- Dùng phương pháp chiết nóng bằng nước trên nồi cách thủy để chiết
polysaccharid toàn phần từ phụ tử, lọc, tủa polysaccharid toàn phần bằng EtOH 96% , ly tâm để tách lấy tủa.
- Dùng phương pháp siêu âm sử dụng dung môi EtOH 96% để chiết flavonoid toàn phần từ lá Ô đầu.
- Dùng phương pháp đo quang sử dụng kỹ thuật đường chuẩn để định lượng flavonoid toàn phần trong lá Ô đầu và polysaccharid toàn phần trong phụ tử.
2.3.2. Thẩm định phương pháp phân tích
2.3.2.1. Độ đặc hiệu
Tiến hành quét phổ hấp thụ của 3 mẫu: mẫu trắng, mẫu thử, mẫu chuẩn.
2.3.2.2. Độ tuyến tính
Tiến hành pha dãy dung dịch quercetin chuẩn và glucose chuẩn đo phổ hấp thụ của các dung dịch chuẩn từ đó xây dựng đường hồi quy tuyến tính giữa nồng độ chất chuẩn và độ hấp thụ. Xác định phương trình hồi quy y=ax + b và hệ số tương quan
2.3.2.3. Độ lặp lại
Tiến hành xử lý 6 mẫu bột phụ tử đối với phân tích polysaccharid và 6 mẫu lá đối với phân tích flavonoid song song cùng điều kiện ( chiết xuất, đo quang), xác định kết quả đinh lượng theo đường chuẩn đã xây dựng. Tính độ lệch chuẩn tương đối giữa các giá trị của các lần định lượng (điều kiện RSD <2%).
2.3.2.4. Độ đúng
- Tiến hành: Thêm một lượng chính xác chất chuẩn khoảng 20% chất chuẩn so với lượng có trong mẫu thử sao cho nồng độ hoạt chất vẫn nằm trong khoảng tuyến tính đã khảo sát tiến hành định lượng (n=6). Từ kết quả định lượng tính được lượng chất chuẩn thêm vào và tính tỉ lệ tìm lại.
- Độ đúng của phương pháp đo quang nằm trong khoảng sai số ± 3%, tỉ lệ tìm lại 97,0 – 103,0 %.
2.3.2.5. Giới hạn phát hiện (LOD)
- Dựa vào độ lệch chuẩn của đáp ứng và độ dốc, giới hạn phát hiện được tính theo công thức sau:
a SD LOD3
2.3.2.6. Giới hạn định lượng(LOQ)
- Dựa vào độ lệch chuẩn của đáp ứng và độ dốc, giới hạn định lượng được tính theo công thức sau:
a SD LOQ10 = 3,3 × LOD Trong đó: SD là độ lệch chuẩn của đáp ứng
a là độ dốc của đường chuẩn(hệ số a của phương trình đường chuẩn
y=ax+b)