2. 2M ts nguyên nhân gây tiêu c hy heo con
2.4.5Sd ng kháng sinh trong ut rb nh tiêu c hy do E.coli gây ra
ch ng b nh E. coli ng là bi n pháp phòng b nh có hi u qu ( ào Tr ng t
và ctv., 1999).
u tr
u tr b nh do E. coli c n ph i t c m c tiêu là c t t E. coli gây b nh, kh c ph c các nh h ng x u và t o u ki n môi tr ng t t. Tr li u nhanh và hi u qu n u có th . K t h p gi a vi c tiêu di t m m b nh E. coli v i vi c
sung n c và dung d ch n gi i ch ng m t n c, nâng cao s c kháng c a con v t trong khi s d ng kháng sinh và hóa d c tiêu di t m m
nh (Fairbrother, 1992).
Dùng các lo i vitamin nâng cao th tr ng và s c kháng c a c th . ch ng m t n c và ch t n gi i c n cho u ng dung d ch glucose ho c pha dung d ch electrolyte vào n c u ng cho heo u ng t do.
2.4.5 S d ng kháng sinh trong u tr b nh tiêu ch y doE. coli gây ra heo con heo con
ã có nhi u tác gi nghiên c u trong và ngoài n c ch ra s nh y c m và kháng c a vi khu n E. coli v i kháng sinh ( c nêu trong m c 2.1). Nh ng trên th c t , vi c s d ng kháng sinh u tr b nh tiêu ch y heo con do
E. coli gây ra v n ang là v n c n ph i c bàn lu n nhi u h n.
Theo Nguy n Nh Pho và Võ Th Trà An (2003), s d ng kháng sinh hi u qu trong u tr c n ph i d a vào nhi u y u t nh l a ch n kháng sinh phù p, d a vào k t qu ch n oán b nh, kh n ng nh y c m c a vi khu n i v i kháng sinh, tác ng d c lý c a lo i kháng sinh ó, c a c a thú… Song song v i nh ng y u t ó, c ng c n ph i k t h p v i nguyên t c li u pháp kháng sinh t c hi u qu t t nh t.
h n ch s kháng c a vi khu n i v i kháng sinh thì không nên s ng kháng sinh có ph r ng ho c kháng sinh th h m i trong khi kháng sinh có ph h p, th h c v n còn hi u qu . Th ng xuyên n m b t thông tin v tình hình d ch t và kh n ng nh y c m c a vi khu n hay ph i h p kháng sinh trong u tr c ng là bi n pháp hi u qu ng n s kháng c a vi khu n v i kháng sinh, c bi t là vi khu nE. coli.
CH NG 3
PH NG TI N VÀ PH NG PHÁP THÍ NGHI M
3.1 Th i gian, a m và i t ng nghiên c u
3.1.1 Th i gian và a m th c hi n
Th i gian th c hi n: t tháng 08/2013 n tháng 11/2013.
a m l y m u: m u c l y t i các h và các tr i ch n nuôi heo t p trung huy n C , huy n Th i Lai thu c thành ph C n Th .
a m phân tích m u: phòng thí nghi m v sinh th c ph m, B môn Thú Y, Khoa Nông Nghi p và Sinh H c ng D ng, Tr ng i H c C n Th .
3.1.2 i t ng nghiên c u
Heo con theo m và heo cai s a b tiêu ch y. ng th i, chúng tôi c ng ti n hành l y các m u môi tr ng nh : n c u ng và n n chu ng t các tr i ch n nuôi thu c thành ph C n Th ki m tra.
3.2 Ph ng ti n nghiên c u
3.2.1 D ng c và trang thi t b thí nghi m
m, t s y, autoclave, microwave, cân n t , máy l c, bu ng c y vô trùng, a petri, ng nghi m, ng ong, que c y, èn c n, t m bông vô trùng, gi y o pH, thùng tr l nh, túi nylon và m t s d ng c khác c a phòng thí nghi m.
3.2.2 Hóa ch t, môi tr ng
Hóa ch t:
n 700, 960, n c c t, NaCl 0,9%.
Các kháng th chu n K88, K99, 987P c cung c p b i Denka Seiken Co., Ltd. Japan.
Thu c th Kowacs, VP1, VP2.
Môi tr ng:
MacConkey Agar (MC), Nutrient Agar (NA), Muller Hinton Agar (MHA) c cung c p b i Merck KgaA, Germany. Nutrient Broth (NB), Kligler Iron Agar (KIA), Methyl - Red (MR), Voges - Proskauer (VP), Simmon’s citrate. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Các a gi y t m kháng sinh s d ng làm kháng sinh : ceftazidime, trimethoprime/sulfamethoxazol, norfloxacin, colistin, gentamicin, ampicillin, amoxicillin/clavulanic acid. (công ty Nam Khoa).
3.2.3 Thu c u tr b nh tiêu ch y cho heo con
Kháng sinh u tr : Multibio thành ph n g m có ampicillin và colistin, c a công ty Virbac. Coli - Norgent thành ph n g m colistin sulfate (12.500.000 IU) + gentamicin sulfate 1g + ch t mang v a 50g là s n ph m c a công ty Vemedim.
Thu c b tr và n gi i: Vime - Subtyl c a công ty Vemedim, thành ph n ch a bacillus subtilis. Vime C - Electrolyte thành ph n g m Vitamin C 10g, sodium chloride, potassium chloride là s n ph m c a công ty Vemedim.
3.3 Ph ng pháp ti n hành thí nghi m
3.3.1 Ph ng pháp l y m u
u phân: Ti n hành o pH phân r i dùng bông gòn có t m c n 700 sát trùng vùng h u môn c a heo sau ó dùng t m bông vô trùng ngoáy vào tr c tràng, xoay t m bông th m t phân heo. a m u phân v a l y vào ngay trong ng nghi m vô trùng có ch a môi tr ng chuyên ch , dùng l a h ph n thân que t m bông tr c khi cho vào ng nghi m.
u n n chu ng: Dùng t m bông quét lên n n chu ng n i không dính phân, t n n khô ráo ch a d i r a r i a vào ng nghi m.
u n c: L y ngay t i vòi u ng trong chu ng n i ã l y m u phân. Tr c khi l y ph i x b m t ít tr c khi h ng cho vào túi nylon (kho ng 1 lít), c t ch t.
Ghi ký hi u theo t ng lo i m u, b o qu n m u u ki n l nh (4 - 80C) r i a v phòng thí nghi m phân tích vi sinh.
Hình 3.1: o pH phân heo con tiêu ch y
Hình 3.2: L y m u phân heo con tiêu ch y
3.3.2 Ph ng pháp phân l p vi khu nE. coli
u phân c ria c y tr c ti p trên a th ch ch a môi tr ng MC, em 370C trong 24 gi . Sau ó ch n kho ng 10 khu n l c n hình, ti p t c ria c y trên th ch môi tr ng MC em 370C trong 24 gi làm thu n vi khu n. Khu n l c c c y sang môi tr ng NA (ho c TSA) ki m tra c tính sinh hóa. Cu i cùng khu n l c vi khu n c gi gi ng, nh ch ng và làm kháng sinh .
u phân (t m bông)
MC
Làm thu n trên MC
NA
Ki m tra c tính sinh hóa
E. coli d ng tính NA 37oC/24h 37oC/24h 37oC/24h 37oC/24h 37oC/24h Gi gi ng MHA nh ch ng K88 K99 987P Kháng sinh
nh danh vi khu nE. coli b ng ph n ng sinh hóa
ng 3.1: Các ph n ng sinh hóa nh danh vi khu nE. coli (Barlows, 1975)
KIA Vi khu n
Glucose Lactose H2S Gas Indole MR VP Citrate
E. coli + + - + + + - -
Enterobacter + + - + - - + +
Citrobacter + + - + - + - +
Klebsiella +h +h - + - - + +
KIA: Kligler Iron Agar MR: Methyl Red VP: Voges-Prokauer (+h ): men có sinh h i
Môi tr ng KIA: l y vi khu n t môi tr ng NA c y vào ng nghi m ch a th ch nghiêng KIA, 370C trong 24 gi . K t qu : E. coli lên men ng lactose, glucose và có sinh h i. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Ph n ng ki m tra tính sinh Indole: l y m t l ng nh vi khu n t môi tr ng NA vào ng nghi m có ch a môi tr ng peptone, 370C trong 24 gi . Nh vào môi tr ng nuôi c y vài gi t thu c th Kowacs. K t qu là E. coli cho ph n ng d ng tính, trên b m t môi tr ng xu t hi n 1 l p màu .
Ph n ng Methyl - Red (MR) và Voges - Proskauer (VP): dùng que c y, c y t l ng nh vi khu n t môi tr ng NA vào ng nghi m ch a MR - VP r i 370C trong 24 gi . Thêm vài gi t thu c th Methyl Red, E. coli cho ph n ng MR duong tính, môi tr ng có màu . V i ph n ng VP, nh vào môi tr ng nuôi c y vài gi t thu c th VP1, sau ó nh vài gi t VP2, yên trong vài phút.E. coli cho ph n ng ân tính, b m t môi tr ng không màu.
Ph n ng Citrate: t môi tr ng NA, l y m t ít vi khu n c y vào ng nghi m ch a th ch nghiêng Simmon’s Citrate, 370C trong 24 gi . E. coli cho ph n
3.3.3 Ph ng pháp nh danh các ch ng vi khu n E. coli b ng ph n ngng ng k t nhanh trên phi n kính ng ng k t nhanh trên phi n kính
Vi khu nE. coli sau khi c xác nh b ng ph n ng sinh hóa s c nh ch ng kháng nguyên K b ng ph n ng ng ng k t nhanh trên phi n kính. Các ch ng kh o sát bao g m K88, K99, 987P.
Ph ng pháp ti n hành: trên phi n kính, nh m t gi t kháng huy t thanh t u, u kia nh m t gi t n c mu i sinh lý i ch ng. Dùng que c y y vi khu n t khu n l c c a m u c n ki m tra, hòa vào gi t kháng huy t thanh và gi t n c mu i sinh lý, l c tr n nh nhàng và c k t qu sau 30 giây
n 15 phút.
u d ng tính (+): xu t hi n nh ng h t ng ng k t gi t ch a kháng th mà không ng ng k t gi t i ch ng.
u âm tính (+): không xu t hi n ng ng k t.
Hình 3.4: Ph ng pháp nh danh ch ng vi khu nE. coli ng ph n ng ng k t nhanh trên phi n kính
NaCl 0,9% Kháng th ch ngE. coli K88, K99, 987P Không ng ng k t (âm tính) Ng ng k t (d ng tính) Ch ng vi khu nE. coli
3.3.4 Ph ng pháp ki m tra tính nh y c m i v i kháng sinh c a vikhu nE. coli phân l p c khu nE. coli phân l p c
Cách ch n kháng sinh
Vi c l a ch n kháng sinh s d ng ki m tra tính nh y c m c aE. coli c a vào:
Phác u tr b nh tiêu ch y cho heo con các tr i ch n nuôi.
Các quy trình chu n th c hi n ang áp d ng trên th gi i v th nghi m tính nh y c m kháng sinh Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI, 2011).
Chu n b canh khu n
Vi khu n sau khi c nh danh qua ph n ng sinh hóa, c ria c y trên a th ch môi tr ng NA r i cho vào t m 370C trong 24 gi . Sau ó, dùng que c y l y m t l ng nh t khu n l c vi khu n a vào ng nghi m có ch a 2ml dung d ch n c mu i sinh lý 0,9% ã c vô trùng, l c u.
Quan sát b ng m t, so sánh c c a canh khu n trong ng nghi m v i c c a ng nghi m ch a dung d ch chu n Mac Farland 0,5 (108cfu/ml) cho n khi t ng ng nhau.
Ph ng pháp th c hi n kháng sinh
d ng ph ng pháp khu ch tán trên a th ch c a Kirby Bauer. Dùng que m bông vô trùng nhúng vào canh khu n ã chu n b , dàn u vi khu n lên trên a th ch môi tr ng Mueller Hinton Agar (MHA). Ch cho m t th ch khô r i dùng k p vô trùng g p các a gi y t m kháng sinh c n ki m tra lên trên m t th ch, m i a kháng sinh t cách nhau 2,5 - 3 cm và cách thành a petri 2 - 2,5 cm, th ch trong a ph i có dày 3,5 - 4 mm không làm sai ch k t qu . Sau ó cho a th ch ã t kháng sinh vào t m 370C trong 24 gi r i l y ra c k t qu (Hình 3.5).
c k t qu kháng sinh
Vi c c k t qu kháng sinh c th c hi n b ng cách o ng kính vòng vô khu n r i em so sánh v i b ng tiêu chu n Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2011).
ng 3.2: B ng tiêu ng kính vòng vô khu n c a m t s lo i kháng sinh (CLSI, 2011) ng kính vòng vô khu n (mm) Tên kháng sinh Ký hi u Hàm l ng kháng sinh (µg) Kháng ) Trung bình Nh y ) Ceftazidime Norfloxacin Amoxicilin/clavulanic acid Gentamicin Colistin Bactrim Ampicillin Cz Nr Ac Ge Co Bt Am 30 30 10 10 10 10 25 17 12 13 12 11 10 13 18-20 13-16 14-17 13-14 12-16 11-15 14-16 21 17 18 15 17 16 17
3.3.5 Ph ng pháp b trí thí nghi m u tr b nh tiêu ch y nghi do E. coli gây ra trên heo con
a vào k t qu ki m tra tính nh y c m i v i kháng sinh c a các ch ng vi khu nE. coli phân l p c và m t s phác u tr b nh tiêu ch y cho heo con t i các tr i ch n nuôi heo thu c thành ph C n Th . Chúng tôi ch n ra t s b y heo con có bi u hi n tiêu ch y nghi doE. coli gây ra, heo con b nh ph i t ng ng ngày tu i, tr ng l ng, th tr ng. Heo c xem là kh i nh khi không có bi u hi n tiêu ch y. Trong m i b y chúng tôi ch n ra 4 heo có bi u hi n tiêu ch y c tr ng c a b nh ti n hành u tr theo 2 phác ,
i phác l p l i 4 l n, t ng s heo cho 1 phác u tr là 8 con.
ng 3.3: Phác u tr b nh tiêu ch y nghi doE. coli trên heo con
Phác heo u
tr (con) Tên thu c Li u l ng ng c p (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Li u trình
Multibio 1ml/10kgP/ngày IM
I 8 Vime - Subtyl 1g/10kgP/ngày Tr n vào th c
n 3 ngày Electrolyte Pha vào n c
ng
Coli - Norgent 2g/10kgP/ngày PO
II 8 Vime - Subtyl 1g/10kgP/ngày Tr n vào th c
n 3 ngày Electrolyte Pha vào n c
ng
Phác I s d ng thu c Multibio c a công ty Virbac
Phác II s d ng thu c Coli Norgent c a công ty Vemedim IM: Intramuscular injection, H p thu qua ng b p th t PO: Per os, H p thu qua ng tiêu hóa
3.3.6 Ch tiêu theo dõi
l heo con m c b nh tiêu ch y huy n C và Th i Lai, TP. C n Th .
l nhi m E. coli trên phân heo con tiêu ch y theo a m và theo lo i heo con.
l d ng tính c a E. coli trong m u môi tr ng.
t qu nh danh các ch ng E. coli K88, K99, 987P trong phân heo con tiêu ch y theo a m và theo lo i heo con.
t qu nh danh các ch ngE. coli K88, K99, 987P trong m u môi tr ng.
Tính nh y c m c a vi khu nE. coli phân l p c v i m t s lo i kháng sinh.
Hi u qu u tr b nh tiêu ch y heo con c a 2 phác .
3.3.7 Ph ng pháp x lý s li u
li u c phân tích th ng kê v i ph n m m Minitab 14.0 (ph ng pháp Chi - Square Test khi s li u >5) và ph n m m Microsoft office Excel 2003 (ph ng pháp Chi - Square Yates khi s li u <5).
CH NG 4
T QU VÀ TH O LU N
4.1. K t qu kh o sát t l heo con tiêu ch y m t s tr i ch n nuôi heoi thành ph C n Th . i thành ph C n Th .
tài c th c hi n t tháng 08/2013 n tháng 11/2013, ti n hành quan sát th c t trên 2.778 heo con theo m và heo cai s a ánh giá tình hình b nh tiêu ch y trên heo con t i TP. C n Th . K t qu c th hi n qua B ng 4.1.
ng 4.1: K t qu kh o sát t l heo con tiêu ch y m t s tr i ch n nuôi heo i thành ph C n Th
heo con tiêu ch y a m S heo con kh o sát SL (con) TL (%) 1.351 484 35,82 Th i Lai 1.427 436 30,55 (P = 0,003) ng c ng 2.778 920 33,11 Ghi chú: SL: s l ng, TL: t l
t qu B ng 4.1 cho th y t l tiêu ch y trên heo con là khá cao (33,11%), s t l tiêu ch y trên heo con cao nh v y là do th i m ti n hành l y m u là vào mùa m a, các y u t ngo i c nh không thích h p (nhi t th p, m cao) và thay i t ng t tác ng x u n c th heo con, c bi t là heo con theo m . Theo ào Tr ng t (1999), heo con các c quan u ch a thành th c v ch c n ng nh h tiêu hóa, h mi n d ch, c bi t là h th n kinh, do