- Chạy điện di ADN cắt giới hạn trên gel agarose 0,8%, điện thế 4050V, 1214 giờ.
3.3.3. Thấm chuyển ADN genom lên màng nylon
Hình 10: Bản điện di phân giải genom cây bông đợc cắt bởi HindIII trớc khi thấm chuyển lên màng nylon. 1: Thang ADN chuẩn; 2-14: ADN cây bông kháng sâu (5 àg)
Các mẫu ADN của các dòng bông kháng sâu đa vào lai Southern đợc cắt bởi HindIII. Hình 10 ghi lại độ phân giải tốt của các mẫu 5 àg ADN trên bản gel điện di trớc khi thấm chuyển. Hình 11 là ảnh điện di của 7 àg ADN đợc cắt bằng cùng enzym HindIII. Độ dài của bản gel điện di theo chế độ đã nêu ở trên thờng là 10-11 cm. Vì vậy, kích thớc của màng lai tơng ứng là 100-110 cm2.
Hình 11: Bản điện di phân giải genom cây bông đợc cắt bởi HindIII trớc khi thấm chuyển lên màng nylon. 1: Thang ADN chuẩn; 2-12: ADN cây bông kháng sâu (7 àg)
Trong thực nghiệm thấm chuyển ADN lên màng lai, chúng tôi dùng loại giấy lọc có sẵn trong phòng thí nghiệm để làm cầu dẫn dung dịch chuyển, mà không dùng đúng chủng loại Whatman nh quy trình chuẩn khuyên dùng. Tầng giấy thấm ở phía trên màng là loại giấy ăn bán trên thị trờng. ở thực nghiệm đầu tiên, thấy rằng sự thấm ngợc lên tầng giấy thấm xảy ra quá nhanh. Sau 3 giờ, dung dịch chuyển đã thấm hết tầng giấy cao 15 cm. Do đó phải thay tầng giấy thấm này trong quả trình thấm chuyển. Tuy nhiên, khi kiểm tra bản gelsau thấm chuyển cho thấy ADN đã đ- ợc chuyển hết mà không sót lại trên gel.
ở thực nghiệm sau, 3 lớp giấy lọc của cầu giấy đợc thay bằng 2 lớp. Còn 3 lớp giấy lọc trên màng đợc thay bằng một lớp có độ dày 1.5 cm. Trong điều kiện này, quá trình thấm chuyển chậm lại, sau 10-12 giờ độ dài thấm ớt của tầng giấy thấm là 6-7 cm, đợc coi là bình thờng theo kinh nghiệm.