ứng clony PCR
Trên đĩa biến nạp, chúng tôi chọn ngẫu nhiên mỗi mẫu 3 khuẩn lạc trắng để thực hiện phản ứng clony-PCR sử dụng cặp mồi katG-F và katG-R. Sản phẩm clony-PCR được kiểm tra bằng phương pháp điện di trên gel agarose 1%. Nếu khuẩn có plasmid mang gen katG thì sản phẩm PCR sẽ xuất hiện một băng có kích thước mong muốn khoảng 680 bp (hình 3.5a,b).
Hình 3.5a: Kết quả clony-PCR
M: Marker 1Kb
N1.1, N1.2, N1.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu N1 S1.2, S1.2, S1.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S1 S2.1, S2.2, S2.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S2 S3.1, S3.2, S3.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S3 S4.1. S4.2, S4.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S4 S5.1, S5.2, S5.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S5 S6.1, S6.2, S6.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S6 (-): đối chứng âm Đỗ Thị Phương 33 K13.0605 M N1.1 N1.2 N1.3 S1.1 S1.2 S1.3 S2.1 S2.2 S2.3 S3.1 S3.2 S3.3 S4.1 S4.2 S4.3 S5.1 S5.2 S5.3 S6.1 S6.2 S6.3 500 250 680 bp bp
Khoá luận tốt nghiệp Khoa Công nghệ sinh học
Hình 3.5b: Kết quả clony-PCR
M: Marker 1Kb
S8.1, S8.2, S8.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S8 S10.1, S10.2, S10.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S10 S13.1, S13.2, S13.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S13 S14.1, S14.2, S14.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S14 S15.1, S15.2, S15.3: Khuẩn lạc trắng của mẫu S15 (-): đối chứng âm
Kết quả điện di cho thấy: Mẫu đối chứng âm không xuất hiện băng sản phẩm nào chứng tỏ thao tác cũng như dụng cụ thí nghiệm và hoá chất thực hiện phản ứng clony – PCR không bị nhiễm tạp bởi các nhân tố bên ngoài. Trong số các dòng khuẩn lạc được chọn ở tất cả các mẫu nghiên cứu đều cho ít nhất một khuẩn lạc chứa plasmid tái tổ hợp mang đoạn gen katG. Do vậy các dòng khuẩn lạc trắng đó được chúng tôi lựa chọn để nuôi lắc ở 370C qua đêm trên môi trường LB lỏng có chất kháng sinh phù hợp để tiến hành tách DNA plasmid. Các DNA plasmid thu được sẽ là nguyên liệu cho giải trình tự gen.