1. Khảo sát và lựa chọn điều kiện chạy HPLC - MS cho GF
Trong thực tế chưa có tài liệu nào nghiên cứu về khối phổ của GF, do đó chúng tôi phải khảo sát chọn điều kiện làm việc cho sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và cho Detector MS .
1.1. Chọn điêu kiện làm việc cho HPLC
Qua quá trình khảo sát chúng tôi quyết định chọn điều kiện sắc ký như sau:
Pha tĩnh: Cột Hypersil BDS Cyano (5um, 150*4,6mm) Pha động: MeOH - H2O (6/4) - Focmic Acid 0,2% (v/v) Tốc độ dòng: l,Oml/phút
Thể tích bơm mẫu: 10|al
1.2. Chọn điều kiện làm việc cho Detector MS
Từ mẫu chuẩn GF tinh khiết ta pha thành dung dịch chuẩn có nồng độ 0,1 |Lig/ml và bơm trực tiếp vào Detector.
+ Chế độ chạy MS Fullscan- ESI+ (150 - 650).
+ Đặt nhiệt độ ống phun mao quản bằng ( ES probe Temp ) 550° c.
+ Điện thế ion hóa; 2 kV (Needle Voltate). + Điện thế chóp nón (Cone Voltage) 80V.
Kết quả: Mảnh ion M + (m/z = 375,4) thu được có cường độ tối ưu tại Cone Voltage 80V, đây là mảnh ion căn bản của GF và được lựa chọn để tiến hành nghiên cứu tiếp sau.
Tim e (m in)
G FtrongH T200ppb#1145 RT: 10.01 AV: 1 SB: 2 0.00, 0.00 NL: 4.47E4 F: {0 ,0 }+ c ESI corona sid=80.00 det=1200.00 Full ms (150.00-650.00]
Hình 7: sắc ký đồ chuẩn của GF trong huyết tương ở điều kiện chạy HPLC-MS đã chon.
2. Khảo sát phương pháp định lượng GF trong huyết tương chó thí nghiệm
2.1.Xây dựng đường chuẩn định lượng GF trong huyết tương chó
Chuẩn bị các mẫu dung dịch GF trong huyết tương có nồng độ như sau: 10; 20; 40; 80;100; 120; 150; 170; 200 ppb. Xử lý mẫu như hình 6 và tiến hành phân tích trên hệ thống HPLC-MS như điều kiện à phần 2.1. Kết quả được biểu thị bằng diện tích pic và được trình bày ở bảng 1 .
Bảng 1: Diện tích pic của GF ở các nồng độ khác nhau
STT Nồng độ (ppb) Diện tích pic 1 1 0 24355 2 2 0 49456 3 40 101301 4 80 206648 5 1 0 0 265156 6 1 2 0 315913 7 150 398083 8 170 437758 9 2 0 0 527614
Mối tương quan giữa nồng độ và diện tích pic được thể hiện trên đồ thị hình 8
Diện tích pic
1 0
Nồng độ(ppb)
Hình 8 : Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của diện tích pic vào nồng độ. Phương trình hồi quy: Y = 2641.4x - 2725.6
Trong đó: Y là diện tích Pic.
X là nồng độ GF trong huyết tương.Hệ s ố tương quan: ^ = 0,9995