Cho 5g dược liệu vào bình nón, thêm 50ml EtOH 90º, đun hồi lưu cách thủy đến sôi trong 10 phút, lọc nóng. Dịch lọc thu được đem làm phản ứng định tính flavonoid, coumarin.
Định tính flavonoid:
o Phản ứng Cyanidin:
Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết cồn, thêm một ít bột magie và nhỏ 4 – 5 giọt dung dịch HCl đặc. Đun cách thủy trong 5 phút.
Kết quả: dịch chiết chuyển sang màu đỏ cam ( phản ứng dương tính ). o Phản ứng với FeCl3 5%:
Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết cồn, sau đó thêm 2 – 3 giọt dung dịch FeCl3 5%.
o Phản ứng với dung dịch kiềm
Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết cồn, sau đó thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%. Xuất hiện kết tủa vàng. Tiếp tục thêm 1ml nước cất, lắc đều lên.
Kết quả: tủa tan hết và màu vàng của dung dịch đậm lên (phản ứng dương tính).
o Phản ứng với hơi NH3
Nhỏ 1 – 2 giọt dịch chiết cồn lên hai miếng giấy lọc, sấy nhẹ đến khô. Quan sát dưới ánh sáng thường thấy màu vàng. Đem hơ một miếng giấy lọc khác lên miệng lọ ammoniac đặc đã mở nắp.
Kết quả: màu vàng của dịch chiết trên miếng giấy lọc đem hơ lên miệng lọ ammoniac đặc đậm hơn ( phản ứng dương tính ).
Kết luận sơ bộ: mạn kinh tử có flavonoid.
Định tính coumarin:
o Phản ứng mở và đóng vòng lacton
Cho vào 2 ống nghiệm nhỏ, mỗi ống 1ml dịch lọc - Ống nghiệm 1: thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10%. - Ống nghiệm 2: để nguyên.
Đun cả 2 ống nghiệm trên nồi cách thủy đến sôi. Quan sát thấy:
- Ống nghiệm 1: xuất hiện tủa đục vàng. - Ống nghiệm 2: trong suốt.
Thêm vào cả 2 ống, mỗi ống 1ml nước cất, lắc đều.
- Ống 1: tủa tan, dung dịch trong suốt, màu vàng của dung dịch đậm lên. - Ống 2: không xuất hiện tủa đục.
Thêm vào ống 1 một vài giọt dung dịch HCl đặc.
Kết quả: không thấy xuất hiện tủa đục ( phản ứng âm tính ). o Phản ứng huỳnh quang
Nhỏ dịch chiết ethanol lên giấy lọc, sau đó nhỏ chồng 1 giọt dung dịch NaOH 10%. Để khô, che một nửa màu vết chất thử bằng một mảnh kim loại rồi đem soi dưới ánh sang tử ngoại ở = 366 nm trong một phút, sau đó bỏ vật che ra. Quan sát.
Kết quả: không có sự khác biệt về cường độ mẫu giữa hai nửa vết chất thử ( phản ứng âm tính ).
Kết luận sơ bộ: mạn kinh tử không có coumarin. Định tính glycoside tim
Cân 5g dược liệu cho vào bình nón dung tích 250ml. Thêm 100ml cồn 25° rồi ngâm trong 24h. Gạn dịch chiết vào cốc có mỏ dung tích 100ml. Tiếp tục loại tạp bằng chì acetat 30%, lọc loại tạp. Dịch lọc được chuyển sang bình gạn, chiết lấy glycoside tim bằng cách lắc với chloroform ( hai lần, 8ml/lần ), lắc kỹ để tách lớp. Gạn lớp chloroform vào một cốc có mỏ đã sấy khô. Chia đều dịch vào 2 ống nghiệm nhỏ đã được sấy khô, bốc hơi dung môi trên nồi bếp cách thủy đến khô. Cắn thu được làm các phản úng hóa học.
o Phản ứng Libermann – Boruchard
Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 1m anhydride acetic, lắc đều cho tan hết cắn. Đặt nghiêng ống nghiêm 45º, cho từ từ theo thành ống 1ml dung dịch acid H2SO4 đặc, tránh xáo trộn chất lỏng trong ống.
Kết quả: không xuất hiện vòng tròn đỏ ở bề mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng ( phản ứng âm tính ).
o Phản ứng Baljet
Pha thuốc thử Baljet: cho vào ống nghiệm dung dịch acid picric 1% : NaOH 10% ( 1: 9 ) lắc đều. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 0,5ml dung dịch EtƯ2OH 90%, lắc đều cho tan hết cắn. Thêm 0,5ml dung dịch thuốc thử Baljet mới pha. So với ống chứng ( không có cắn ).
Kết quả: dung dịch có màu vàng chanh, không có màu đỏ cam ( phản ứng âm tính ).
Kết luận sơ bộ:mạn kinh tử không có glycoside tim. Định tính alkaloid:
Cân 5g dược liệu cho vào bình nón dung tích 250ml. Thêm 20ml dung dịch acid sulfuric 1N. Đun đến sôi, để nguội, lọc. Kiềm hóa dịch lọc bằng NH3 đặc (dùng chỉ thị vạn năng ) đến pH 9 – 10. Sau đó cho dịch lọc đã kiềm hóa vào bình gạn, lắc với chloroform 3 lần, gộp dịch chiết chloroform lại, loại nước bằng Na2SO4 sau đó lắc với dung dịch acid sulfuric 1N 3 lần, mỗi lần 5ml. Lấy dịch chiết acid cho vào 3 ống nghiệm, mỗi ống nghiệm 2ml. Nhỏ vào ống nghiệm 2 – 3 giọt lần lượt các thuốc thử sau:
Ống 1: thuốc thử Mayer
Kết quả: xuất hiện kết tủa trắng ( phản ứng dương tính ).
Ống 2: thuốc thử Dragendorff
Kết quả: xuất hiện kết tủa vàng ( phản ứng dương tính ).
Ống 3: thuốc thử Bouchardat
Kết quả: xuất hiện kết tủa vàng nâu ( phản ứng dương tính ). Kết luận sơ bộ:mạn kinh tử có alkaloid.
Định tính anthranoid: Phản ứng Borntraeger
Cân khoảng 3g dược liệu vào bình nón dung tích 100ml, thêm 20ml dung dịch acid sulfuric 1N, đun sôi cách thủy trong 15 phút. Để nguội, lọc qua giấy lọc gấp nếp, lấy dịch lọc cho vào bình gạn dung tích 100ml. Chiết bằng 5ml chloroform, gạn lấy lớp chloroform cho vào ống nghiệm, bốc hơi dung môi còn khoảng 1ml, thêm 1ml ammoniac 10% lắc đều, không thấy xuất hiện màu hồng ở lớp trên, tiếp tục thêm vào giọt NaOH 10%.
Kết quả: lớp nước không xuất hiện màu hồng ( phản ứng âm tính ). Kết luận sơ bộ:mạn kinh tử không có anthranoid.
Sau khi cất tinh dầu, lọc dịch chiết nước qua giấy lọc gấp nếp. Dịch lọc để làm các phản ứng sau:
Định tính saponin: Phản ứng tạo bọt
Cho vào ống nghiệm to 10ml dịch lọc và lắc mạnh theo chiều dọc ống trong 5 phút, để yên quan sát.
Kết quả: Cột bọt xuất hiện nhưng không bền, tan ngay trong khoảng 1 phút ( phản ứng âm tính ).
Kết luận sơ bộ: mạn kinh tử không có saponin. Định tính tannin:
Ống 1: 2ml dịch lọc, thêm 2 giọt FeCl3 5% (TT).
Kết quả: xuất hiện kết tủa xanh đen ( phản ứng dương tính ).
Ống 2: 2ml dịch lọc, thêm 2 giọt chì acetat 10% (TT).
Kết quả: xuất hiện kết tủa bông trắng ( phản ứng dương tính ).
Ống 3: 2ml dịch lọc, thêm vào giọt dung dich gekatin 1% (TT).
Kết quả: không xuất hiện kết tủa trắng ( phản ứng âm tính ). Kết luận sơ bộ: mạn kinh tử không có tannin.
Định tính acid amin:
Cho vào ống nghiệm nhỏ khoảng 2ml dịch lọc, thêm vài giọt thuốc thử ninhydrin 3%, đun cách thủy 3 phút.
Kết quả: không thấy xuất hiện màu xanh tím ( phản ứng âm tính ). Kết luận sơ bộ: mạn kinh tử không có acid amin.
Định tính acid hữu cơ:
Cho vào ống nghiệm nhỏ khoảng 2ml dịch lọc, thêm một ít tinh thể Na2CO3.
Kết quả: xuất hiện bọt khí ( phản ứng dương tính ). Kết luận sơ bộ: mạn kinh tử có acid hữu cơ. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thêm 1ml dung dịch thuốc thử Fehling A + 1ml dung dich thuốc thử Fehling B vào ống nghiệm chứa 2ml dịch lọc. Đun sôi cách thủy 3 phút.
Kết quả: không xuất hiện kết tủa đỏ gạch.
Kết luận sơ bộ: mạn kinh tử không có đường khử
Bảng 3.1. Kết quả định tính các nhóm chất trong mạn kinh tử bằng phương pháp hóa học
STT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả Kết luận sơ bộ
1 Flavonoid Cyanidin + Có FeCl3 5% + dd kiềm + NH3 đặc +
2 Coumarin Mở, đóng vòng lacton - Không có
Huỳnh quang - 3 Alkaloid Mayer + Có Dragendorff + Bouchardat +
4 Anthranoid Borntraeger - Không có
5 Glycoside tim Libermann – Boruchard - Không có
Baljet -
6 Saponin Tạo bọt - Không có
7 Tannin
FeCl3 5% +
Không có Chì acetat 10% +
dd gelatin 1% -
8 Acid hữu cơ Na2CO3 + Có
9 Acid amin TT Ninhydrin 3% - Không có
Hình 3.3. Sắc kí đồ của tinh dầu mạn kinh tử quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng = 254nm (a), = 366nm (b) và sau khi phun TT vanillin (c).
Chú thích: (-) phản ứng âm tính, (+) phản ứng dương tính.
Nhận xét: Ngoài tinh dầu, mạn kinh tử còn chứa flavonoid, alkaloid, acid hữu cơ.