- Khoảng tin cậy: x± X S
30TINH TUYEN TINH cot moi #8 [modified by Adm
50.0-mAU mAU
Mau trang 16/^ UV_ViS_
WVL:216nm
-5.a
Hình 2.5: sắc ký đồ mẫu trắng.
Sắc ký đồ của hỗn hợp acid succinic, DHA và artesunat cho các pic cân xứng và tách rời hẳn nhau.
Hình 2,6: sắc ký đồ của hỗn hợp acid succinic, DHA và artesunat.
Độ phân giải giữa các pic acid succinic, DHA và artesunat được ghi trong bảng 2.5.
Bảng 2.5: Độ phân giải giữa các pic acid succinic, artesunat và DHA.
Chất Thời gian lưu Độ phân giải Rs
Acid succinic 2,710 2,33
Artesunat 4,350 2,44
DHA 12,550 6,04
Kết quả khảo sát cho thấy phương pháp định lượng acid succinic trong artesunat nguyên liệu do chúng tôi xây dựng có tính đặc hiệu cao. Artesunat và DHA cũng như các tạp chất khác không ảnh hưởng tới kết quả định lượng.
2.2.2.S. Xác định giói hạn định lượng acid succinic theo phương pháp xây dựng
Giới hạn định lượng của acid succinic là nồng độ thấp nhất của acid succinic mà ta có thể định lượng đảm bảo tính đúng và tính chính xác theo phưcmg pháp xây dựng.
Theo ước tính giới hạn định lượng acid succinic ở khoảng 0,025% so với artesunat nguyên liệu nồng độ 2 mg/ml.
Vì vậy chúng tôi tiến hành xác định đáp ứng của acid succinic ở 5 nồng độ liền kề đó là: 0,025% (0,0005 mg/ml); 0,05% (0,001 mg/ml); 0,1% (0,02 mg/ml); 0,2% (0,04 mg/ml); 0,3% (0,06 mg/ml). Kết quả được ghi ở bảng 2.6.
Bảng 2.6: Kết quả khảo sát đáp ứng của acid succinic ở 5 nồng độ gần giới hạn định lượng.
Nồng độ (%) 0,025 0,05 0,1 0,2 0,3
Diện tích
(mAu.min) 0,01277 0,02506 0,05019 0,1012 0,1534
Phưoìig trình đường chuẩn;
y = 0,51 1 5 x -0,0005 (1) r = 0,9999.
y là diện tích pic của acid succinic. X là nồng độ của acid succinic.
ở nồng độ thấp nhất 0,025% tiến hành xác định 5 kết quả và tính độ lệch chuẩn. Kết quả được ghi ở bảng 2.7.
Bảng 2.1 \ Kết quả khảo sát đáp ứng của acid succinic ở nồng độ 0,025%. TT Diện tích (mAU.min) Thống kê
1 0,01398 S t b = 0,01277 SD = 0,001012 2 0,01207 3 0,01203 4 0,01378 5 0,01201
Ta có phương trình tín hiệu của giới hạn phát hiện là: Y = 3SD + b = 3SD - 0,0005 (2) Từ (1) và (2) ta có cách tính nồng độ giới hạn phát hiện là: 3SD - 0,0005 = 0,5 12x l o d - 0,0005 => X l o d = 3SD/0,5115. Vậy nồng độ giới hạn định lượng là:
Xloq= 10x l o d/3 = 0,0198% hay 3,96.10'^ mg/ml.
2,22.6. Xây dựng cách xác định acid succinỉc trong artesunat khi không có acid succinỉc chuẩn (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trong kiểm nghiệm thuốc để thuận tiện cho việc xác định tạp chất thường người ta không sử dụng chất chuẩn tạp mà lấy đáp ứng pic tạp nhân với hệ số biến đổi để tính ra hàm lượng phần trăm của tạp.
Do hàm lượng artesunat và acid succinic trong mẫu thử không ổn định vì vậy chúng tôi tiến hành xác định hệ số biến đổi F dựa vào khoảng thay đổi nồng độ của các chất này.
- Xác định khoảng tuyến tính của artesunat nguyên liệu.
Tiến hành xác định khoảng tuyến tính của artesunat trong khoảng 80% - 120% nồng độ làm việc 2 mg/ml (1,6 mg/ml - 2,4 mg/ml) theo phưcmg pháp xây dựng.
Tiến hành: pha các dung dịch artesunat có các nồng độ: 1,6 mg/ml; 1,8 mg/ml; 2,0 mg/ml; 2,2 mg/ml; 2,4 mg/ml. Mỗi nồng độ tiến hành sắc ký 3 lần theo quy trình lấy kết quả trung bình. Kết quả khảo sát tính tuyến tính của artesunat được thể hiện ở bảng 2.8; hình 2.8.
Bảng 2.8: Kết quả khảo sát tính tuyến tính của artesunat. Nồng độ
(mg/ml) 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4
Diện tích