Theo kết quả thử nghiệm ngoài đồng của Hai et al. (2002), tại ĐBSCL, đã xác định được chất hấp dẫn giới tính của 19 loài bướm. Trong đó, 4 loài thuộc họ Noctuidae, họ phụ Plusiinae, là những loài bướm của sâu hại rau màu và cũng đã ghi nhận được diễn biến mật số của 3 trong 4 loài này.
Tại Hải Dương, thí nghiệm đặt 400 bẫy pheromone/ha cho khả năng khống chế sâu tơ (Plutella xylostella Linnaeus, Lepidoptera: Plutellidae) và sâu ăn tạp (Spodoptera litura Fabricius, Lepidoptera: Noctuidae) mà không cần phải phun thuốc trừ sâu (Lê Văn Trịnh và ctv., 2005).
Sử dụng bẫy pheromone để theo dõi sự phát sinh của sâu đục cuống trái vải thiều đã tạo đều kiện sử dụng thuốc đúng lúc, giảm chi phí thuốc bảo vệ thực vật khoảng 400.000 đồng/ha và giảm được 3 lần phun thuốc trừ sâu. Để phòng
15
trừ sâu tơ đã giảm được 3 lần dùng thuốc, thay 2 lần thuốc hóa học bằng thuốc sinh học, và tiết kiệm được 118.000 đồng/ha/vụ (Lê Văn Trịnh và ctv., 2005).
Đỗ Đức Cương (2006) đã thực hiện thí nghiệm khảo sát sự biến động mật số quần thể - xác định pheromone giới tính của bướm sâu đục vỏ trái bưởi Prays
sp. tại tỉnh Vĩnh Long. Kết quả thí nghiệm cho thấy bẫy pheromone giới tính của sâu đục vỏ trái bưởi đã có hiệu quả. Trong suốt thời gian thí nghiệm (từ tháng 8/2005 đến tháng 2/2006) Prays sp. hiện diện liên tục, mật số biến động cao hay thấp phụ thuộc vào mùa và tương ứng với các giai đoạn sinh lý của cây.
Lê Kỳ Ân (2009) qua phân tích và đánh giá hiệu quả ngoài đồng đã chứng tỏ pheromone giới tính của sâu đục vỏ trái bưởi gây hại trên các vườn bưởi Năm Roi ở vùng ĐBSCL chỉ gồm một thành phần duy nhất là hợp chất (Z)-7- tetradecenal. Hợp chất (Z)-7-tetradecenal đã được tổng hợp và điều chế thành mồi pheromone và chất quấy rối bắt cặp để ứng dụng vào khảo sát diễn biến mật số quần thể và phòng trị đối với Prays sp. Kết quả phòng trị bằng phương pháp quấy rối bắt cặp từ 15/08/2008 đến 30/09/2008 ghi nhận được ở hai nghiệm thức treo 200 tuýp/ha và nghiệm thức treo 400 tuýp/ha cho hiệu quả ngăn chặn bắt cặp 100% trong suốt quá trình thí nghiệm.
Theo Phạm Minh Tân (2011) khi đặt 12 bẫy pheromone/ 1.000 m2 (1 mg Z7-14:Ald/bẫy, thay mồi 6 tuần/lần) cho hiệu quả cao tương tự như nghiệm thức đối chứng với tỉ lệ gây hại của Prays sp. đối với trái bưởi Năm Roi là 27,55%. Trong khi đó biện pháp xử lý bằng phun 3 lần thuốc trừ sâu Fortox 50EC (hoạt chất Alpha-Cypermethin) cho hiệu quả trung bình với tỉ lệ gây hại là 31,39%.
1.3.3.3 Một số nghiên cứu pheromone giới tính của nhóm họ Tortricidea sâu cuốn lá gây hại trên cây có múi
Kết quả phân tích GC-EAD và GC-MS của mẫu pheromone ly trích từ bướm cái thô và với dẫn suất DMDS và kết quả đánh giá ngoài đồng đã xác định được pheromone giới tính của loài bướm A. atrolucens là hỗn hợp của các thành phần gồm 14:OAc, E11-14:OAc và Z11-14:OAc ở tỷ lệ 4:32:64, pheromone giới tính của loài bướm Homona sp. là hỗn hợp của các thành phần Z11-14:OAc và Z9-12:OAc ở tỷ lệ 96:4; pheromone giới tính của loài bướm A. privatana là hỗn hợp của các thành phần Z11-14:OAc và Z9-14:OAc ở tỷ lệ 92:8. Hàm lượng của thành phần Z11-14:OAc trong pheromone giới tính của bướm A. atrolucens,
Homona sp. và A. privatana có hàm lượng tương ứng là 47,96 ng/tuyến
pheromone, 0,65 ng/tuyến pheromone và 13,5 ng/tuyến pheromone (Hồ Như Thủy, 2012).
Theo Hai et al. (2002), phân tích tuyến pheromone bướm cái Archips
16
Z11-14:OAc và E9-14:OAc với tỉ lệ phối trộn (5:5) thí nghiệm được thực hiện 12/1998 đến thang 12/2000 ở Tp. Cần Thơ, số lượng bướm đực vào bẫy 21 con từ tháng 12/1998 đến 3/1999 và tháng 5/1999 đến tháng 6/1999 là 13 con.
17
CHƯƠNG 2
PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.1 PHƯƠNG TIỆN
2.1.1 Thời gian và địa điểm
Thời gian thực hiện: luận văn được thực hiện từ tháng 8/2012 đến 9/2013 Địa điểm: các vườn cam quýt tại tỉnh Hậu Giang và quận Cái Răng, Tp. Cần Thơ.
2.1.2 Phương tiện
2.1.2.1 Vật liệu thí nghiệm
Tuýp cao su non (8 mm Aldrich Chemical Co. Ltd). Lọ thủy tinh màu nâu có nắp đậy (thể tích 4 ml). Micro syringe (dung tích 100 μl, 25 μl).
Hộp plastic (2,5x3 cm), hộp nhựa tròn đường kính 15 x 18 cm, cao 10 cm. Máy chụp ảnh, kinh lúp, giấy nhôm, băng keo, kéo, bông gòn...
Hình 2.1 Tuýp cao su non (A) và lọ thủy tinh có nắp đậy (B)
2.1.2.2 Hóa chất
Dung môi n-hexane tinh khiết (Merk, Germany).
Pheromne giới tính tổng hợp: (Z)-9-tetradecenyl acetate (Z9-14:OAc); (Z)- 11-tetradecenyl acetate (Z11-14:OAc); (E)-11-tetradecenyl acetate (E11-14:OAc); tetradecyl acetate (14:OAc) và (Z)-9-dodecenyl acetate (Z9-12:OAc) được cung cấp bởi Công ty hóa chất Shin-Etsu (Nhật Bản) và phòng thí nghiệm Sinh thái học hóa chất của Trường Đại học Nông nghiệp và Công nghệ Tokyo (Nhật Bản).
18
2.1.2.3 Mồi pheromone
Mồi pheromone được dùng trong thí nghiệm là tuýp cao su (0,8 cm OD rubber septum, Aldrich, Germany) được nhồi pheromone giới tính tổng hợp theo thành phần và tỉ lệ trong Bảng 2.1. Pheromone giới tính tổng hợp được pha loãng trong n-hexane ở nồng độ 10 mg/ml (# 10 µg/µl). Dùng các micro syginge có dung tích 25 và 100 microliter (µl) để rút dung dịch pha loãng ở các hàm lượng tương ứng rồi nhồi vào tuýp cao su, đặt các tuýp cao su vào tủ hút khoảng 10 phút để dung môi bay hơi. Sau đó, tuýp cao su không thêm bất kỳ chất ổn định hay chất chống oxy hóa nào, được gói lại bằng giấy nhôm, dán nhãn và trữ trong điều kiện mát của tủ lạnh cho đến khi đưa ra áp dụng ngoài đồng.
Bảng 2.1 Thành phần pheromone giới tính tổng hợp của nhóm sâu cuốn lá họ Tortricidae (Theo Hồ Như Thủy, 2012)
2.1.2.4 Bẫy pheromone và cách đặt bẫy
Bẫy pheromone bao gồm một tấm dính (27 cm x 30 cm) và mái che và mồi pheromone được đặt ở giữa của tấm dính như hình 2.2.
Hình 2.2 Bẫy pheromone và bẫy được treo ở vườn
Cánh đặt bẫy trên vườn thí nghiệm: mồi pheromone giới tính được đặt vào giữa tấm dính của bẫy, rồi treo bẫy trên các cây ở độ cao khoảng 1,2 – 1,5 m (nhằm giúp thao tác được thuận tiện) trong tán cây, nơi râm mát và tránh ánh nắng trực tiếp. Khoảng cách giữa các bẫy khoảng 50m.
Bướm Thành phần mồi (mg/tuýt)
Z11-14:OAc Z9-14:OAc Z9-12:OAc E11-14:OAc 14:OAc
A. atrolucens 0,64 0,32 0,04
A. privatana 0,9 0,1
H. tabescens 0,9 0,1
19
2.2 PHƯƠNG PHÁP
2.2.1 Thí nghiệm 1: Đánh giá hiệu quả hấp dẫn của pheromone giới tính tổng hợp đối với sâu cuốn lá Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng hợp đối với sâu cuốn lá Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng
Mục đích: xác định thành phần và kiểu phối hợp pheromone giới tính tổng hợp cho hiệu quả hấp dẫn cao nhất đối với thành trùng Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ.
Địa điểm: trên vườn cam sành 6 - 7 tuổi có diện tích từ 3.500 m2 tại khu vực Phú Tân, Phường Tân Phú, Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ.
Thời gian: thí nghiệm được thực hiện trong 4 tuần, từ ngày 2/3/2013 đến 24/3/2013.
Cách tiến hành: thí nghiệm được bố trí theo thể thức khối hoàn toàn ngẫu nhiên một nhân tố với 5 nghiệm thức và 3 lần lặp lại. Mỗi lần lặp lại tương ứng với 1 bẫy pheromone trong đó có 4 nghiệm thức với 3 thành phần: Z11-14:OAc, E11- 14:OAc, Z9-12:OAc được phối trộn ở các tỉ lệ khác nhau được trình bày ở bảng 2.2. Ở nghiệm thức A-5 là tuýp cao su non Aldrich chỉ nhồi 10 μl n-hexane được sử dụng làm nghiệm thức đối chứng.
Bảng 2.2 Thành phần pheromone giới tính H. tabescens trong thí nghiệm 1
Chỉ tiêu ghi nhận: số lượng bướm Homona tabescens vào bẫy tuần/lần, ghi nhận chỉ tiêu trong 4 tuần.
2.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát hiệu quả của pheromone giới tính tổng hợp theo dãy nồng độ đối với bướm Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng dãy nồng độ đối với bướm Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng
Mục tiêu: xác định nồng độ hiệu quả nhất của pheromone giới tính tổng hợp đối với bươm Homona tabescens ở điều kiện ngoài đồng tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ.
NT
Thành phần mồi (mg/tuýp)
Z11-14:OAc E11-14:OAc Z9-12:OAc
A-1 0,9 0,1 0,0
A-2 0,5 0,5 0,0
A-3 0,5 0,0 0,5
A-4 0,9 0,0 0,1
20
Thời gian: thí nghiệm được thực hiện trong 4 tuần, từ ngày 6/9/2013 đến 27/9/2013.
Địa điểm: thí nghiệm được bố trí trên một vườn cam sành 5 - 6 tuổi có diện tích 5.000 m2 tại khu vực Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ.
Cách tiến hành: thí nghiệm được bố trí theo thể thức khối hoàn toàn ngẫu nhiên một nhân tố với 6 nghiệm thức và 3 lần lặp lại. Mỗi lần lặp lại tương ứng với 1 bẫy pheromone trong đó có 5 nghiệm thức với 2 thành phần: Z11-14:OAc và Z9- 12:OAc được phối trộn ở tỉ lệ 9:1 theo các nồng độ khác nhau được trình bày trong
Bảng 2.2. Ở nghiệm thức A-6 là tuýp cao su non Aldrich chỉ nhồi 10 μl n-hexane được sử dụng làm nghiệm thức đối chứng.
Chỉ tiêu ghi nhận: số lượng bướm Homona tabescens vào bẫy tuần/lần, ghi nhận chỉ tiêu trong 4 tuần.
Bảng 2.3 Dãy nồng nộ của pheromone giới tính H. tabescens ở thí nghiệm 2
2.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát diễn biến mật số quần thể và tỉ lệ gây hại của bướm sâu cuốn lá trên các vườn cam quýt
Mục tiêu: khảo sát diễn biến mật số quần thể thành trùng của nhóm sâu cuốn lá họ Tortricidae bằng bẫy pheromone giới tính tổng hợp vùng trồng cây có múi thuộc tỉnh Hậu Giang và Tp. Cần Thơ nhằm quản lý nhóm sâu cuốn lá ở ĐBSCL.
Thời gian: thí nghiệm được thực hiện trong vòng 1 năm, từ ngày 29/8/2012 đến ngày 29/8/2013
Địa điểm: thí nghiệm được thực hiện tại các vườn cam sành được trình bày ở bảng 2.4
NT
Thành phần mồi Z11-14:OAc và Z9-12:OAc (tỉ lệ 9:1) (mg/tuýp) B-1 0,1 B-2 0,3 B-3 0,5 B-4 0,7 B-5 1,0 B-6 n-hexane
21
Bảng 2.4 Địa điểm thí nghiệm tại các vườn cam sành ở tỉnh Hậu Giang và Tp. Cần Thơ
Cách tiến hành: tại các vườn 1, 2, 3 mỗi vườn đặt 3 bẫy pheromone giới tính tổng hợp của A. atrolucens, A. privatana, H. tabescens tương ứng, với thành phần và tỉ lệ được trình bày trong bảng 2.1.
Ở vườn 4 được dùng để khảo sát diễn biến mật số bướm của cả ba loài A.
atrolucens, A. privatana và H. tabescens. Trên vườn được đặt 9 bẫy pheromone giới
tính, trong đó mỗi loài bướm sẽ đặt 3 bẫy pheromone giới tính tổng hợp với thành phần và tỉ lệ được trình bày ở bảng 2.1.
Khoảng cách giữa các bẫy trên mỗi vườn thí nghiệm vào khoảng 50 m. Mồi pheromone trong bẫy được thay mới 8 tuần/lần.
Ghi nhận số lượng bướm vào bẫy 2 tuần/lần trong suốt thời gian của thí nghiệm.
Bên cạnh chỉ tiêu số lượng bướm vào bẫy, tỉ lệ đọt bị hại và tỉ lệ lá bị hại bởi ấu trùng cuốn lá cam quýt cũng được ghi nhận. Trên mỗi vườn khảo sát, chọn 5 điểm theo đường chéo góc, mỗi điểm chọn 5 cây cam, trên mỗi cây chọn 4 hướng và 1 điểm trung tâm, mỗi hướng chọn 3 đọt. Ghi nhận tỉ lệ đọt bị, tỉ lệ lá bị hại 2 tuần/lần trong suốt thời gian một năm của thí nghiệm.
Tỷ lệ gây hại được tính theo công thức:
2.3 XỬ LÝ SỐ LIỆU
Số liệu được sử lý bằng phần mềm Microsoft Excel và trương trình thống kê MSTATC Vườn thí nghiệm Diện tích (m2) Tuổi cây
(năm) Địa điểm
Vườn 1 5.000 5 Xã Đông Phú, huyện Châu Thành, tỉnh Hậu Giang
Vườn 2 2.500 5-7 Xã Đông Thành, huyện Châu Thành, tỉnh Hậu Giang
Vườn 3 3.500 6-7 Phường Tân Phú, quận Cái Răng, Tp. Cần Thơ
Vườn 4 8.500 7-8 Xã Đông Thành, huyện Châu Thành, tỉnh Hậu Giang
Tỉ lệ gây hại 100
Tổng số đọt (lá) quan sát Tổng số đọt (lá) bị hại
22
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1 HIỆU QUẢ HẤP DẪN CỦA PHEROMONE GIỚI TÍNH ĐỐI VỚI BƯỚM
SÂU CUỐN LÁ Homona tabescens Ở ĐIỀU KIỆN NGOÀI ĐỒNG
Hiệu quả hấp dẫn ngoài đồng của pheromone giới tính tổng hợp Z11- 14:OAc, E11-14:OAc và Z9-12:OAc đối với bướm đực Homona tabescenstại vườn cam sành tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ được trình bày trong bảng 3.1.
Bảng 3.1 Hiệu quả hấp dẫn của pheromone giới tính đối với bướm đực Homona tabescens tại Quận Cái Răng, Tp. Cần Thơ
NT
Thành phần mồi (mg/tuýp) Số lượng thành trùng H. tabescens (TT/bẫy/tuần)a Z11-14:OAc E11-14:OAc Z9-12:OAc
A-1 0,9 0,1 0 0 b A-2 0,5 0,5 0 0 b A-3 0,5 0 0,5 0 b A-4 0,9 0 0,1 17,6 ± 2,82 a A-5 0 0 0 0 b CV (%) 2,45 Mức ý nghĩa **
Ghi chú: a Giá trị trung bình thành trùng vào bẫy được quy đổi về log(x+10) trước khi xử lý thống kê. Giá trị trong cùng một cột có cùng chữ cái theo sau không khác biệt ý nghĩa ở mức 5% qua phép thử Duncan. * Khác biệt ý nghĩa ở mức 5% qua phép thử Duncan.
Từ kết quả trên cho thấy số lượng thành trùng đực Homona tabescens chỉ vào bẫy ở nghiệm thức (A-4) có thành phần mồi pheromone giới tính hợp chất (Z11-14:OAc và Z9-12:OAc) với tỉ lệ phối trộn (9:1) là 17,6 TT/bẫy/tuần cao nhất có ý nghĩa so với các nghiệm thức còn lại A-1, A-2, A-3, A-5 là 0 TT/bẫy/tuần. Kết quả này phù hợp với kết quả của Hồ Như Thủy (2012) phân tích GC-EAD và GC- MS của mẫu pheromone ly trích từ thành trùng cái Homona tabescens và với dẫn suất DMDS đã xác định thành phần pheromone giới tính tổng hợp của H. tabescens
gồm các thành phần Z11-14:OAc và Z9-12:OAc.
Theo Vang et al. (2013) thì pheromone giới tính tổng hợp của nhóm sâu cuốn lá họ Tortricidae ở ĐBSCL có thành phần chính là Z11-14:OAc, ở các nghiệm thức A-1 đến A-4 đều có thành phần Z11-14:OAc nhưng chỉ có nghiệm thức A-4 có thêm Z9-12:OAc cho hiệu quả hấp dẫn H. tabescens. Mặt khác, theo các nghiên cứu
23
của Ando et al. (1981) và Noguchi et al. (1979) và (1981) loài Homona magnanima
Diakonoff ở Nhật Bản và theoWhittle et al. (1987) loài Homona spargotis Meyrick ở Australia pheromone giới tính của các loài này đều có thành phần phụ là Z9- 12:OAc. Từ đó có thể khẳng định pheromone giới tính của loài Homona tabescens
ở ĐBSCL có 2 thành phần Z11-14:OAc và Z9-12:OAc tỉ lệ phối trộn 9:1.
3.2 KHẢ NĂNG HẤP DẪN THÀNH TRÙNG Homona tabescens CỦA HỖN
HỢP Z11-14:OAC, Z9-12:OAC VỚI TỈ LỆ 9:1 THEO DÃY NỒNG ĐỘ
Hiệu quả hấp dẫn của pheromone giới tính tổng hợp đối với thành trùng
Homona tabescens được đánh giá bằng thí nghiệm tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ
với kết quả ghi nhận được trình bày trong bảng 3.2.
Bảng 3.2 Hiệu quả hấp dẫn bướm Homona tabescens của dãy nồng độ hỗn hợp Z11-14:OAc, Z9-12:OAc (tỉ lệ 9:1) tại Q. Cái Răng, Tp. Cần Thơ
Ghi chú: a Giá trị trung bình thành trùng vào bẫy được quy đổi về log(x+10) trước khi xử lý thống kê. Giá trị trong cùng một cột có cùng chữ cái theo sau không khác biệt ý nghĩa ở mức 5% qua phép thử Duncan.
* Khác biệt ý nghĩa ở mức 5% qua phép thử Duncan
Kết quả thí nghiệm được trình bày ở bảng 3.2 cho thấy: thì các nghiệm thức từ B-1 đến B-5 ở các nồng độ 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 1,0 mg/tuýp đều cho hiệu quả hấp dẫn thành trùng đực H. tabescens vào bẫy, tuy nhiên ở các nghiệm thức B-4 và B-5 cho hiệu quả hấp dẫn thành trùng Homona tabescens đực cao nhất có ý nghĩa so với nghiệm thức đối chứng (B-6). Trong đó số lượng thành trùng đực vào bẫy thu được ở nghiệm thức (B-4) với nồng độ 0,7 mg/tuýp là 6,60 TT/ bẫy/ tuần, nghiệm thức B- 5 với nồng độ 1 mg/tuýp là 5,93 TT/ bẫy/ tuần.
Từ kết quả của hai thí nghiệm trên đã cho thấy hiệu quả hấp dẫn quần thể bướm H. tabescens ở ĐBSCL có 2 thành phần chính là Z11-14:OAc với Z9-12:OAc
NT Thành phần (mg/tuýp) (Z11-14:OAc + Z9-12:OAc) (9:1)