NGHIÊN CỨU:
1. Hóa chất
- Methanol (Merck, KGaA, 64271 Darmstadt) - Acetonitril (Merck, KGaA, 64271 Darmstadt) - Cloroform (Merck)
- Acid Focmic (Merck)
- Nước cất hái lần đã qua cột khử ion. - Chất chuẩn GF tinh khiết.
- Thuốc Aslem: Lot 01072004, sản xuất tháng 07 năm 2004
2. Dụng cụ
- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao khép khối phổ (HPLC - MS): + Bơm cao áp (Surveyor - Thermo Finnigan).
+ Bơm mẫu tự động - Autosampler (Surveyor - Thermo Finnigan). + Detector MS (Surveyor MSQ - Thermo Finnigan)
+ Cột sắc ký Hypersil BDS Cyano (5 |j,m, 150*4,6 mm),C8, Cjg. - Máy lọc nước siêu sạch ELGA.
- Cân phân tích XB 220 A Precisa (Switzerland). - Tủ lạnh sâu.
- Máy ly tâm Rotoíix 32, Hettich, Germany. - Máy đo pH: pH Meter 3305 Jenway (U K ). - Máy siêu âm Soniclean PTY (Australia). - Máy cất nước hai lần Aquatron, UK. - Micropipet 100|al - lOOOịal, Iml - 5ml. - Dụng cụ thủy tinh.
- Ống nghiệm chống đông máu (EDTA).
3. Động vật thí nghiệm
- Chó đực, khoẻ mạnh, khối lượng 10±0.5kg, mua ở viện vệ sinh dịch tễ trung ương.
4. Phương pháp nghiên cứu
4.1. Thẩm định phương pháp. [2, 26].
Phương pháp phân tích cần được thẩm định về độ đúng, độ chính xác, tính chọn lọc - đặc hiệu, giới hạn định lượng và hàm đáp ứng. Ngoài ra cần lưu ý đến độ ổn định của hoạt chất trong mẫu.
a/ Độ chính xác của phương pháp (Precision):
• Độ lặp lại (Repeatability): Lấy một mẫu huyết tương tại thời điểm bất kì, đánh giá độ lặp lại bằng cách xác định hàm lượng GF trong mẫu và tính độ phân tán của số liệu.
• Độ tái hiện (Reproducibility): Mẫu phân tích được định lượng ở hai thời điểm khác nhau. Đánh giá độ tái hiện thông qua độ lệch chuẩn (SD) và độ lệch chuẩn tương đối (RSD).
Trong thực nghiệm này tính chọn lọc của phương pháp được xác định bằng cách so sánh sắc ký đồ của mẫu phân tích với mẫu huyết tương trắng.
c/ Giới hạn định lượng (Limit of quantification - LOQ).
Hiện nay khái niệm về giới hạn định lượng đã thống nhất rõ ràng. Phần lớn tác giả xác định LOQ từ giới hạn phát hiện (Limit of detetion - LOD). Đó là lượng hoặc nồng độ nhỏ nhất trong mẫu có thể phát hiện được bằng phương pháp đã dùng. Biểu thức tổng quát của giới hạn phát hiện được biểu thị bằng tín hiệu đo nhỏ nhất của mẫu phân tích có thể phân biệt được với mẫu trắng đo trong cùng điều kiện với độ tin cậy 99,8%.
X = Xt b + 3iơ
Trong đó: