Từ các mẫu được thu thập ở 3 tỉnh: An Giang, Cần Thơ và Tiền Giang, được phân lập và tách ròng xác định được 9 chủng nấm Colletotrichum spp. gây bệnh thán thư trên gấc (bảng 3.1)
Bảng 3.1: Các chủng nấm được phân lập từ 3 tỉnh An Giang, Cần Thơ và Tiền Giang
Ở ngoài đồng bệnh thán thư xuất hiện cả trên trái và trên lá, xuất hiện rất nhiều vào mùa mưa khi trời nóng có ẩm độ cao. Tại những vườn thu mẫu, do không được cắt tỉa thường xuyên, xung quanh không được thông thoáng nên bệnh xuất hiện rất nhiều. Vết bệnh ngoài đồng hơi lõm, có hình tròn trên lá và bất định trên trái do bị giới hạn bởi gai trái. Vết bệnh khi mới xuất hiện có màu vàng nhạt tâm nâu xám sau chuyển dần sang nâu có tâm sáng và vòng tròn đồng tâm, vết bệnh lớn dần liên kết làm cháy lá. Trên trái bệnh chỉ xuất hiện ở những trái già gần chín (Hình 3.1)
STT Chủng
nấm
Ví trí phân
lập Địa điểm thu mẫu
1 Col-CT1 Lá Long Hưng - Ô môn – Cần Thơ 2 Col-CT2 Lá Long Tuyền – Bình Thủy – Cần Thơ 3 Col-CT3 Lá Long Hưng - Ô môn – Cần Thơ 4 Col-TG1 Trái Bình Trưng - Châu Thành-Tiền Giang 5 Col-TG2 Trái Mỹ Phong – Mỹ Tho – Tiền Giang 6 Col-AG1 Lá Tà Lọt – Tri Tôn – An Giang 7 Col-AG2 Trái Tà Lọt – Tri Tôn – An Giang 8 Col-AG3 Lá An Cư – Tri Tôn – An Giang 9 Col-AG4 Trái An Cư – Tri Tôn – An Giang
20
Hình 3.1: Vết bệnh thán thư ngoài đồng trên trái (A) và lá gấc (B)
3.2 Khả năng gây bệnh thán thư trên gấc của 9 chủng nấm Colletotrichum spp.
Qua kết quả bảng 3.2, cho thấy khả năng gây bệnh của 9 chủng nấm
Colletotrichum spp. gây bệnh thán thư trên gấc qua 5, 7, 11 và 15 ngày sau khi chủng bệnh (NSKLB)
Nhìn chung phần trăm diện tích vết bệnh tăng dần ở 5, 7, 11 và 15 NSKLB ở tất cả các chủng nấm. Trong đó chủng Col-CT3 là chủng xuất hiện bệnh sớm và gây hại nặng nhất.
Ở 5NSKLB chỉ có 4 chủng nấm là bắt đầu biểu hiện bệnh là Col-CT1, Col- CT3, Col-AG3 và Col-AG4 tuy nhiên trong đó chủng Col-CT3 gây hại nặng nhất với 13,8% phần trăm diện tích lá bệnh. (Hình 3.2)
Ở 7NSKLB chủng Col-TG2 và Col-AG2 vẫn chưa xuất hiên bệnh trong khi các chủng khác đã gây bệnh. Chủng Col-CT3 vẫn là chủng gây hại nặng nhất với 18,8%.
Ở 11NSKLB tất cả chủng nấm đều biểu hiện bệnh tuy nhiên là rất ít, chỉ có 3 chủng là nhiễm nặng Col-AG3 (26,3%), Col-AG4 (25%) và gây hại nặng nhất có khác biệt là chủng Col-CT3 với (36,3%)
Ở 15NSKLB chủng Col-CT3 cho thấy khả năng gây bệnh nặng hơn so với các chủng còn lại với 56,3%, trong khi đó chủng Col-AG3 và Col-AG4 lượt là 35% và 36,3%
21
Tóm lại, trong 9 chủng nấm Colletotrichum spp. thì chủng Col-CT3 gây bệnh sớm ở 5NSKLB tăng đều qua các ngày đến 15NSKLB với 56,3% là chủng gây hại nặng nhất so với các chủng còn lại. Vì vậy chủng Colletotrichum sp. CT3 được chọn dùng trong các thí nghiệm sau.
Ở 5NSKLB bệnh bắt đầu xuất hiện, vết bệnh có hình tròn hoặc bất định, là một vùng màu vàng nhạt, có tâm ở giữa màu xám đến nâu xám. Ở các ngày tiếp theo, vết bệnh lớn dần ra, các vòng tròn đồng tâm xuất hiện, tâm vết bệnh trở nên nhạt màu. (Hình 3.2)
Bảng 3.2: Phần trăm diện tích lá bệnh vào 5, 7, 11 và 15NSLB nấm Colletotrichum spp.
Ghi chú: Các số trung bình cùng một cột theo sau bởi một hoặc những chử cái giống nhau thì không khác biệt ở mức ý nghĩa 5% bằng phép thử Ducan
*: Khác biệt mức ý nghĩa 5% Chủng nấm Phần trăm diện tích lá bệnh (%) 5NSKLB 7NSKLB 11NSKLB 15NSKLB Col-CT1 5,0 b 8,8 cd 13,8 c 18,8 c Col-CT2 0,0 c 5,0 de 6,3 d 12,5 c Col-CT3 13,8 a 18,8 a 36,3 a 56,3 a Col-TG1 0,0 c 5,0 de 6,3 d 17,5 c Col-TG2 0,0 c 0,0 e 5,0 d 10,0 c Col-AG1 0,0 c 5,0 de 13,8 c 28,8 b Col-AG2 0,0 c 0,0 e 5,0 d 16,3 c Col-AG3 5,0 b 11,3 bc 26,3 b 35,0 b Col-AG4 5,0 b 13,8 b 25,0 b 36,3 b Mức ý nghĩa (%) * * * * CV (%) 26,09 42,55 31,18 21,76
22
23
* Đặc điểm hình thái của chủng Colletotrichum sp. CT3.
Nấm Colletotrichum sp. CT3 có sợi nấm màu trắng đến hồng nhạt. Bào tử hình bầu dục hoặc hình trụ hai đầu tròn, màu sáng hồng đến tím hồng, đơn bào, kích thước 10 – 17.5 x 3.5 – 5 µm. Đĩa áp xuất hiện sau 5-6 ngày khi bắt đầu nuôi cấy trên lam, đĩa áp có dạng hình chùy, bầu dục hơi tròn hoặc bất dạng, màu nâu đến nâu đen, kích thước 9 – 15 x 5 - 12.5 µm. Chưa thấy xuất hiện gai cứng. (Hình 3.3)
Hình 3.3 Đĩa áp (A) và bào tử (B) của nấm Colletotrichum sp. CT3 quan sát ở vật kính 40
3.3 Hiệu quả phòng trị của 10 loại thuốc trừ nấm lên sự phát triển của chủng nấm Colletotrichum sp. CT3 trong điều kiện in vitro chủng nấm Colletotrichum sp. CT3 trong điều kiện in vitro
Qua kết quả bảng 3.3 và bảng 3.4 cho thấy khả năng phòng trị của 10 loại thuốc
Colletotrichum sp. CT3 gây bệnh thán thư trên gấc Khi so sánh 10 loại thuốc trừ bệnh với nhau:
* Về bán kính vòng vô khuẩn (BKVVK)
Kết quả ở bảng 3.3 cho thấy, các thời điểm 2, 4, 6 ngày sau khi thí nghiệm (NSKTN) chỉ có 2 loại thuốc thể hiện khả năng ức chế khuẩn ty cao là Topsin M và Score. Trong 8 loại thuốc còn lại có 6 loại thuốc có khả năng phòng trị tương đối đó là AntraCol, Amistar, Champion, Anvil, Dithane và Daconil. Còn Alipne và Kasumin không có ảnh hưởng lẫn hiệu quả với nấm Colletotrichum sp. CT3.
Ở thời điểm 2NSKTN Topsin M và Score 250EC là 2 loại thuốc có khả năng đối kháng tốt nhất với vòng vô khuẩn rõ rệt lần lượt là 12 mm và 9,8 mm. 8 loại thuốc còn lại được ghi nhận là có đối kháng với nấm Colletotrichum sp. CT3. Trong đó Amistar và Dithane cũng có BKVVK tương đối cao với 7,6 mm. Alpine và Kasumin chưa thấy xuất hiện vòng vô khuẩn.
Ở 4NSKTN mặc dùcó giảm nhưng vòng vô khuẩn của thuốc Score 250EC vẫn còn rõ rệt với 7,6 mm, riêng thuốc Topsin M BKVVK vẫn duy trì rõ rệt hầu như
24
không thay đổi với 13,2 mm. Trong khi đó 7 loại thuốc còn lại có BKVVK giảm hoặc biến mất
Ở 6NSKTN Topsin M cho thấy khả năng vượt trội khi BKVVK hầu như không thay đổi với 12,9 mm; Score 250EC có giảm nhưng vẫn còn rõ với 5 mm và 8 loại thuốc còn lại vòng vô khuẩn biến mất hoàn toàn
Qua khảo sát cho thấy trong 10 loại thuốc thì Topsin M có khả năng ức chế tốt nhất, cho hiệu quả ngay từ đâu và kéo dài với bán kính vòng vô khuẩn là 12 mm; 13,2 mm; 12,9 mm tương ứng với 2, 4, 6 NSKTN. Sau đó là thuốc Score 250EC cũng có khả năng ức chế tốt nấm Colletotrichum sp. CT3 với BKVVK lần lượt là 9,8 mm; 7,6 mm; 5 mm tương ứng với 2, 4, 6 NSKTN. Các loại thuốc khác có BKVVK ở 2NSKTN giảm dần và biến mất ở 4 và 6NSKTN.
Ở nghiệm thức thuốc Topsin M, BKVVK xuất hiện ở 2NSKTN và hầu như giữ nguyên không thay đổi cho đến 6NSKTN, qua quan sát từng ngày sợi nấm hầu như không phát triển thêm kể từ 2NSKTN ở rìa khuẩn ty có vành đen có thể do sợi nấm chết tạo nên (Hình 3.4 và 3.5)
Bảng 3.3: BKVVK của 10 loại thuốc đối với nấm Colletotrichum spp. ở các thời điểm 2, 4, 6 ngày sau khi thí nghiệm
Ghi chú: Các số trung bình cùng một cột theo sau bởi một hoặc những chử cái giống nhau thì không khác biệt ở mức ý nghĩa 5% bằng phép thử Ducan
*: Khác biệt mức ý nghĩa 5%
* Về hiệu quả ức chế (HQƯC)
STT Thuốc BKVVK (mm) 2NSKTN 4NSKTN 6NSKTN 1 Antracol 5,6 de 0,0 d 0,0 c 2 Amisar 7,6 c 2,3 c 0,0 c 3 Champion 6,6 cd 0,0 d 0,0 c 4 Topsin M 12,0 a 13,2 a 12,9 a 5 Anvil 6,8 cd 0,9 d 0,0 c 6 Dithane 7,6 c 0,0 d 0,0 c 7 Score 250EC 9,8 b 7,6 b 5,0 b 8 Daconil 4,6 e 0,0 d 0,0 c 9 Alpine 0,0 f 0,0 d 0,0 c 10 Kasumin 0,0 f 0,0 d 0,0 c Mức ý nghĩa (%) * * * CV (%) 16,83 30,90 28,21
25
Qua bảng 3.4, nhìn chung 10 loại thuốc hóa học có hiệu quả phòng trị đối với nấm Col-CT3, tuy nhiên có chệnh lệch khá cao giữa các loại thuốc. Có hiệu suất đối kháng cao và tốt nhất lần lượt là Topsin M, Score 250EC với hiệu suất tăng liên tục qua 2, 4, và 6NSKTN. 7 Loại thuốc còn lại có HQƯC tăng từ ngày 2 đến ngày thứ 4, tuy nhiên lại giảm khi qua ngày thứ 6, trong đó 2 loại thuốc là Alpine và Kasumin có HQƯC rất thấp, gần như không hiệu quả.
Ở 2NSKTN, một số loại thuốc bắt đầu cho hiệu quả phòng trị nhưng tương đối ít, riêng 2 loại thuốc là Topsin M và Score 250EC là có hiệu suất đối kháng tốt nhất với lần lượt là 34,29% và 21,16%. Các loại thuốc còn lại cho hiệu quả phòng trị chỉ ở mức tương đối, riêng với 3 loại thuốc Daconil, Alpine và Kasumin thì hiệu quả rất ít, hầu như không có tác động đến sự sinh trưởng của nấm.
Ở 4NSKTN, Topsin M và Score 250EC vẫn cho thấy có hiệu quả vượt trội so với các loại thuốc còn lại khi tiếp tục dẫn đầu với HQƯC cao lần lượt là 54,14% và 38,93%. HQƯC của 10 loại thuốc đều tăng tương đối nhiều, cho thấy hiệu quả của các loại thuốc hóa học, tuy nhiên trong đó 2 loại thuốc Alpine và Kasumin có hiệu quả còn thấp. Một số loại thuốc còn lại cho hiệu quả tương đối tốt Antracol (20,31%), Amistar (25,82%), Champion (21,28%), Anvil 5SC (21,3%).
Ở 6NSKTN Topsin M và Score 250EC vẫn có hiệu quả tốt nhất trong 10 loại thuốc với 60,21% (Topsin M) và 40,97% (Score). Hiệu quả của một số loại thuốc bắt đầu giảm như Champion và Anvil 5SC với 21,28% và 21,3% (4NSKTN) giảm còn 9,14% và 10,74 %. Alpine và Kasumin không có ảnh hưởng đến sự phát triển của nấm
26
Bảng 3.4: Hiệu quả ức chế của 10 loại thuốc đối với nấm Colletotrichum spp. ở các thời điểm 2, 4, 6 ngày sau khi thí nghiệm
Ghi chú: Các số trung bình cùng một cột theo sau bởi một hoặc những chử cái giống nhau thì không khác biệt ở mức ý nghĩa 5% bằng phép thử Ducan
*: Khác biệt mức ý nghĩa 5%
Bảng 3.4 cho thấy khả năng phòng trị của các loại thuốc đối với nấm
Colletotrichum sp. CT3 thể hiện ở mức độ khác nhau. Nhìn chung HQƯC tăng dần đạt cao nhất vào 4NSKTN (Hình 3.4) và giảm dần sau đó, tuy nhiên riêng 2 loại với thuốc Topsin M và Score 250EC có HQƯC cao hơn hẳn các loại thuốc khác, HQƯC tăng dần qua các ngày và vẫn duy trì hiệu quả phòng trị đến 6NSKTN (Hình 3.5)
Thuốc Score 250EC có hiệu quả ức chế bệnh tốt ở điều kiện phòng thí nghiệm
và nhà lưới tương đồng với kết quả của Lê Ngọc Trúc Linh (2013) trong nghiên cứu
hiệu quả phòng trị của một số loại thuốc hóa học đối với bệnh thán thư trên hành do
nấm Colletotrichum spp. gây ra và kết quả này cũng phù hợp với kết quả trong
nghiên cứu của Nguyễn Quốc Khánh (2011) khi thử nghiệm khả năng ức chế của 7
loại thuốc hóa học đối bệnh thán thư trên ớt, cho thấy Score 250EC là thuốc tốt nhất
trong thí nghiệm này.
STT Thuốc HQƯC (%) 2NSKTN 4NSKTN 6NSKTN 1 Antracol 8,38 d 20,31 de 13,14 e 2 Amistar 15,80 c 25,82 c 18,88 d 3 Champion 11,19 d 21,28 d 9,14 fg 4 Topsin M 34,29 a 54,14 a 60,21 a 5 Anvil 12,17 d 21,30 d 10,74 ef 6 Dithane 9,87 d 17,23 e 6,61 g 7 Score 250EC 21,16 b 38,93 b 40,97 b 8 Daconil 4,36 e 19,07 de 29,27 c 9 Alpine 2,53 e 8,35 f 1,92 h 10 Kasumin 2,18 e 5,83 f 1,49 h Mức ý nghĩa (%) * * * CV (%) 22,78 11,73 14,36
27
Tóm lại, qua thí nghiệm dựa vào BKVVK và HQƯC đối với chủng nấm
Colletotrichum sp. CT3 ghi nhận được 2 loại thuốc có khả năng ức chế sự phát triển của nấm là Topsin M và Score. Do đó Topsin M và Score 250EC được chọn dùng cho thí nghiệm sau
Hình 3.4: Khả năng ức chế của 2 loại thuốc Topsin M và Score 250EC lên sự phát triển của nấm Colletotrichum sp. CT3 ở thời điểm 4NSKTN
Hình 3.5: Khả năng ức chế sự phát triển của nấm Colletotrichum sp. CT3 của 2 loại thuốc Topsin M và Score 250EC ở thời điểm 6NSKTN.
28
3.4 Hiệu quả phòng trị của 2 loại thuốc Topsin M và Score 250EC lên sự phát triển của nấm Colletotrichum sp. CT3 trong điều kiện nhà lưới phát triển của nấm Colletotrichum sp. CT3 trong điều kiện nhà lưới
Dựa vào kết quả ghi nhận ở bảng 3.5 ta thấy 2 loại thuốc Topsin M và Score 250EC đều cho hiệu quả khác biệt so với đối chứng, trong đó thuốc Topsin M cho hiệu quả rất tốt, có khác biệt với Score.
Ở 2NSKLB Topsin M và Score 250EC đều cho hiệu quả tốt với . Trong đó Topsin M có hiệu quả tốt khác biệt có ý nghĩa với 8 mm so với Score 250EC là 9,93 mm và Score 250EC cũng cho hiệu quả khác biệt với đối chứng
Ở 4NSKLB thuốc Topsin M vẫn tiếp tục ức nấm rất tốt, vết bệnh dần khô lại và hầu như không lớn thêm với 7,86mm; Score 250EC ức chế vết bệnh tương đối tốt, 10.97 mm khác biệt so với đối chứng là 25.18 mm.
Ở 6NSKLB thuốc Topsin M hầu như hoàn toàn khống chế được nấm
Colletotrichum sp. CT3, vết bệnh không lớn thêm, khô ráo; thuốc Score 250EC vẫn chỉ ức chế bệnh ở mức tương đối tốt với 17.67 mm so với đối chứng là 43.28 mm và so với Topsin M là lớn hơn 7.84 mm. (Hình 3.6)
Bảng 3.5 Hiệu quả của 2 loại thuốc lên đường kính vết bệnh thán thư trên gấc do nấm
Colletotrichum sp. CT3 gây ra ở thời điểm 2, 4, 6 NSKLB
Ghi chú: Các số trung bình cùng một cột theo sau bởi một hoặc những chử cái giống nhau thì không khác biệt ở mức ý nghĩa 5% bằng phép thử Ducan
*: Khác biệt mức ý nghĩa 5%
Thuốc Score 250EC cho hiệu quả tốt ở 2NSKLB và giảm dần về sau, điều này phù hợp với kết quả của Lê Ngọc Trúc Linh (2013) trong nghiên cứu hiệu quả phòng trừ của thuốc Score 250EC đối với bệnh thán thư trên ớt trong điều kiện nhà lưới ở nghiệm thức phun sau; điều này cũng có thể phù hợp với kết quả nghiên cứu của Phùng Vĩnh Lộc (2010) trong nghiên cứu hiệu quả phòng trừ của hoạt chất difenoconazole đối với bệnh thán thư trên hoa hồng ở nhà lưới; trong nghiên cứu của Nguyễn Quốc Khánh (2011) cũng cho thấy Score 250EC là thuốc hiệu quả trong việc phòng trừ bệnh thán thư trên ớt trong điều kiện nhà lưới.
Thuốc Đường kính vết bệnh (mm) 2NSKLB 4NSKLB 6NSKLB Topsin M 8,00 c 7,86 c 9,93 c Score 9,93 b 10,97 b 17,67 b Đối chứng 11,93 a 25,18 a 43,28 a Mức ý nghĩa (%) * * * CV (%) 10.19 9.6 5.43
29
Hình 3.6: Hiệu quả của 2 loại thuốc lên đường kính vết bệnh thán thư trên gấc do nấm
Colletotrichum sp. CT3 gây ra ở thời điểm 4NSKLB
Tóm lại thuốc Topsin M có hiệu quả phòng trừ cao đối với nấm Colletotrichum
sp. CT3, thuốc có khả năng ức chế bệnh ngay từ ban đầu giai đoạn bệnh mới phát sinh, có thể giết chết nấm bệnh làm vết bệnh không phát triển và cho hiệu quả kéo dài. Trong khi đó, thuốc Score 250ECchỉ cho hiệu quả ức chế bệnh tương đối tốt, không giết chết được mầm bệnh, vết bệnh vẫn lớn dần thêm sau 2, 4 và 6 NSKLB.
30
Thuốc Score 250 EC với hoạt chất difenoconazole có trong thuốc đã kìm hãm quá trình sinh tổng hợp ergosterol, ngăn cản quá trình hình thành đĩa bám, sự sinh trưởng và phát triển của sợi nấm (Nguyễn Trần Oánh, 1999). Thuốc Topsin M 70%w/w với hoạt chất thiophanate methyl, là thuốc trừ nấm tiếp xúc và nội hấp,
