2.4.2.1. Phương pháp đánh giá độ trong và màu sắc dung dịch
Tiến hành trên dụng cụ để soi độ trong. Đổ toàn bộ dung dịch vào một ống nghiệm sạch, khô. Lắc nhẹ, tránh không tạo thành bọt khí và quan sát 5 giây trước bảng màu trắng. Tiến hành lặp lại trước bảng màu đen. Yêu cầu cần đạt là dung dịch phải trong suốt, màu vàng nhạt
2.4.2.2. Phương pháp xác định pH
Sử dụng máy đo pH Eutech Instruments pH 510. Đo ba lần và lấy kết quả trung bình (n=3). Chênh lệch giá trị pH được kí hiệu là ΔpH, là hiệu của giá trị pH sau bảo quản trừ đi giá trị pH ban đầu, trong đó:
Giá trị pH ban đầu là giá trị pH của dung dịch thuốc nhỏ mắt ngay sau khi pha.
Giá trị pH sau bảo quản là giá trị pH của dung dịch thuốc nhỏ mắt sau một thời gian bảo quản trong điệu kiện bảo quản nhất định.
Yêu cầu cần đạt là -0,5≤ ΔpH ≤0,5.
2.4.2.3. Phương pháp định lượng moxifloxacin và xác định tỷ lệ tạp tự do
Tiến hành định lượng moxifloxacin và xác định tỷ lệ tạp tự do của dung dịch thuốc nhỏ mắt bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) theo USP 36 [26]. Tiến hành đo 3 lần và lấy kết quả trung bình (n=3).
Dung dịch đệm: Cân chính xác 0,5 g tetra-n-butylamino clorid và 1,0 g kali dihydrophosphat rồi hòa tan trong 1000 mL nước, thêm 2 mL acid phosphoric, khuấy đều. Lọc dung dịch này qua màng lọc cellulose acetat có kích thước lỗ lọc 0,45 µm, siêu âm trong 30 phút.
Mẫu chuẩn: Cân chính xác 0,100 g moxifloxacin hydroclorid rồi hòa tan trong 100 mL nước. Hút chính xác 1 mL dung dịch thu được, cho vào bình định mức 10 mL, thêm dung dịch đệm vừa đủ 10 mL, lắc đều. Lọc dung dịch này qua màng lọc cellulose acetat có kích thước lỗ lọc 0,45 µm.
Mẫu thử: Hút chính xác 1 mL dung dịch chế phẩm, cho vào bình định mức 50 mL, thêm dung dịch đệm vừa đủ 50 mL, lắc đều. Lọc dung dịch này qua màng lọc cellulose acetat có kích thước lỗ lọc 0,45 µm.
Điều kiện sắc ký:
- Cột: Zorbax Eclipse XDB-phenyl, kích thước 150 mm × 4,6 mm (phenyl silica gel, 5 µm).
- Pha động: Methanol - dung dịch đệm. - Chế độ dòng: Gradient (bảng 2.4).
Bảng 2.4: Chế độ dòng định lượng MOX theo phương pháp HPLC
Thời gian (phút) Tốc độ dòng (mL/phút) Dung dịch đệm (%) Methanol (%) 0-30 0,5 69 31 30-31 0,5 69→60 31→40 31-36 0,9 60 40 36-37 0,9 60→69 40→31 37-42 0,5 69 31 - Thể tích tiêm mẫu: 20 µL. - Detector UV bước sóng 293nm. Công thức tính
Hàm lượng moxifloxacin tính theo phương pháp HPLC như sau: X (%) = 𝑆𝑇 .𝑚𝐶
𝑆𝐶 . 0,545 .50.100
(0,545 g moxifloxacin hydroclorid tương ứng với 0,5 g moxifloxacin pha loãng thành dung dịch có nồng độ khoảng 100 µg/mL)
Trong đó:
X: hàm lượng moxifloxacin còn lại tính theo lượng ghi trên nhãn.
SC, ST: diện tích pic moxifloxacin trong dung dịch chuẩn và dung dịch thử tương ứng (mAU.s).
50: hệ số pha loãng.
Tỷ lệ tạp được lấy từ kết quả phân tích diện tích pic bằng phần mềm kèm theo máy HPLC.
Yêu cầu cần đạt là 90%≤ X (%) ≤ 110% và tỷ lệ tạp không quá 1,5%.