,0 mg/tuýp đều cho hiệu quả hấp dẫn thành trùng đực H. tabescens vào bẫy, tuy nhiên ở các nghiệm thức B-4 và B-5 cho hiệu quả hấp dẫn thành trùng Homona tabescens đực cao nhất có ý nghĩa so với nghiệm thức đối chứng (B-6). Trong đó số lượng thành trùng đực vào bẫy thu được ở nghiệm thức (B-4) với nồng độ 0,7 mg/tuýp là 6,60 TT/ bẫy/ tuần, nghiệm thức B- 5 với nồng độ 1 mg/tuýp là 5,93 TT/ bẫy/ tuần.
Từ kết quả của hai thí nghiệm trên đã cho thấy hiệu quả hấp dẫn quần thể bướm H. tabescens ở ĐBSCL có 2 thành phần chính là Z11-14:OAc với Z9-12:OAc
NT Thành phần (mg/tuýp) (Z11-14:OAc + Z9-12:OAc) (9:1) Số lượng thành trùng H. tabescens (TT/bẫy/tuần)a B-1 0,1 0,93±0,58 ab B-2 0,3 2,47±1,60 ab B-3 0,5 2,47±1,45 ab B-4 0,7 6,60±8,90 a B-5 1,00 5,93±3,78 a B-6 0,00 0,00±0,00 b CV% 17,71% Mức ý nghĩa *
24
theo tỉ lệ phối trộn 9:1 sẽ có hiệu quả hấp dẫn cao đối với thành trùng H. tabescens
ở nồng độ 1 hoặc 0,7 mg/ tuýp.
3.3 DIỄN BIẾN MẬT SỐ QUẦN THỂ VÀ TỈ LỆ GÂY HẠI CỦA NHÓM SÂU CUỐN LÁ TRÊN CÁC VƯỜN CAM SÀNH TẠI TP. CẦN THƠ CUỐN LÁ TRÊN CÁC VƯỜN CAM SÀNH TẠI TP. CẦN THƠ
3.3.1 Archips atrolucens Diakonoff
Hình 3.1 Diễn biến mật số quần thể của A. atrolucens tại xã Đông Phú, huyện Châu Thành, tỉnh Hậu Giang. ( = Tỉ lệ đọt non bị hại (%); = Tỉ lệ lá bị hại (%); = Trung bình số lượng bướm vào bẫy; = Nhiệt độ; = Lượng mưa)
Qua Hình 3.1, cho thấy thành trùng của A. atrolucens hiện diện trong suốt thời gian khảo sát tại vườn số 1 với số lượng thành trùng A. atrolucens vào bẫy tương đối thấp tập trung nhiều vào những tháng có lượng mưa trung bình thấp dao động từ 2 – 11 con/bẫy/2 tuần. Diễn biến mật số bướm vào bẫy cho thấy bướm A.
atrolucens hiện diện nhiều trong giai đoạn từ cuối tháng 11 đến cuối tháng 4 với 3
cao điểm là tháng 11/2012, tháng 2/2013 và tháng giữa tháng 4/2013, trung bình số lượng bướm vào bẫy 5,9 con/bẫy/2 tuần. Tỉ lệ đọt, lá bị sâu cuốn lá gây hại trên vườn thí nghiệm cũng diễn biến tương tự với mật số bướm vào bẫy khi tỉ lệ đọt, lá bị sâu cuốn lá gây hại nhiều nhất cũng tập trung vào tháng đầu tháng 11/2012 cho đến tháng 4/2013. Điều này chứng tỏ, trên vườn thí nghiệm luôn có đọt non làm nguồn thức ăn cho A. atrolucens phát triển quanh năm và số lượng ấu trùng luôn luôn hiện diện trên vườn gây hại.
0.00 50.00 100.00 150.00 200.00 250.00 300.00 350.00 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 12 /09 /2012 28 /09 /2012 12 /10 /2012 24 /10 /2012 07 /11 /2012 21 /11 /2012 07 /12 /2012 21 /12 /2012 03 /01 /2013 17 /01 /2013 02 /02 /2013 16 /02 /2013 29 /02 /2013 15 /03 /2013 2 9 /0 3 /2 0 1 3 1 4 /0 4 /2 0 1 3 28 /04 /2013 12 /05 /2013 26 /05 /2013 09 /06 /2013 24 /06 /2013 08 /07 /2013 22 /07 /2013 05 /08 /2013 19 /08 /2013 02 /09 /2013 12 /09 /2013 L ư ợn g m ư a (m m ) B ư ớm /b ẫy /2 tu ần T ỷ lệ đ ọt v à lá b ị hạ i (%) 30 25 15 N hi ệt đ ộ (0 C)
25
Kết quả phân tích số liệu cho thấy giữa số lượng bướm A. atrolucens đực vào bẫy và tỷ lệ đọt bị hại và tỷ lệ lá bị hại là có tương quan với nhau khá chặt với hệ số tương quan (r) giữa số lượng bướm vào bẫy và tỷ lệ đọt bị hại là 0,74 (phương trình hồi qui y = 1,129x+6,741; df = 26; P = 0,00) và hệ số tương quan (r) giữa số lượng bướm vào bẫy và tỷ lệ lá bị hại là 0,78 (phương trình hồi qui y = 0,517x+1,672; df = 26; P = 0,00) (Hình 3.2). Theo Lê Thanh Phong (2011), hệ số tương quan (r) có trị số từ 0,2 đến 0,5 là tương quan trung bình, hệ số tương quan (r) > 0,5 là tương quan cao.
3.3.2 Adoxophyes privatana Walker
Theo Hình 3.3, trong thời gian khảo sát số lượng bướm A. privatana vào bẫy và tỉ lệ gây hại trên đọt và lá đều hiện diện quanh năm tại vườn số 2, tuy nhiên với số lượng không lớn, số lượng thành trùng A. privatana vào bẫy duy trì ở mức tương đối thấp, dao động từ 1 – 3,67 con/bẫy/2 tuần, trung bình số lượng thành trùng của một năm vào bẫy 2,41 con/bẫy/2 tuần. Trên vườn thí nghiệm luôn có đọt non làm nguồn thức ăn cho ấu trùng A. privatana phát triển quanh năm và đường diễn biến tỉ lệ đọt non, lá bị hại cũng cho thấy có sự tương đồng với mật số bướm vào bẫy. Số