100 vòng/phút, 24 giờ) với các nồng độ alginat khác nhau
2.3.4. Phương pháp sơ bộ thử hoạt tính của các Enzym : Protease, cellulase,
amylase.
a) Phương pháp sơ bộ thử hoạt tính enzym Protease.
Nguyên tắc: Xác định khả năng phân giải Protein của protease trên cơ sở đo vòng phân giải casein trên đĩa thạch bởi việc sử dụng casein làm cơ chất [4].
Tiến hành: Pha 100ml dung dịch chứa 1% casein và 2% thạch trong cốc có mỏ. Thêm 4 giọt xanh methylen vào, khuấy đều và đun cho đồng nhất. Đổ 16ml dung dịch vào các đĩa petri có đường kính 11 cm.
Khi thạch đông lại thì đục thạch thành các giếng thạch có đường kính 0,6cm. Nhỏ 0,05ml dịch mẫu thử vào các giếng thạch. Ủ trong tủ ấm 37 /24 giờ và đọc kết quả bằng các đo vòng phân giải casein [7].
b) Phương pháp sơ bộ thử hoạt tính Enzym amylase.
Nguyên tắc: Xác định khả năng phân giải tinh bột thành các oligosaccharid và đường đơn không bắt màu với thuốc thử Lugol [KI + Iod] của amylase. Dùng tinh bột làm cơ chất xác định bằng cơ sở đo vòng phân giải tinh bột trên đĩa thạch [4].
Tiến hành: Pha 100ml dung dịch chứa 1% tinh bột, 2% thạch trong cốc có mỏ 250 ml, khuấy đều và đun cho đồng nhất. Đổ 16ml dung dịch trên vào các đĩa petri.
Khi thạch đông lại thì đục các giếng thạch có đường kính 0,6cm. Nhỏ 0,05ml dịch lắc hạt vào các giếng thạch. Ủ trong tủ ấm 37 /24 giờ. Dùng Lugol nhỏ lên bề mặt thạch để quan sát vòng phân giải tinh bột [4].
c) Phương pháp sơ bộ thử hoạt tính enzym cellulase.
Nguyên tắc: Xác định khả năng phân giải CMC thành các oligosaccharid không bắt màu với thuốc thử Lugol (KI + Iod) của cellulase. Dùng CMC làm cơ chất xác định bằng cơ sở đo vòng phân giải CMC trên đĩa thạch [2], [4].
Tiến hành: Pha 100ml dung dịch chứa 0,5% CMC, 2% thạch trong cốc có mỏ 250 ml (Chú ý ngâm CMC trương nở hoàn toàn), khuấy đều và đun cho đồng nhất. Đổ 16ml dung dịch trên vào các đĩa petri.
Khi thạch đông lại thì đục các giếng thạch có đường kính 0,6cm. Nhỏ 0,05ml dịch mẫu thử vào các giếng thạch. Ủ trong tủ ấm 37 /24 giờ. Dùng Lugol nhỏ lên bề mặt thạch để quan sát vòng phân giải CMC [4].