phần trong phụ tử
phần trong phụ tử polysaccharid không tan trong cồn cao độ, kết tủa polysaccharid toàn phần bằng ethanol 96% để loại tạp. Sau đó ly tâm, lọc lấy tủa. Hòa tan tủa trong nước cất thu được dung dịch polysaccharid toàn phần [25], [29], [34], [40], [41], [43], [45]. Ngoài ra chúng tôi còn sử dụng phương pháp siêu âm để tăng khả năng chiết và rút ngắn thời gian chiết.
Dung dịch thử gốc: Cân chính xác khoảng 1,0 g bột Phụ tử cho vào cốc có mỏ 100 ml thêm khoảng 40 ml nước cất. Đun cách thủy ở 90oC trong vòng 1h, siêu âm 20 phút, lọc lấy dịch lọc, phần cắn tiếp tục chiết theo quy trình trên 2 lần nữa mỗi lần 25ml nước cất. Gộp toàn bộ dịch lọc vào bình định mức 100,0ml, bổ sung nước cất tới vạch thu được dung dịch A. Lấy chính xác 5,0 ml dung dịch A cho vào cốc có mỏ thêm khoảng 20ml ethanol 96% để tủa polysaccharid toàn phần. Ly tâm, lọc lấy tủa. Đem tủa hòa tan trong nước cất, chuyển toàn bộ vào bình định mức dung tích 100,0ml thêm nước tới vạch được dung dịch thử gốc.
3.2.1.2. Chuẩn bị dung dịch chuẩn
Các polysaccharid trong phụ tử được cấu tạo từ các monosaccharid là glucose. Khi phản ứng với thuốc thử phenol-sulfuric acid đặc, các polysaccharid bị phân cắt tạo thành các monosaccharid là glucose. Vì vậy chúng tôi sử dụng glucose làm chất chuẩn để định lượng polysaccharid toàn phần trong phụ tử bằng phương pháp đo quang.
Dung dịch chuẩn gốc: Cân chính xác khoảng 100,0mg glucose chuẩn hòa tan trong cốc có mỏ 50ml rồi chuyển vào bình định mức dung tích 100,0ml, thêm nước cất vừa đủ 100ml được dung dịch chuẩn có nồng độ 1 mg/ml. Từ dung dịch này pha loãng bằng nước cất thành dung dịch glucose chuẩn gốc có nồng độ 200 µg/ml.