2. 2M ts nguyên nhân gây tiêu c hy heo con
3.3.1 Ph ng pháp ly mu
u phân: Ti n hành o pH phân r i dùng bông gòn có t m c n 700 sát trùng vùng h u môn c a heo sau ó dùng t m bông vô trùng ngoáy vào tr c tràng, xoay t m bông th m t phân heo. a m u phân v a l y vào ngay trong ng nghi m vô trùng có ch a môi tr ng chuyên ch , dùng l a h ph n thân que t m bông tr c khi cho vào ng nghi m.
u n n chu ng: Dùng t m bông quét lên n n chu ng n i không dính phân, t n n khô ráo ch a d i r a r i a vào ng nghi m.
u n c: L y ngay t i vòi u ng trong chu ng n i ã l y m u phân. Tr c khi l y ph i x b m t ít tr c khi h ng cho vào túi nylon (kho ng 1 lít), c t ch t.
Ghi ký hi u theo t ng lo i m u, b o qu n m u u ki n l nh (4 - 80C) r i a v phòng thí nghi m phân tích vi sinh.
Hình 3.1: o pH phân heo con tiêu ch y
Hình 3.2: L y m u phân heo con tiêu ch y
3.3.2 Ph ng pháp phân l p vi khu nE. coli
u phân c ria c y tr c ti p trên a th ch ch a môi tr ng MC, em 370C trong 24 gi . Sau ó ch n kho ng 10 khu n l c n hình, ti p t c ria c y trên th ch môi tr ng MC em 370C trong 24 gi làm thu n vi khu n. Khu n l c c c y sang môi tr ng NA (ho c TSA) ki m tra c tính sinh hóa. Cu i cùng khu n l c vi khu n c gi gi ng, nh ch ng và làm kháng sinh .
u phân (t m bông)
MC
Làm thu n trên MC
NA
Ki m tra c tính sinh hóa
E. coli d ng tính NA 37oC/24h 37oC/24h 37oC/24h 37oC/24h 37oC/24h Gi gi ng MHA nh ch ng K88 K99 987P Kháng sinh
nh danh vi khu nE. coli b ng ph n ng sinh hóa
ng 3.1: Các ph n ng sinh hóa nh danh vi khu nE. coli (Barlows, 1975)
KIA Vi khu n
Glucose Lactose H2S Gas Indole MR VP Citrate
E. coli + + - + + + - -
Enterobacter + + - + - - + +
Citrobacter + + - + - + - +
Klebsiella +h +h - + - - + +
KIA: Kligler Iron Agar MR: Methyl Red VP: Voges-Prokauer (+h ): men có sinh h i
Môi tr ng KIA: l y vi khu n t môi tr ng NA c y vào ng nghi m ch a th ch nghiêng KIA, 370C trong 24 gi . K t qu : E. coli lên men ng lactose, glucose và có sinh h i.
Ph n ng ki m tra tính sinh Indole: l y m t l ng nh vi khu n t môi tr ng NA vào ng nghi m có ch a môi tr ng peptone, 370C trong 24 gi . Nh vào môi tr ng nuôi c y vài gi t thu c th Kowacs. K t qu là E. coli cho ph n ng d ng tính, trên b m t môi tr ng xu t hi n 1 l p màu .
Ph n ng Methyl - Red (MR) và Voges - Proskauer (VP): dùng que c y, c y t l ng nh vi khu n t môi tr ng NA vào ng nghi m ch a MR - VP r i 370C trong 24 gi . Thêm vài gi t thu c th Methyl Red, E. coli cho ph n ng MR duong tính, môi tr ng có màu . V i ph n ng VP, nh vào môi tr ng nuôi c y vài gi t thu c th VP1, sau ó nh vài gi t VP2, yên trong vài phút.E. coli cho ph n ng ân tính, b m t môi tr ng không màu.
Ph n ng Citrate: t môi tr ng NA, l y m t ít vi khu n c y vào ng nghi m ch a th ch nghiêng Simmon’s Citrate, 370C trong 24 gi . E. coli cho ph n
3.3.3 Ph ng pháp nh danh các ch ng vi khu n E. coli b ng ph n ngng ng k t nhanh trên phi n kính ng ng k t nhanh trên phi n kính
Vi khu nE. coli sau khi c xác nh b ng ph n ng sinh hóa s c nh ch ng kháng nguyên K b ng ph n ng ng ng k t nhanh trên phi n kính. Các ch ng kh o sát bao g m K88, K99, 987P.
Ph ng pháp ti n hành: trên phi n kính, nh m t gi t kháng huy t thanh t u, u kia nh m t gi t n c mu i sinh lý i ch ng. Dùng que c y y vi khu n t khu n l c c a m u c n ki m tra, hòa vào gi t kháng huy t thanh và gi t n c mu i sinh lý, l c tr n nh nhàng và c k t qu sau 30 giây
n 15 phút.
u d ng tính (+): xu t hi n nh ng h t ng ng k t gi t ch a kháng th mà không ng ng k t gi t i ch ng.
u âm tính (+): không xu t hi n ng ng k t.
Hình 3.4: Ph ng pháp nh danh ch ng vi khu nE. coli ng ph n ng ng k t nhanh trên phi n kính
NaCl 0,9% Kháng th ch ngE. coli K88, K99, 987P Không ng ng k t (âm tính) Ng ng k t (d ng tính) Ch ng vi khu nE. coli
3.3.4 Ph ng pháp ki m tra tính nh y c m i v i kháng sinh c a vikhu nE. coli phân l p c khu nE. coli phân l p c
Cách ch n kháng sinh
Vi c l a ch n kháng sinh s d ng ki m tra tính nh y c m c aE. coli c a vào:
Phác u tr b nh tiêu ch y cho heo con các tr i ch n nuôi.
Các quy trình chu n th c hi n ang áp d ng trên th gi i v th nghi m tính nh y c m kháng sinh Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI, 2011).
Chu n b canh khu n
Vi khu n sau khi c nh danh qua ph n ng sinh hóa, c ria c y trên a th ch môi tr ng NA r i cho vào t m 370C trong 24 gi . Sau ó, dùng que c y l y m t l ng nh t khu n l c vi khu n a vào ng nghi m có ch a 2ml dung d ch n c mu i sinh lý 0,9% ã c vô trùng, l c u.
Quan sát b ng m t, so sánh c c a canh khu n trong ng nghi m v i c c a ng nghi m ch a dung d ch chu n Mac Farland 0,5 (108cfu/ml) cho n khi t ng ng nhau.
Ph ng pháp th c hi n kháng sinh
d ng ph ng pháp khu ch tán trên a th ch c a Kirby Bauer. Dùng que m bông vô trùng nhúng vào canh khu n ã chu n b , dàn u vi khu n lên trên a th ch môi tr ng Mueller Hinton Agar (MHA). Ch cho m t th ch khô r i dùng k p vô trùng g p các a gi y t m kháng sinh c n ki m tra lên trên m t th ch, m i a kháng sinh t cách nhau 2,5 - 3 cm và cách thành a petri 2 - 2,5 cm, th ch trong a ph i có dày 3,5 - 4 mm không làm sai ch k t qu . Sau ó cho a th ch ã t kháng sinh vào t m 370C trong 24 gi r i l y ra c k t qu (Hình 3.5).
c k t qu kháng sinh
Vi c c k t qu kháng sinh c th c hi n b ng cách o ng kính vòng vô khu n r i em so sánh v i b ng tiêu chu n Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2011).
ng 3.2: B ng tiêu ng kính vòng vô khu n c a m t s lo i kháng sinh (CLSI, 2011) ng kính vòng vô khu n (mm) Tên kháng sinh Ký hi u Hàm l ng kháng sinh (µg) Kháng ) Trung bình Nh y ) Ceftazidime Norfloxacin Amoxicilin/clavulanic acid Gentamicin Colistin Bactrim Ampicillin Cz Nr Ac Ge Co Bt Am 30 30 10 10 10 10 25 17 12 13 12 11 10 13 18-20 13-16 14-17 13-14 12-16 11-15 14-16 21 17 18 15 17 16 17
3.3.5 Ph ng pháp b trí thí nghi m u tr b nh tiêu ch y nghi do E. coli gây ra trên heo con
a vào k t qu ki m tra tính nh y c m i v i kháng sinh c a các ch ng vi khu nE. coli phân l p c và m t s phác u tr b nh tiêu ch y cho heo con t i các tr i ch n nuôi heo thu c thành ph C n Th . Chúng tôi ch n ra t s b y heo con có bi u hi n tiêu ch y nghi doE. coli gây ra, heo con b nh ph i t ng ng ngày tu i, tr ng l ng, th tr ng. Heo c xem là kh i nh khi không có bi u hi n tiêu ch y. Trong m i b y chúng tôi ch n ra 4 heo có bi u hi n tiêu ch y c tr ng c a b nh ti n hành u tr theo 2 phác ,
i phác l p l i 4 l n, t ng s heo cho 1 phác u tr là 8 con.
ng 3.3: Phác u tr b nh tiêu ch y nghi doE. coli trên heo con
Phác heo u
tr (con) Tên thu c Li u l ng ng c p
Li u trình
Multibio 1ml/10kgP/ngày IM
I 8 Vime - Subtyl 1g/10kgP/ngày Tr n vào th c
n 3 ngày Electrolyte Pha vào n c
ng
Coli - Norgent 2g/10kgP/ngày PO
II 8 Vime - Subtyl 1g/10kgP/ngày Tr n vào th c
n 3 ngày Electrolyte Pha vào n c
ng
Phác I s d ng thu c Multibio c a công ty Virbac
Phác II s d ng thu c Coli Norgent c a công ty Vemedim IM: Intramuscular injection, H p thu qua ng b p th t PO: Per os, H p thu qua ng tiêu hóa
3.3.6 Ch tiêu theo dõi
l heo con m c b nh tiêu ch y huy n C và Th i Lai, TP. C n Th .
l nhi m E. coli trên phân heo con tiêu ch y theo a m và theo lo i heo con.
l d ng tính c a E. coli trong m u môi tr ng.
t qu nh danh các ch ng E. coli K88, K99, 987P trong phân heo con tiêu ch y theo a m và theo lo i heo con.
t qu nh danh các ch ngE. coli K88, K99, 987P trong m u môi tr ng.
Tính nh y c m c a vi khu nE. coli phân l p c v i m t s lo i kháng sinh.
Hi u qu u tr b nh tiêu ch y heo con c a 2 phác .
3.3.7 Ph ng pháp x lý s li u
li u c phân tích th ng kê v i ph n m m Minitab 14.0 (ph ng pháp Chi - Square Test khi s li u >5) và ph n m m Microsoft office Excel 2003 (ph ng pháp Chi - Square Yates khi s li u <5).
CH NG 4
T QU VÀ TH O LU N
4.1. K t qu kh o sát t l heo con tiêu ch y m t s tr i ch n nuôi heoi thành ph C n Th . i thành ph C n Th .
tài c th c hi n t tháng 08/2013 n tháng 11/2013, ti n hành quan sát th c t trên 2.778 heo con theo m và heo cai s a ánh giá tình hình b nh tiêu ch y trên heo con t i TP. C n Th . K t qu c th hi n qua B ng 4.1.
ng 4.1: K t qu kh o sát t l heo con tiêu ch y m t s tr i ch n nuôi heo i thành ph C n Th
heo con tiêu ch y a m S heo con kh o sát SL (con) TL (%) 1.351 484 35,82 Th i Lai 1.427 436 30,55 (P = 0,003) ng c ng 2.778 920 33,11 Ghi chú: SL: s l ng, TL: t l
t qu B ng 4.1 cho th y t l tiêu ch y trên heo con là khá cao (33,11%), s t l tiêu ch y trên heo con cao nh v y là do th i m ti n hành l y m u là vào mùa m a, các y u t ngo i c nh không thích h p (nhi t th p, m cao) và thay i t ng t tác ng x u n c th heo con, c bi t là heo con theo m . Theo ào Tr ng t (1999), heo con các c quan u ch a thành th c v ch c n ng nh h tiêu hóa, h mi n d ch, c bi t là h th n kinh, do ó ph n ng r t ch m ch p i v i các y u t tác ng lên chúng nên r t d
c b nh. Bên c nh ó, khâu ch m sóc nuôi d ng và v sinh sát trùng chu ng tr i các tr i ch n nuôi c ng nh h ng m nh m n t l tiêu ch y trên heo con. Vi c m ch a t t, n n chu ng m t d n n heo b nhi m nh, suy gi m s c kháng và kh n ng tiêu hóa c a heo con gây tiêu ch y. t qu nghiên c u này t ng ng v i nghiên c u c a Lê Th Hoài (2008) và Nguy n V n Ngh a (2011), v i t l heo con tiêu ch y t i H ng Yên và n Th l n l t là 30,30% và 34,32%. Nh ng theo nghiên c u c a Nguy n
Th Kim B y (2012), khi kh o sát t l heo con tiêu ch y t i Sóc Tr ng và B n Tre thì t l heo con tiêu ch y chi m 22,91%. S khác bi t này có th là do th i m u tra khác nhau, a m và ph ng th c ch n nuôi c a t ng n i
ng khác nhau.
t qu B ng 4.1 c ng cho th y t l heo con tiêu ch y huy n Th i Lai là 30,55%, th p h n so v i huy n C có t l là 35,82%, s khác nhau này t có ý ngh a th ng kê (P < 0,01). u này có th là do khâu ch m sóc heo lúc m i sinh ra t i các tr i ch n nuôi huy n C ch a t t, heo con m i sinh ra không c úm ho c n u có thì úm c ng s sài không m b o ch c ng m cho heo con. M t khác, c s h t ng trong ch n nuôi huy n này ng xu ng c p do qua s d ng lâu n m mà không c s a ch a nên vào mùa m a gió lùa, m th p, n c ng n n chu ng làm cho heo con suy gi m c kháng và t l b nh tiêu ch y t ó c ng gia t ng (Hình 4.1). Trong khi ó, quá trình kh o sát và l y m u t i Th i Lai cho th y t i huy n này a ph n các h gia ình và tr i ch n nuôi có c s h t ng ph c v ch n nuôi t t h n, chu ng tr i c ng còn khá m i, m b o v sinh và thông thoáng h n (Hình 4.2).
4.2 t qu phân l p vi khu n E. coli trên phân heo con tiêu ch y t i
huy n C và Th i Lai, thành ph C n Th
920 heo con tiêu ch y kh o sát hai huy n C và Th i Lai, thu th p c 61 m u phân heo con tiêu ch y nghi ng do vi khu n E. coli gây ra. K t qu phân l p c th hi n qua B ng 4.2.
ng 4.2: K t qu phân l p vi khu n E. coli trên phân heo con tiêu ch y t i huy n C và Th i Lai, thành ph C n Th E. coli d ng tính a m m u phân l p l ng (m u) l (%) 31 31 100 Th i Lai 30 30 100 ng c ng 61 61 100
ng 4.2 cho th y, k t qu phân l p t 61 m u phân heo con tiêu ch y nghi do
E. coli thì có n 61/61 m u d ng tính v i vi khu n E. coli, chi m t l cao
nh t (100%). T l nhi mE. coli cao nh v y có th là do vi khu n này có s n trong ng ru t c a heo con, g p u ki n thu n l i phát tri n nhân lên v i l ng l n, chi m t l áp o các vi khu n ng ru t khác. Theo L u H u Mãnh (2009), ây là lo i vi khu n khu trú th ng xuyên trong ng tiêu hóa a ng i và ng v t, xu t hi n s m (sau khi sinh kho ng 2 gi ), chúng th ng ph n sau c a ru t và là nguyên nhân gây ra m t s b nh ng i và gia súc. Heo con b b nh còn có th là do nhi m E. coli t bên ngoài môi tr ng, t vú m khi bú, k t h p v i vi c s c kháng c a heo con b gi m sút do th i ti t thay i t ng t, có m a t t gió lùa, n n chu ng m t, lúc
nàyE. coli s tr nên c ng c và tác ng gây b nh (Lê V n T o, 2006).
Có th ch n oán phân bi t d a vào pH c a phân heo con tiêu ch y, d ch tiêu ch y do ETEC gây ra th ng có pH ki m, trong khi ó n u b nh tiêu ch y do h p thu kém hay do virus gây ra thì phân có pH acid (Fairbrother, 1992). Do ó, khâu xác nh và ti n hành o pH c a phân heo con tiêu ch y (Hình 4.3) tr c khi l y m u c ng là m t trong nh ng y u t làm cho t
phân l p c vi khu nE. coli trong các m u phân này chi m 100%.
t qu nghiên c u này c ng phù h p v i k t qu nghiên c u c a Lê Th Hoài