a. Nghiên cứu độ Ổn định trong điều kiện lão hoá cấp tốc
Trong điều kiện thời gian có hạn, để có thể đánh giá được sự ảnh hưởng của một số yếu tố đến độ ổn định của thuốc tiêm Piroxicam, chúng tôi sử dụng phương pháp lão hoá cấp tốc để nghiên cứu.
Các dung dịch thuốc tiêm của mỗi công thức được đóng ống tiêm lm l, loại thuỷ tinh màu vàng hoặc không màu, sục khí trơ hoặc không sục khí trơ.
Tiến hành nghiên cứu độ ổn định của dung dịch tiêm piroxicam theo phương pháp ghi ở mục 2.1.3. e.
> Thay đổi liên tục các điều kiện bảo quản
Đánh giá các chỉ tiêu về độ ổn định sau 2 tháng để lão hoá trong điều kiện thay đổi nhiệt độ đột ngột bằng cách đưa các dung dịch thuốc tiêm vào tủ lạnh (2ngày), nhiệt độ phòng (2ngày), lặp lại 15 lần như thế trong suốt thời gian 2 tháng. Qua đó, xác định được tác động của các yếu tố: p-cyd, loại ống tiêm, tiệt khuẩn, sục khí trơ đến độ ổn định của thuốc tiêm dung môi nước.
■ Ảnh hưởng của p-cyd Kết quả được trình bày trong bảng 2.9.
Bảng 2.9 - Ảnh hưởng của P-cyd đến độ ổn định của dung dịch thuốc tiêm piroxicam sau 15 lần thay đổi điều kiện bảo quản
Công thức Nồng độ PX (mg/ml) Thành phần tá dược Cảm quan % PX còn lại Tốc độ giảm hàm lượng theo thòi gian
(% / ngày)
15 20 (-) P-cyd vẩn đục 82 0.3
16 20 (-) p-cyd vẩn đục 85 0.25
19 20 (+) P-cyd trong,vàng 92 0.133
20 20 (+) p-cyd trong,vàng 87 0.216
* Ghi chú: (+) p-cyd: có P-cyd trong công thức
(-) P-cyd: không có p-cyd trong công thức Kết quả từ bảng 2.9 cho thấy:
- Sau thời gian lão hoá, trong số 4 dung dịch piroxicam pha theo các công thức khác nhau, nhận thấy dung dịch pha theo hai CT 15 và 16 không có P" cyd đều bị vẩn đục. Trong khi đó, mẫu pha theo CT19 và CT20 có P-cyd, dung dịch vẫn trong suốt, màu vàng, không có thay đổi về cảm quan.
- Hàm lượng pừoxicam còn lại nói chung không khác nhau nhiều giữa các công thức. Hình 2.7 cho thấy, tốc độ giảm hàm lượng piroxicam theo thời gian trong các mẫu lần lượt là CT 15 > CT 16 > CT 20 > CT 19. Bước đầu có thể thấy rằng dung dịch pha theo CT19 - với 4% P-cyd trong thành phần ổn định hơn các mẫu thuốc nghiên cứu khác.
0,3
0,25
CT15 CT16 CT19 CT20
Hình 2.7 - Tốc độ giảm hàm lượng piroxicam ■ Ảnh hưởng của ioại ống tiêm
Làm thí nghiệm với các dung dịch đóng trong ống thuỷ tinh màu vàng và ống thuỷ tinh không màu, tất cả đều không sục khí trơ, có tiệt khuẩn. Sau thời gian lão hoá cấp tốc, quan sát cảm quan và định lượng các mẫu. Kết quả được trình bày ở bảng 2.10
Bảng 2.10 - Ánh hưởng của loại ống tiêm đến độ ổn định của dung dịch piroxicam TT Nồng độ PX (mg/ml) Cảm quan %PX còn lại ống m àu ống trắn g CT16 20 Trong, vàng Vẩn đục 88 CT19 20 Trong, vàng Trong, vàng 95
Kết quả ở bảng 2.10 cho thấy: Các dung dịch trong ống ống thuỷ tinh màu ổn định hơn trong ống trắng. Điều này có thể giải thích là do ống màu tránh được sự phãn huỷ bởi ánh sáng. Chọn các ống thuỷ tinh màu để nghiên cứu thêm về độ ổn định của dung dịch tiêm piroxicam.
■ Ảnh hưởng của phương pháp tiệt khuẩn
Tiến hành thí nghiệm với các ống tiêm màu, không sục khí trơ, được chia làm 2 loại: loại 1 được tiệt khuẩn bằng nhiệt ẩm: 100°c/ 30 phút, loại 2 không tiệt khuẩn. Kết quả được trình bày ở bảng 2.11
Bảng 2.1 1 - Ánh hưởng của tiệt khuẩn đến độ ổn định của dung dịch thuốc tiêm piroxicam
Công
thức Nồng độ (mg/ml)
Cảm q[uan
Có tiệt khuẩn Không tiệt khuẩn
CT16 20 Trong, vàng Vẩn đục
CT19 20 Trong, vàng Trong, vàng
Thực tế cho thấy: Tiệt khuẩn bằng nhiệt (100°c/ 30 p h ú t) làm cho dung dịch tiêm piroxicam ổn định hơn trường hợp không tiệt khuẩn. Điều này có thể giải thích như sau: nhiệt độ và thời gian làm tăng khả năng tạo phức của piroxicam với p-cyd, do vậy sẽ ổn định về độ tan hơn. Kết quả thực nghiệm hoàn toàn phù hợp với nghiên cứu của Van Hees khi xác định ảnh hưởng của nhiệt độ và thời gian tới độ tan và độ ổn định của hỗn hợp piroxicam với p- cyclodextrin [33].
■ Ẩnh hưởng của sục khí trơ
Tiến hành thí nghiệm với các ống tiêm màu, có tiệt khuẩn, chia làm 2 mẫu: mẫu 1 sục khí trơ (nitơ) và mẫu 2 không sục khí trơ. Kết quả được trình bày ở bảng 2.12.
Kết quả thí nghiệm cho thấy: Việc sục khí trơ ảnh hưởng đến độ ổn định của dung dịch thuốc tiêm piroxicam, ống tiêm không sục khí trơ ổn định hơn
ống có sục khí trơ. Sở đĩ như vậy có thể là do việc sục khí trơ làm giảm độ tan của dược chất trong dung môi, do đó dung dịch kém ổn định.
Bảng 2.12 - Ảnh hưởng của sục khí trơ đến độ ổn định của thuốc tiêm piroxicam
TT Nồng độ Cảm q[uan
Sục khí nitơ Không sục khí nitơ
CT 16 20 mg/ml Vẩn đục Trong, vàng
CT19 20 mg/ml Trong, vàng Trong, vàng
Kết hợp các yếu tố đã nghiên cứu, nhận thấy rằng độ ổn định của dung dịch pha theo CT 19 tốt hơn dung dịch pha theo CT 16. Áp dụng CT 19 cho các phần nghiên cứu tiếp theo.
'r Lão hoá cấp tốc bằng cách đun sôi liên tục các ống tiêm
Chọn CT19 trong mục nghiên cứu này. Tiến hành thí nghiệm với các ống tiêm màu, có tiệt khuẩn và không sục khí trơ, quá trình tiến hành như đã trình bày ở mục 2.1.3.e. Kết quả được trình bày ở bảng 2.13
Bảng 2.13 - Kết quả về cẳm quan và hàm lượng piroxicam của các dung dịch tiêm sau thời gian đun sôi
TT Thời gian lấy m ẫu
(giờ) * Cảm quan Hàm lượng % PX còn lại
1 0 trong, vàng 100 2 0.5 trong, vàng 99 3 1 trong, vàng 94 4 5 trong, vàng đậm 88 5 10 trong, vàng đậm 84 6 15 trong, vàng sẫm 82
Số liệu trong bảng 2.13 cho thấy: Khi đun liên tục các mẫu thuốc tiêm có ảnh hưởng đến tính chất cảm quan của dung dịch. Tuy vẫn đạt độ trong, nhưng màu sắc thay đổi: từ vàng đến vàng sẫm chứng tỏ có sự biến đổi dược chất. Mặt khác kết quả cũng cho thấy hàm lượng piroxicam giảm dần khi thời gian đun sôi tăng lên. Chứng tỏ rằng: nhiệt độ tăng, thời gian tăng sẽ tăng phản ứng phân huỷ.
b. Nghiên cứu độ Ổn định ở điều kiện thưòng: ngoài tròi và trong phồng
Các ống thuốc tiêm được bảo quản trong 2 điều kiện khác nhau là ngoài trời và trong phòng. Sau thời gian 2 tháng, kiểm tra lại các chỉ tiêu chất lượng của dung dịch thuốc tiêm.
'r Điều kiện ngoài trồi
Kết quả được trình bày ở bảng 2.14.
Bảng 2.14 - Các ống thuốc tiêm sau 2 tháng để ngoài trời
TT Phân loại Cảm quan % PX còn lại
1 Sục khí, ống trắng, có TK trong, vàng 87.2 2 Sục khí, ống trắng, không TK vẩn đục 82.1 3 Sục khí, ống màu, không TK vẩn đục 83.5 4 Sục khí, ống màu, có TK trong, vàng 89.2 5 Không sục khí, ống trắng, không TK trong, vàng 90.7 6 Không sục khí, ống trắng, có TK trong, vàng 91.8 7 Không sục khí, ống màu, không TK trong, vàng 90.5 8 Không sục khí, ống màu, có TK trong, vàng 92.1
Từ kết quả trên có thế kết luận sơ bộ:
- Ánh sáng mặt trời có ảnh hưởng không tốt đến độ ổn định của dung dịch thuốc tiêm. Bởi lẽ piroxicam rất nhạy cảm với ánh sáng, nhất là ánh sáng mặt trời, làm tăng quá trình phân huỷ dược chất
- Qua kết quả trên nhận thấy: có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của dung dịch piroxicam: tiệt khuẩn, đóng ống màu, không sục khí trơ. Kết quả về cảm quan dung dịch và hàm lượng piroxicam sau thời gian lão hoá phù hợp với các kết quả nghiên cứu ở mục 2.2.3. a
> Điều kiện nhiệt độ phòng Kết quả được trình bày ở bảng 2.15.
Kết quả thực nghiệm cho thấy: Khi bảo quản các dung dịch thuốc tiêm ở
điều kiện nhiệt độ phòng, tránh tiếp xúc với ánh sáng mặt trời, các dung dịch ổn định về mặt cảm quan và hàm lượng piroxicam bị thay đổi không đáng kể. Sơ bộ cho thấy, các chỉ tiêu chất lượng thuốc vẫn đạt.
Bảng 2.15 - Các ống thuốc tiêm sau 2 tháng để ở nhiệt độ phòng
TT Phân loại Cảm quan Hàm lượng còn lại
1 Sục khí, ống trắng, có TK trong, vàng 95.6 2 Sục khí, ống trắng, không TK trong, vàng 95.1 3 Sục khí, ống màu, không TK trong, vàng 94.9 4 Sục khí, ống màu, có TK trong, vàng 96.3 5 Không sục khí, ống trắng, không TK trong, vàng 94.6 6 Không sục khí, ống trắng, có TK trong, vàng 95.8 7 Không sục khí, ống màu, không TK trong, vàng 96.5 8 Không sục khí, ống màu, có TK trong, vàng 97.1
2.2.4 Đánh giá một sô chỉ tiêu chất lượng của bột tiêm piroxicam đông khô
a. Khả năng hoà tan trở lại
Mỗi lọ được hoà tan trong Iml nước cất, phải đạt yêu cầu là tan nhanh và hoàn toàn. Dung dịch đó phải ổn định trong ít nhất 48h. Với 4 mẫu thử, các lọ bột đều tan hoàn toàn trong vòng từ 5 - 15 giây. Theo dõi tiếp trong 48 giờ,
các dung dịch pha lại vẫn ổn định về độ trong. Như vậy, chỉ tiêu về khả năng hoà tan trở lại và độ ổn định của dung dịch pha lại đạt yêu cầu đề ra.
b. Hàm lượng dược chất
Nồng độ của dung dịch sau khi hoà tan bột đông khô với lm l nước cất phải đạt 95.0 - 110% hàm lượng ghi trên nhãn.
Định lượng bằng phương pháp đo quang, tiến hành như mục 2.1.3 À đã trình bày. Kết quả được trình bày ở bảng 2.16
Bảng 2.16 - Kết quả định lượng nồng độ piroxicam trong bột đông khô
TT Nồng độ piroxicam (mg/ lọ)
M ẫu 1 M ẫu 2 M ẫu 3 M ẫu 4
1 20.90 21.08 21.51 20.13 2 21.06 19.32 20.25 21.29 3 19.92 20.24 20.42 21.02 4 19.56 18.76 21.09 20.46 5 20.33 20.57 20.64 20.31 Trung bình 20.354 19.994 20.77 20.64 % đạt được 101.7 99.8 103.9 103.2
Kết quả định lượng cho thấy: Cả 4 mẫu bột tiêm piroxicam đông khô đạt yêu cầu về hàm lượng.
c. M ất nước do sấy khô
Tiến hành xác định hàm ẩm theo mục 2.1.3.e. Yêu cầu bột đồng khô có hàm ẩm dưới 2%
Công thức: Hàm ẩ m = ( mr - m s ) X 100% * Ghi chú: - m r : khối lượng lúc trước khi làm khô
- m s: khối lượng sau khi làm khô Kết quả xác định hàm ẩm được trình bảy ở bảng 2.17.
- Mâu 1 và 2 có hàm ẩm thấp - dưới 1 %, trong khi mẫu 3 và 4 có hàm ẩm cao hơn rõ rệt- trên 1%. Tuy nhiên, tất cả các mẫu 1, 2, 3, 4 đều đạt yêu cầu hàm ẩm dưới 2%.
Bảng 2.17 - Hàm ẩm của bột đông khô piroxicam
TT nv(g) m*(g) Hàm ẩm (% ) T rung bình Mãu 1 8.8367 8.8302 0.65 0.61 % 8.9106 8.9044 0.62 8.9942 8.9885 0.57 Mẫu 2 8.8594 8.8535 0.59 0.59 % 9.0429 9.0371 0.58 8.9308 8.9247 0.61 Mẫu 3 8.7818 8.7665 1.53 1.64% 8.8535 8.8368 1.67 9.0627 9.0454 1.73 Mãu 4 8.8923 8.8759 1.64 1.81 % 8.7507 8.7319 1.88 9.0392 9.0200 1.92
Kết quả nghiên cứu bước đầu cho thấy: ngoài thuốc tiêm piroxicam dung dịch còn có thể nghiên cứu bào chế thuốc tiêm piroxicam bột đông khô, hy vọng có độ ổn định cao hơn.
PHẦN 3i kI t l u ậ n v à Dầ XUẤT
3.1 KẾT LUẬN
Do thời gian làm thực nghiêm và điều kiện có hạn nên những kết quả trên chỉ là bước đầu. Tuy nhiên có thể rút ra một số kết luận như sau:
3.1.1 Phương pháp định lượng thuốc tiêm pỉroxicam
Định lượng piroxicam bằng phương pháp đo quang ở bước sóng 353 nm có thể ứng dụng để kiểm nghiệm bán thành phẩm trong quá trình sản xuất và thành phẩm ở những cơ sở chưa có điều kiện trang bị HPLC.
3.1.2 Ảnh hưởng cua dung môi, chất phụ và pH đối với độ tan và độ ổn định của piroxicam trong dung dịch
- Đã sử dụng hỗn hợp một số dung môi đồng tan với nước làm tăng độ tan của piroxicam. Tuy nhiên, vẫn chưa đạt được nồng độ piroxicam 20mg/ml. - Độ tan và độ ổn định của dung dịch tăng lên khi thêm các chất phụ như triethanolamin, acid citric, P-cyclodextrin...
- Dung dịch kém ổn định ở pH dưới 8.2. Độ tan của piroxicam tăng lên khi pH tăng.
3.1.3 Xây dựng công thức thuốc tiêm
Từ kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố đã khảo sát đến độ tan và độ ổn định của thuốc tiêm piroxicam dung môi nước và thuốc tiêm đông khô, chúng tôi đề xuất công thức thuốc tiêm dạng dung dịch có thành phần như sau: Piroxicam 2 g Alcol benzylic 1 ml Triethanolamin 2.5 g Chất phụ A 3.4 g P-cyclodextrin 4 g Natri hydroxid 0.3 g
Acid citric 0.2 g
Nước vđ 100 ml
Trên cơ sở thuốc tiêm dung dịch có thể bào chế dạng bột đông khô 20mg/lọ.
3.2 ĐỂ XUẤT
Cần tiếp tục nghiên cứu độ ổn định của piroxicam trong chế phẩm thuốc tiêm dung dịch và đông khô, từ đó có thể ứng dụng trong thực tế sản xuất.
PHỤ LỤC
Dự THẢO TIÊU CHUẨN c o SỎ Nhóm R
TRƯỜNG ĐẠI HỌC 1 )ƯỢC HÀ NỘI THUỐC TIÊM
P I R O X I C A M lm l = 20mg BỘ MÔN BÀO CHẾ
1. YÊU CẦU KỸ THUẬT
1.1- Công thức điều chế: cho 1 đơn vị thành phẩm
Piroxicam Hai mươi miligam 20mg
Tá dược vừa đủ 1 ml
(Aciđ citric, natri hydroxid, P-cyclodextrin, triethanolamin, alcol benzylic, chất phụ A, 1
cất pha tiêm) 1.2- Nguyên liệu:
- Piroxicam : Đạt tiêu chuẩn BP 2001
- Acid citric: Đạt tiêu chuẩn BP 2001
- Natri hydroxid: Đạt tiêu chuẩn DĐVN III
- P-cyclodextrin: Đạt tiêu chuẩn nhà sản xuất
- Triethanolamin: Đạt tiêu chuẩn DĐ Trung Quốc 1997
- Alcol benzylic: Đạt tiêu chuẩn BP 2001
- Chất phụ A: Đạt tiêu chuẩn nhà sản xuất
- Nước cất pha tiêm : Đạt tiêu chuẩn DĐVN III
1.3- Chất lượng thành phẩm:
1.3.1. Tính chất:
Dune, dịch trone, màu vàng.
1.3.2. Độ troníỊ:
Thuốc phải trong và không có các tiểu phân khi quan sát bằng mắt thường.
1.3.3- Thể tích:
1.3.5- Định tính:
Chế phẩm phải cho các phép thử định tính của piroxicam .
1.3.6- Định lượng:
Hàm lượng piroxicam (C 15H ]3N 30 4 S) phải từ 95,0 % - 110,0% so với lượng ghi trên
nhãn.
1.3.7. Độ vô khuẩn:
Thuốc phải vô khuẩn.
2. PHƯƠNG PHÁP THỬ
2.1. Tính chất: Bằng cảm quan, chế phẩm phải đạt các yêu cầu đã nêu.
2.2. Độ trong:
Soi 10 ống tiêm bằng mắt thường dưới đèn 40 w , thuốc đạt yêu cầu nếu cả 10 ốngđều trong và
không có các tiểu phân. Nếu có 1 đơn vị không đạt, phải thử lại với lượng mẫu như lần thử 1. Trong 20 ống đem thử, phải có ít nhất 18 ống đạt yêu cầu.
2.3. Thể tích: Thử theo DĐVN III -Phụ lục 17, phương pháp 1.
2.4. pH: Thử theo DĐVN III - Phụ lục 5.9.
2.5. Định tính:
2.5.1. Thuốc thử: Theo DĐVN III:
Methanol(TT)
Acid hydrocloric IM (TT) Cloroform(TT)
Acid acetic khan (TT) Toluen (TT)
Methylen clorid (TT) Pyrid -2- ylamin (TT)
2.5.2. Tiến hành
a/. Lấy 0,5ml chế phẩm, thêm 10ml acid hydrocloric IM và pha loãng đến 100,Oml với methanol (TT). Lấy 10,0ml dung dịch trên, pha loãng tiếp đến 100,Oml với methanol (TT). Đo phổ hấp thụ của dung dịch thu được ở bước sổng 242nm và 334nm. Tỷ số giữa độ hấp thụ ở 334nm và 242nm là từ 2,2 đến 2,5.
b/. Chế phẩm phải cho phổ hấp thụ hồng ngoại phù hợp với phổ của piroxicam đối chiếu. Dùng dung dịch chế phẩm trong cloroform (TT) có nồng độ 5,0%, đo trong cốc 0,lmm. c/. Sắc ký lớp mỏng: Theo DĐVN III.
- Bản mỏng silicaỉỉel G có chứa một chỉ thị huỳnh quang có cường độ tối đa ở 254nm. - Hệ dung môi: Acid acetic khan: Toluen (10 : 90).
- Các dung dịch chấm sắc ký:
+ Dung dịch (1): Lấy 3ml chế phẩm thử bốc hơi đến khồ. Hoà tan cắn trong lml mythelen clorid (TT).
+ Dung dịch (2): Lấy lm l dung dịch (1) pha loãng thành 20ml với methylen cloird (TT).
+ Dung dịch (3): hoà tan 60,0mg piroxicam chuẩn trong methylen clorid (TT) và pha loãng đến 20ml với cùng dung môi.
+ Dung dịch (4): Pha loãng 2ml dung dịch (3) thành 50ml với methylen clorid