2.2.3.1. Bố trí thí nghiệm
Động vật được chia thành 5 nhóm:
Nhóm chứng bệnh lý ( nhóm mô hình OVX ): chuột được phẫu thuật cắt buồng trứng hai bên và được uống nước trong suốt quá trình nghiên cứu.
Nhóm chứng sinh lý ( Sham ): chuột được phẫu thuật như nhóm gây mô hình nhưng không cắt buồng trứng hai bên và được uống nước trong suốt quá trình nghiên cứu.
Nhóm uống cao chiết cồn 90° mạn kinh tử liều tương đương 1,6 g dl/kg. ( OVX + VT 1,6 g/kg )
Nhóm uống cao chiết cồn 90° mạn kinh tử liều tương đương 3,2 g dl/kg. ( OVX + VT 3,2 g./kg )
Nhóm uống thuốc chuẩn Progynova liều 0,0005 g/kg. ( OVX + Progynova 0,0005g/kg ).
2.2.3.2. Tiến hành
Phẫu thuật cắt buồng trứng hai bên ( gây mô hình OVX ):
Bước 1: Gây mê chuột bằng diethyl ether.
Bước 2: Chuột nằm sấp, bộc lộ và sát trùng vùng mổ.
Bước 3: Mổ bộc lộ và cắt cả 2 bên buồng trứng. Đường mổ gọn dọc theo hai bên cột sống, dài 1cm, cách cột sống 0,5cm, cách gốc đuôi 3cm. Qua da, lớpdưới da, lớp cơ, gạt bỏ lớp tổ chức mỡ ta sẽ thấy buồng trứng chuột có màu trắng hồng, kích thước 2 – 3mm, hình đa cung.
Bước 4: Khâu tổ chức liên kết, cân cơ thành bụng, lưng theo lớp; khâu da và sát trùng tại chỗ bằng dung dịch betadine 10%.
Bước 5: Chuột sau phẫu thuật được đánh dấu rồi đưa vào chuồng ủ ấm và theo dõi sau mổ đến khi động vật tỉnh táo trở lại. Sau mổ 7 ngày chuột có thể đưa trở lại nuôi chung với các chuột khác trong nhóm và được điều trị như đã trình bày ở trên.
2.2.3.3. Tiêu chí đánh giá
Được tiến hành sau 10 – 12 tuần phẫu thuật và điều trị thuốc, bao gồm:
Đánh giá tác dụng giảm lo lắng bằng phương pháp theo dõi hoạt động tự nhiên của chuột bằng máy đếm hồng ngoại: Hai tuần sau khi phẫu thuật, chuột được chia thành 5 lô như trong phần bố trí thí nghiệm. Tiếp theo, chuột được điều trị bằng mẫu nghiên cứu và thuốc chuẩn Progynova trong 1 tuần. Ngày thứ 8 sau khi chuột uống mẫu nghiên cứu/ progynova/ nước sẽ được đánh giá khả năng hoạt động tự nhiên bằng máy đếm hồng ngoại. So sánh khả năng hoạt động của chuột giữa các nhóm đối chứng và nhóm nghiên cứu. Đánh giá hành vi cải thiện trí nhớ bằng thử nghiệm mê lộ nước Morris: Một tuần sau khi đánh giá khả năng vận động, chuột tiếp tục được đánh giá hành vi cải thiện trí nhớ/nhận thức bằng thử nghiệm mê lộ nước Morris.
Thử nghiệm mê lộ nước Morris được thực hiện theo phương pháp của Morris đã được sửa đổi (Morris 1984). Nội dung này được thực hiện tại mê lộ nước Morris. Mê lộ là một bể hình tròn, có đường kính 1,1 m, chiều cao 30 cm. Lượng nước trong mê bể duy trì ở mức 15 cm, nhiệt độ nước khoảng 20o
C trong suốt quá trình thí nghiệm. Platform được đặt trong phòng có đặt sẵn các hình ảnh để định hướng không gian cho chuột trong quá trình học tập. Vị trí của các hình ảnh này không được thay đổi trong suốt quá trình chuột học tập. Một platform có đường kính 7,5 cm, làm bằng nhựa trong suốt, được đặt tại một góc phần tư của mê lộ. Toàn bộ thời gian chuột cần phải học là 8 ngày, bao gồm:
Bài tập này được tiến hành trong 7 ngày, chuột sẽ được được luyện tập nhớ không gian (training trial) khi platform đã được đặt dưới mặt nước 1cm. Mỗi ngày chuột phải tập 3 lần, mỗi lần chuột được đặt vào một trong 3 góc phần tư còn lại của mê lộ. Nếu trong 60 giây chuột không tìm được platform, chúng sẽ được hướng dẫn để tìm platform. Khi đến được platform, chuột sẽ được ở đó 20 giây. Khoảng cách giữa các lần tập là 1 phút, trong thời gian này chuột nhanh chóng được lau khô và sưởi ấm. Toàn bộ quá trình chuột tập bài được ghi lại bằng camera, số liệu sẽ được tính toán để biết được thời gian tiềm ẩn để chuột có thể tìm thấy platform. Số liệu mỗi ngày sẽ được tính bằng giá trị trung bình của 3 lần luyện tập đối với mỗi chuột.
Bài tập không có platform:
Đến ngày thứ 8 sau bài tập nhìn thấy platform, chuột sẽ được tập thử lại trí nhớ (probe trial). Trong bài tập này, platform được bỏ ra ngoài, chuột được bơi trong mê lộ 1 lần duy nhất trong 60 giây. Chuột sẽ nhớ lại vị trí của platform và có xu hướng bơi lâu hơn tại góc một phần tư của mê lô có platform được đặt từ những ngày tập trước. Camera sẽ ghi lại và phân tích thời gian chuột bơi tại mỗi góc phần tư của mê lộ.
Cân trọng lượng tử cung – vòi trứng:
Chuột sau khi đã đánh giá hành vi sẽ bị giết, bóc tách tử cung – vòi trứng và cân trọng lượng.