100 vòng/phút, 24 giờ) với các nồng độ alginat khác nhau
3.1.3. Định tính Enzym có mặt trong dịch sau khi nuôi cấy (ở 37o
C, 100 vòng/phút, 24 giờ) với các nồng độ alginat khác nhau.
Theo các nghiên cứu được công bố, trong môi trường nuôi cấy B. subtilis natto
có nhiều loại enzym khác nhau [11]. Nhiệt độ và thời gian nuôi cấy lần lượt là 37oC và 24 giờ đã được công bố là tối ưu hóa khả năng sinh tổng hợp protease của B. subtilis natto [11], [12], [14], [22]. Vì vậy thí nghiệm tiến hành để sơ bộ xác định sự tồn tại của một số enzym ngoại bào [30].
Dịch nuôi cấy là môi trường canh thang với các thông số được lựa chọn là 37 , trong 24 giờ, tại 100 vòng/ phút.
Theo các nghiên cứu đã công bố có nhiều loại enzym khác nhau trong môi trường nuôi cấy B. subtilis natto [17], [30].
Mục đích : Khảo sát sự tồn tại của Enzym ngoại bào khi nuôi cấy B. subtilis natto trong dịch dịch nuôi cấy (ở 37 , trong 24 giờ, 100 vòng/ phút) chứa hạt cố định.
Tiến hành : Nuôi cấy B. subtilis natto, tạo hạt và nuôi cấy hạt trong môi trường canh thang ở 37 , trong 24 giờ, 100 vòng/ phút. Thu phần dịch trong. Thử khả năng phân giải casein, tinh bột, NaCMC của dịch ở các hạt có nồng độ alginat khác nhau : 2%, 4%.
Ở nồng độ alginat 2% :
Bảng 3.10 : Sơ bộ thử hoạt tính enzym trong dịch nuôi cấy hạt calci alginat 2%
Lần thí nghiệm
Đường kính vòng phân giải casein
Đường kính vòng phân giải tinh bột
Đường kính vòng phân giải NaCMC Dịch Mẫu trắng Dịch Mẫu trắng Dịch Mẫu trắng Lần 1 1,8 (-) 0,85 (-) 0,99 (-) Lần 2 1,82 (-) 0.87 (-) 0,95 (-) Lần 3 1,77 (-) 0,86 (-) 0,96 (-) Lần 4 1,75 (-) 0.86 (-) 0,97 (-) Lần 5 1,8 (-) 0,87 (-) 0,97 (-) Lần 6 1,87 (-) 0,85 (-) 0,96 (-)
Ghi chú (-) : Không xuất hiện vòng phân giải cơ chất
Đơn vị đường kính vòng phân giải cơ chất : cm
Nhận xét:
Kết quả trên cho thấy dịch thu được sau khi nuôi cấy B. subtilis natto (ở 37 , trong 24 giờ, 100 vòng/phút) ở trạng thái cố định hạt calci alginat có nồng độ 2% đều có khả năng phân giải cơ chất casein, tinh bột, NaCMC. Mẫu trắng không cho vòng phân giải cơ chất casein, tinh bột, NaCMC do đó đã loại trừ ảnh hưởng của nền mẫu đến kết quả thí nghiệm.
Điều này chứng tỏ ở trạng thái cố định trong gel có nồng độ alginat 2%, tế bào B. subtilis natto vẫn phát triển bình thường và sinh các Enzym ngoại bào.Trong dịch nuôi cấy hạt cố định có nồng độ alginat 2% có mặt cả protease, amylase và cellulase.
Ở nồng độ alginat 4%:
Bảng 3.11: Sơ bộ thử hoạt tính enzym trong dịch nuôi cấy hạt calci alginat 4%
Lần thí nghiệm
Đường kính vòng phân giải casein
Đường kính vòng phân giải tinh bột
Đường kính vòng phân giải NaCMC Dịch Mẫu trắng Dịch Mẫu trắng Dịch Mẫu trắng Lần 1 1,63 (-) (-) (-) 0,97 (-) Lần 2 1,65 (-) (-) (-) 0,95 (-) Lần 3 1,69 (-) (-) (-) 0.96 (-) Lần 4 1,63 (-) (-) (-) 0,95 (-) Lần 5 1,62 (-) (-) (-) 0,97 (-) Lần 6 1,6 (-) (-) (-) 0,95 (-)
Ghi chú (-) : Không xuất hiện vòng phân giải cơ chất
Đơn vị đường kính vòng phân giải cơ chất : cm
Nhận xét :
Kết quả trên cho thấy dịch thu được sau khi nuôi cấy B. subtilis natto (ở 37 , trong 24 giờ, 100 vòng/phút) ở trạng thái cố định hạt calci alginat có nồng độ 4%, có khả năng phân giải cơ chất casein, NaCMC mà không có khả năng phân giải tinh bột. Mẫu trắng không có vòng phân giải cơ chất do đó đã loại trừ được ảnh hưởng của nền mẫu đến kết quả thí nghiệm. Điều này chứng tỏ ở trạng thái cố định trong gel có nồng độ alginat 4%, tế bào vẫn sinh trưởng và sinh các enzym ngoại bào, tuy nhiên trong dịch nuôi cấy có nồng độ alginat 4% thì có mặt của protease và cellulase mà không có mặt enzym amylase.
Bàn luận :
Các kết quả trên cho thấy cố định tế bào vi khuẩn B. subtilis natto ở nồng độ alginat 2% và 4% thì dịch có khả năng phân giải casein, NaCMC, cố định VSV ở nồng độ alginate 2% có khả năng phân giải tinh bột còn cố định VSV ở 4% không
có khả năng phân giải tinh bột . Điều đó chứng tỏ B. subtilis natto có sinh enzym ngoại bào ( protease, amylase, cellulase) sau khi cố định.
Theo nghiên cứu trên thế giới [32] và kết quả của Đinh Thị Thanh Thảo năm 2013 (tiến hành trên cùng giống vi khuẩn) [6], protease tập trung chủ yếu vào phần dịch nổi hay dịch trong. Có thể thấy, ở nồng độ alginat 2% có các enzym ngoại bào trong dịch nuôi cấy, tuy nhiên ở nồng độ 4% dịch nuôi cấy chỉ có enzym protease và cellulase mà không có enzym amylase..
Kết luận sơ bộ : Số lượng tế bào được cố định trong hạt có nồng độ alginat 4% là
cao hơn so với hạt có nồng độ 2% khoảng 10 lần. Và tế bào B. subtilis natto vẫn sinh trưởng, phát triển, sinh sản và tạo enzym khi được cố định trong gel alginate.