Chuẩn bị:
Cân, đong các thành phần trong công thức môi trường MRS lỏng (công thức nêu trong mục 2.1.3). Hòa tan các thành phần tan trong nước, phân tán thạch vào dung dịch đựng trong bình nón thích hợp. Đậy kín bằng nút bông (bông không thấm nước). Hấp tiệt khuẩn môi trường ở 115°C trong 20 phút trong nồi hấp tiệt khuẩn. Lấy bình ra khỏi nồi hấp và phân phối môi trường lên các đĩa petri (đã rửa sạch, hấp tiệt khuẩn và sấy khô). Lớp thạch dày khoảng 2mm, bề mặt nhẵn, phẳng. Chờ thạch nguội và đông rắn lại, đậy kín.
Chuẩn bị các ống nghiệm sạch, mỗi ống chứa 9ml dung dịch NaCl 0,9% (kl/tt), đậy kín, hấp tiệt khuẩn ở 115°C trong 20 phút, để nguội xuống nhiệt độ 37 – 40°C.
Xác định số lượng VSV trong 1g nguyên liệu hoặc 1ml dịch nuôi cấy:
- Mẫu nguyên liệu dạng hạt vi nang: Chuẩn bị bình nón chứa 100ml dung dịch Natri citrat 2% (kl/tt), hấp tiệt trùng ở 115°C trong 20 phút, để nguội. Cân chính xác khoảng 1,00g hạt vi nang cho vào bình nón trên, khuấy từ với tốc độ 500
vòng/phút trong khoảng 30 phút ở nhiệt độ phòng đến khi vi nang rã hoàn toàn và phân tán đồng nhất.
- Mẫu nguyên liệu dạng bột: Chuẩn bị bình nón chứa 100ml dung dịch NaCl 0,9% (kl/tt), hấp tiệt trùng ở 115°C trong 20 phút, để nguội. Cân chính xác khoảng 1,00g nguyên liệu rồi cho vào bình nón trên, khuấy từ với tốc độ 500 vòng/phút trong khoảng 10 phút ở nhiệt độ phòng đến khi mẫu phân tán đồng nhất.
Hút chính xác 1,00ml dịch chứa vi khuẩn cần đếm số lượng tế bào, pha loãng vào ống nghiệm chứa 9ml dung dịch NaCl 0,9% đã tiệt trùng thứ nhất, lắc đều. Sau đó lại hút chính xác 1,00ml dịch đồng nhất trong ống nghiệm thứ nhất pha loãng sang ống nghiệm thứ hai, lắc đều. Tiếp tục pha loãng như vậy cho đến nồng độ pha loãng cuối cùng. Cấy trải lên mỗi đĩa petri 0,5ml dịch trong các ống của 3 nồng độ pha loãng cuối cùng, mỗi nồng độ cấy trên 2 đĩa. Ủ các đĩa trong tủ ấm 5% CO2 ở 37±1°C. Sau 48 giờ đếm số lượng khuẩn lạc mọc trên mỗi đĩa petri và lấy giá trị trung bình số khuẩn lạc trong các đĩa ở cùng nồng độ pha loãng (chỉ đếm các đĩa petri có số khuẩn lạc nằm trong khoảng 30 - 300).
Số lượng VSV trong 1g nguyên liệu hoặc 1ml dịch nuôi cấy được tính theo công thức:
= × × + × + ×
×
Trong đó:
X: số VSV có trong 1g hạt hoặc 1 ml dịch nuôi cấy.
An: số khuẩn lạc trung bình trong các đĩa petri cấy nồng độ pha loãng 10n. m: khối lượng mẫu đem tiến hành xác định số lượng (g).
Chương 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1. Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ tinh bột đến thể chất của nguyên liệu probiotic dạng vi nang chứa Lactobacillus acidophilus sau đông khô probiotic dạng vi nang chứa Lactobacillus acidophilus sau đông khô
Nhiều nghiên cứu gần đây đã chứng minh, sử dụng tinh bột như một tá dược độn có khả năng cải thiện tính chất cơ học và sinh học của hạt vi nang Ca-alginat sau đông khô [57]. Các thí nghiệm dưới đây nhằmkhảo sát ảnh hưởng của nồng độ tinh bột đến thể chất của hạt nguyên liệu tạo thành sau đông khô và lựa chọn nồng độ alginat và tinh bột phù hợp nhất để tạo vi nang.