- Khoảng tin cậy: x± X S
2.2.1.Xác định hàm iượng acid succinic trong artesunat nguyên liệu
2.2.1.1. Phương pháp định lượng acid succinic khi định lượng artesunat bằngHPLC
Áp dụng phưcỉng pháp định lượng artesunat bằng HPLC được xây dựng trong Luận văn Thạc sỹ Dược học (2005) của Trần Thị Lan Hương [8]:
Điều kiện sắc ký:
- Cột Nucleosil C18 (250 x4,6 mm), cỡ hạt 5 |am. - Pha động; M ethanol: Đệm phosphat pH 7,1 (70:30). - Tốc độ dòng: 0,8ml/phút.
- Thể tích tiêm: 20[ú.
- Bước sóng phát hiện: 216 nm.
- Nhiệt độ phân tích: Nhiệt độ phòng.
Kết quả tách được artesunat, acid succinic, DHA trong đó pic acid succinic cân xứng, gọn, tách hoàn toàn ra khỏi các pic khác. Do vậy chúng tôi đã chọn chương trình sắc ký này để xác định hàm lượng acid succinic trong artesunat nguyên liệu.
2.2.1.2. Thử tính thích hợp của hệ thống
Tính thích hợp của hệ thống HPLC được biểu thị qua hệ số bất đối xứng và độ lệch chuẩn tương đối (RSD%) củá 6 phép thử song song đối với thời
gian lưu và diện tích pic.
Cân chính xác khoảng 15,0 mg acid succinic cho vào bình định mức 25 ml, thêm khoảng 15 ml hỗn hợp MeOH : HjO (70 : 30) đã siêu âm đuổi khí, lắc đều cho tan hết. Thêm hỗn hợp dung môi tới vạch. Lấy 4,0 ml dung dịch trên cho vào bình định mức 10 ml, thêm dung môi đến vạch được dung dịch acid succinic 0,24 mg/ml (dung dịch A).
Cân chính xác khoảng 40,0 mg artesunat đối chiếu (nồng độ 98,6%) do Viện kiểm nghiệm sản xuất cho vào bình định mức 20ml, thêm Iml dung dịch A, thêm 10 ml dung môi, lắc kỹ, siêu âm 5 phút. Thêm dung môi cho đủ thể tích ta được dung dịch artesunat 2 mg/ml có 0,6% acid succinic. Lọc qua màng lọc 0,45 yư-m, dùng dịch lọc tiêm sắc ký.
Tiêm 6 lần mẫu artesunat có thêm acid succinic đã pha ở trên vào hệ thống sắc ký đã chạy ổn định với pha động 30 phút. Tiến hành sắc ký theo quy trình đã chọn. Thời gian lưu, diện tích pic và hệ số bất đối của pic acid succinic thu được trên sắc đồ được ghi ở bảng 2.1.
Bảng 2.1: Kết quả khảo sát tính thích hợp của hệ thống.
STT Pic acid succinic
Thời gian lưu (phút) Diện tích pic
(mAU) Hệ số bất đối 1 2,767 0,3079 1,12 2 2,783 0,3063 1,12 3 2,785 0,3068 1,14 4 2,805 0,3061 1,15 5 2,792 0,3075 1,11 6 2,776 0,3081 1,17 RSD(%) 0,47 0,27
Kết quả khảo sát tính thích hợp của hệ thống HPLC cho thấy độ lệch chuẩn tương đối (RSD%) của thời gian lưu và diện tích pic acid succinic trong các phép thử đều < 2%, các giá trị của hệ số bất đối dao động từ 1,11 đến
1,17. Điều đó chứng tỏ hệ thống HPLC mà chúng tôi sử dụng là thích hợp để định lượng acid succinic trong nguyên liệu artesunat.