Các sản phẩm thu được sau khi cất loại hết dung môi trong chân không là cặn n-hexan (ký hiệu là R2), cặn CH2Cl2 (ký hiệu là R3). Một phần của cặn dịch chiết CH2Cl2 trước tiên được chạy sơ bộ qua một cột Sephadex LH-20, rửa giải bằng methanol để loại các chất diệp lục. Phần không chứa các chất diệp lục được đem tách trên cột silica gel, rửa giải với hệ dung môi n- hexan/acetone có hàm lượng acetone tăng dần từ 5% đến 30%. Kết quả cho 6 phân đoạn gộp F1 - F6. Phân đoạn F2 được làm sạch nhiều lần qua các cột Sephadex LH-20 (dung môi rửa giải là methanol) và silica gel (dung môi rửa giải là 15% acetone trong n-hexan) thu được hoạt chất SBVN. Phổ hồng ngoại của SBVN có các dải hấp thụ đặc trưng ở 3440 (nhóm chức OH), 1787 (nhóm γ-lacton), 1714 (nhóm este), và 1639 (vòng benzen). Phân tích các phổ 13C NMR và DEPT cho thấy phân tử có 34 nguyên tử carbon bao gồm 4 nhóm CH3, 5 nhóm CH2, 15 nhóm CH, 3 nhóm C=O (δC 166,44; 167,32;
174,01) cùng 7 carbon bậc bốn khác. Phổ khối lượng EIMS cho pic có số khối cao nhất tại m/z 574, ứng với ion phân tử M+. Các dữ kiện này dẫn đến công thức phân tử là C34H38O8. Phổ HMQC cho phép ta gán mỗi nguyên tử carbon với các nguyên tử hiđro gắn trực tiếp với nó.
Phân tích các dữ liệu phổ cho phép dự đoán một cấu trúc khung ditecpen tương tự như khung của các hợp chất scutebarbatine A và scuterivulactone C1 được phân lập trước đây từ các cây Bán chi liên của Trung Quốc. Việc phân tích các chuỗi gắn kết nguyên tử dựa trên các phổ COSY và HMBC cho phép ta thấy phân tử có một mảng decalin gắn với một mảng spirolacton.
(A) (B)
Hình 3. (A) Cấu trúc hóa học của hoạt chất SBVN; (B) Hình ảnh tinh thể hoạt chất SBVN
Phổ khối lượng EIMS của chất này cung cấp các chứng minh bổ sung cho các kết quả trình bày ở trên với các mảnh đặc trưng ở m/z 574 (M+), m/z 452 (M+ - C6H5COOH), m/z 105 (C6H5CO+), và m/z 77 (C6H5+). Các căn cứ này, kết hợp với kết quả phân tích toàn bộ các phổ NMR một chiều và hai chiều, cho phép chúng tôi tìm được cấu trúc của hợp chất SBVN là 6,11- dibenzoyloxy-8,13-epoxy-7-hydroxy-3(4)-cleroden-15,16-olide và có cấu trúc hóa học như hình 3.
Sau khi được tách chiết, một số tính chất cơ bản của hoạt chất SBVN đã được xác định như sau: Hợp chất SBVN kết tinh trong hexan/acetone cho các tinh thể không màu, có điểm nóng chảy là 218 - 2190C, trọng lượng phân tử là 574.
- Khả năng hoà tan của SBVN trong nước và trong PBS
Hoạt chất này tan tốt trong Dimethyl Sulfoxide (DMSO), rất kém tan trong nước và trong Phosphate Buffer Saline (PBS).
- Nồng độ bão hoà của SBVN trong nước và trong PBS
Không xác định được vì SBVN hầu như không tan trong nước và trong PBS. Việc làm tan SBVN chỉ có thể thực hiện khi sử dụng máy khuấy
siêu âm.
- Điều kiện tối ưu để lưu giữ SBVN
Hoạt chất SBVN tồn tại bình thường trong điều kiện nhiệt độ phòng, vì vậy có thể cất giữ ở điều kiện bình thường, không cần giữ ở 4oC hoặc ở nhiệt độ thấp hơn.